埃博拉出血熱疫苗及新藥的研究進展

劉子琪 孫同文 萬有棟 闞全程

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 河南鄭州 450052)

埃博拉出血熱(ebola hemorrhagic fever，EBHF)是由埃博拉病毒引起的致命病毒性出血熱，為人獸共患傳染病，病死率高達90%。1976年該病首次于前扎伊爾和蘇丹發(fā)現(xiàn)，距今已爆發(fā)疫情9次[1－2]。截止到2015年3月1日，疫情最嚴(yán)重的利比里亞、塞拉利昂和幾內(nèi)亞3國共感染23 934例，死亡9 792例[3]，至此西非EBHF流行造成的感染及死亡人數(shù)均達歷史最高。WHO宣布進入國際緊急狀態(tài)，各國派遣醫(yī)療衛(wèi)生支隊進行援非行動，醫(yī)藥研究機構(gòu)加快疫苗及最新藥物的研發(fā)，EBHF疫情逐漸得到控制，死亡人數(shù)較前明顯降低。目前由于對EBHF的發(fā)病機制還不夠清楚，在治療方面還沒有針對EBHF的特異性治療，有少量疫苗與藥物被批準(zhǔn)用于臨床緊急狀況，其余仍處于包括非靈長類動物等實驗研究中。

1 綜合治療

在治療方面，目前尚無特效治療方法，主要采用對癥支持治療，包括維持水電解質(zhì)平衡，預(yù)防和控制出血，控制繼發(fā)感染，有效維護各臟器功能，積極處理腎衰竭、出血和DIC等并發(fā)癥，可提高EBHF患者的治愈率。WHO表示，恢復(fù)期患者的血清與免疫球蛋白可作為疾病爆發(fā)階段的經(jīng)驗性治療藥物[4]。

2 病毒疫苗

現(xiàn)階段，處于研發(fā)和臨床試驗階段的疫苗共20多種，可分為傳統(tǒng)疫苗和新型疫苗兩大類，這些疫苗幾乎只針對病死率最高的扎伊爾埃博拉病毒。

2.1 傳統(tǒng)病毒疫苗 傳統(tǒng)的病毒疫苗包括滅活病毒疫苗和減毒活病毒疫苗。在1976年發(fā)現(xiàn)埃博拉病毒后，滅活疫苗的研究和實驗就已經(jīng)開展，把滅活的埃博拉病毒注入實驗動物體內(nèi)，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，進而達到保護作用。不過，在非人靈長類動物的實驗中基本以失敗告終[5－6]，而且考慮到滅活不徹底可能對人體造成的傷害，滅活疫苗在后續(xù)的疫苗研發(fā)過程中基本不予考慮。減毒活疫苗是一種病毒缺陷株。2008年Halfmann等[7]用反向遺傳學(xué)研發(fā)的一種基因重組的減毒活疫苗證明與野毒株有95%的相似性，能夠模擬病毒完整的感染過程，對人體的保護力比較強，且在遺傳學(xué)上十分穩(wěn)定，這點并不同于傳統(tǒng)意義上的減毒活疫苗。目前的實驗已充分證明該疫苗能使小鼠和豚鼠免遭埃博拉病毒的感染，且十分安全，不過對于非人靈長類動物，它的保護作用還未得到驗證，需要進一步跟蹤研究。

2.2 新型疫苗 新型疫苗種類較多，主要可分為亞單位疫苗、核酸疫苗和病毒載體疫苗等。亞單位疫苗是通過化學(xué)分解或有控制性的蛋白質(zhì)水解方法，提取細(xì)菌、病毒的特殊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，篩選出不含有核酸，具有免疫活性的片段制成的疫苗，包括重組表達出的特定的病毒抗原蛋白和病毒樣顆粒兩類疫苗。Konduru等[8－9]實驗研究證明，兩種疫苗都是高效且安全的，亞單位疫苗僅有幾種主要表面蛋白質(zhì)，避免產(chǎn)生許多無關(guān)抗原誘發(fā)的抗體，從而減少疫苗的副反應(yīng)和疫苗引起的相關(guān)性疾病。不足之處是該疫苗的免疫原性較低，需與佐劑合用才能產(chǎn)生好的免疫效果。不過，該疫苗在非人靈長類動物中的保護作用還不得而知。病毒載體疫苗包括非復(fù)制型載體疫苗和復(fù)制型載體疫苗。在這類疫苗研發(fā)的研究報道中，學(xué)者們[10－12]關(guān)注的重點圍繞在腺病毒載體疫苗、DNA疫苗、復(fù)制缺陷型病毒疫苗這幾個方面。目前發(fā)展最快的兩種潛在疫苗ChAd 3－eboz和VSV－ZEBOV已進入Ⅲ期臨床試驗，且預(yù)計2015年上半年進行大規(guī)模的商業(yè)化生產(chǎn)[13]。但迄今為止，尚無美國食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration，F(xiàn)DA)批準(zhǔn)的可用于人體的疫苗[14]。

3 抗病毒藥物

根據(jù)抗病毒藥物作用靶標(biāo)的不同，抗病毒藥物可分為抑制病毒入侵細(xì)胞和抑制病毒復(fù)制兩類藥物。

宿主細(xì)胞膜蛋白為病毒侵入抑制劑藥物的重要靶點，NPC1蛋白與糖蛋白GP是埃博拉病毒的特異性受體。體外研究顯示，尼曼－匹克病患者的神經(jīng)母細(xì)胞以及雌激素受體調(diào)節(jié)劑、膽固醇合成酶抑制劑、抗抑郁藥均可抑制埃博拉病毒進入細(xì)胞，其作用機制可能就與NPC1蛋白有關(guān)[15]。

研究證明，糖蛋白GP可作為抑制病毒進入宿主細(xì)胞的結(jié)合性受體[16]。單克隆抗體就是從不同位置與病毒的糖蛋白GP結(jié)合，從而抑制病毒基因組進入宿主細(xì)胞，并結(jié)合新生病毒，阻礙其芽生或從細(xì)胞表面釋放，從而達到抑制病毒入侵的目的。目前世界上已得到認(rèn)可的單克隆抗體包括ZMapp、TKMEbola和法匹拉韋，美國FDA已經(jīng)批準(zhǔn)ZMapp和TKM－Ebola在緊急情況下可用于確診或者疑似感染埃博拉病毒的患者。2015年2月27日美國政府宣布，2014年埃博拉疫情高峰期名聲大噪的藥物ZMaPP，正式于利比里亞開始臨床試驗[17]。

目前有研究得出，組織蛋白酶抑制劑(E64/CA074)可抑制病毒侵入，但因研究人群數(shù)較少，作用機理不夠清楚，其療效無法得到充分驗證。Geisbert等[18]研究發(fā)現(xiàn)，Small interfering RNA能夠在埃博拉病毒的聚合酶L、VP24和VP35區(qū)域與基因序列結(jié)合，干擾病毒的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。

在我國，科研人員歷時5 a研制出一種新型抗病毒藥物JK－05。研究表明，該藥在細(xì)胞和動物水平感染試驗中均具有抗埃博拉病毒活性。該藥物雖已完成臨床前研究，并在適用于廣譜抗流感時完成了臨床安全性評價，但對于EBHF的治療仍僅限于緊急情況下使用[19]。

4 中藥治療

中醫(yī)幾千年來在防治疫病中積累了豐富的經(jīng)驗，特別在抗擊非典和禽流感過程中發(fā)揮了重大作用，受到普遍認(rèn)可。但是埃博拉對國內(nèi)來說，了解較少，還無臨床治療經(jīng)驗或?qū)嶒炇覕?shù)據(jù)，只能在理論上進行探討。目前，對于埃博拉的治療也主要是針對病癥，通過調(diào)動全身抗病能力，阻止或逆轉(zhuǎn)器官衰竭和病理損害，同時兼抗病毒起到一定的治療作用。國家中醫(yī)藥管理局專家組為本病制定了相關(guān)指導(dǎo)性意見，可供臨床參考。

發(fā)病初期患者出現(xiàn)高熱、畏寒、腹痛、腹瀉，可參考方藥銀翹散合升降散、葛根芩連湯加減?；颊吒邿岵煌?，出現(xiàn)皮膚瘀斑，參考方藥清瘟敗毒飲、升降散加減。患者病情加重，出現(xiàn)全身多部位出血，可參考方藥涼血地黃湯加減?；颊叱鲅恢?，并發(fā)腎功能障礙時可參考方藥生脈飲加減，沖服安宮牛黃丸。

除此之外，在預(yù)防方面，除按WHO發(fā)布的隔離防護措施外，鑒于初期以濕熱邪毒為主還可以采用芳香避穢、健脾祛濕的方法來加大預(yù)防的效果。在溫?zé)岵』謴?fù)期，多見皮疹消褪并脫屑，出血逐漸停止，以口渴、納呆、關(guān)節(jié)疼痛等為主要不適，可以護胃益氣健脾等辨證調(diào)治。

5 小結(jié)

總體上講，目前對于EBHF的治療方法較多，疫苗及新藥研發(fā)仍在繼續(xù)。在全球化日益明顯的今天，尤其是在傳染性疾病大流行時，世界各國的聯(lián)系更顯緊密。因此，在研發(fā)諸如治療EBHF的藥物方面，全球應(yīng)加強協(xié)作、加大投入、實現(xiàn)共贏。

[1]Pourrut X，Kumulungui B，Wittmann T，et al.The natural history of Ebola virus in Africa[J].Microbes Infect，2005，7(7 － 8):1005－1014.

[2]Colebunders R，Borchert M.Ebola haemorrhagic fever—a review[J].J Infect，2000，40(1):16 － 20.

[3]World Health Organization.Ebola Situation Report[EB/OL].(2015 －03 －11)[2015 －03 －15].http://apps.who.int/ebola/current－ situation/ebola－situation－report－4－march－2015.

[4]World Health Organization.Use of convalescent whole blood or plasma collected from patients recovered from Ebola virus disease for transfusion as an empirical treatment during outbreaks[EB/OL].(2014 －09 －01)[2015 －04 －02].http://www.who.int/csr/resources/publications/ebola/convalescent－ treatment/en/.

[5]Geisbert T W，Pushko P，Anderson K，et al.Evaluation in nonhuman primates of vaccines against Ebola virus[J].Emerg Infect Dis，2002，8(5):503－507.

[6]Chupurnov A A，Chernukhin I V，Ternovoi V A，et al.Attempts to develop a vaccine against Ebola fever[J].Vopr Virusol，1995，40(6):257－260.

[7]Halfmann P，Kim J H，Ebihara H，et al.Generation of biologically contained Ebola viruses[J].Proc Natl Acad Sci USA，2008，105(4):1129－1133.

[8]Konduru K，Bradfute S B，Jacques J，et al.Ebola virus glycoprotein Fc fusion protein confers protection against lethal challenge in vaccinated mice[J].Vaccine，2011，29(16):2968 － 2977.

[9]Mellquist－ Riemenschneider J L，Garrison A R，Geisbert J B，et al.Comparison of the protective efficacy of DNA and baculovirus－derived protein vaccines for EBOLA virus in guinea pigs[J].Virus Res，2003，92(2):187 －193.

[10]Richardson J S，Pillet S，Bello A J，et al.Airway delivery of an adenovirus－based Ebola virus vaccine bypasses existing immunity to homologous adenovirus in nonhuman primates[J].J Virol，2013，87(7):3668－3677.

[11]Grant－ Klein R J，Van Deusen N M，Badger C V，et al.A multiagent filovirus DNA vaccine delivered by intramuscular electroporation completely protects mice from ebola and Marburg virus challenge[J].Hum Vaccin Immunother，2012，8(11):1703 －1706.

[12]Jones S M，Stroher U，F(xiàn)ernando L，et al.Assessment of a vesicular stomatitis virus－based vaccine by use of the mouse model of Ebola virus hemorrhagic fever[J].J InfectDis，2007，196(Suppl 2):S404－S412.

[13]Manicassamy B，Wang J，Jiang H，et al.Comprehensive analysis of ebola virus GP1 in viral entry[J].J Virol，2005，79(8):4793 －4805.

[14]Cote M，Misasi J，Ren T，et al.Small molecule inhibitors reveal Niemann － Pick C1 is essential for Ebola virus infection[J].Nature，2011，477(7364):344 －348.

[15]US.Liberia kick off trial of Ebola drug Zmapp[EB/OL].(2015 －02－27)[2015 －04 －02].http://www.channelnewsasia.com/news/world/us－liberia－kick－off－trial/1685432.html.

[16]Basu A，Li B，Mills D M，et al.Identification of a small－ molecule entry inhibitor for filoviruses[J].J Virol，2011，85(7):3106 － 3119.

[17]Schornberg K，Matsuyama S，Kabsch K，et al.Role of endosomal cathepsins in entry mediated by the Ebola virus glycoprotein[J].J Virol，2006，80(8):4174 －4178.

[18]Geisbert T W，Lee A C，Robbins M，et al.Postexposure protection of non－h(huán)uman primates against a lethal Ebola virus challenge with RNA interference:a proof － of － concept study[J].Lancet，2010，375(9729):1896－1905.

[19]中國科技網(wǎng).我國首個抗埃博拉病毒藥物獲批[EB/OL].(2014－08 －30)[2015 －04 －02].http://www.wokeji.com/jbsj/yb/201408/t20140830 －805294.shtml.