犬精液的采集、處理及人工輸精操作

馮 勇

(黑龍江省雞東縣向陽鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站158200)

1 犬人工授精的必要性

犬是最早用于人工授精研究的動(dòng)物，但發(fā)展和其他家畜相比稍顯緩慢。在許多發(fā)達(dá)國(guó)家，人工授精繁育的小犬如要注冊(cè)犬類系譜，需要先報(bào)經(jīng)注冊(cè)中心同意。因此在許多西方國(guó)家，犬的人工授精一般只在以下兩種情況下進(jìn)行: 第一，不能進(jìn)行交配的犬只; 第二，公母犬距離太遠(yuǎn)，位于不同地區(qū)或不同國(guó)家。

與大多數(shù)其他動(dòng)物一樣，犬人工授精數(shù)量正在顯著增加，目前已經(jīng)建立了非家養(yǎng)犬科動(dòng)物的人工授精中心，用于保種或商業(yè)目的。

2 精液采集與處理

對(duì)公犬的精液采集通常采用手指按摩法，也可在全身麻醉的情況下使用電刺激法采精。收集前精液、富精子部分和少量后精液(前列腺液) ?？蓪⑷可涑龅木狠斎肽溉年幍纼?nèi)，但通常需要將鮮精進(jìn)行稀釋，以便多次輸精或?yàn)槎嘀话l(fā)情母犬輸精。當(dāng)使用完全精液時(shí)，應(yīng)盡量減少前列腺液的收集量。根據(jù)需要，可將犬的精液做冷藏或冷凍保存。

3 輸精操作

液態(tài)保存精液的輸精: 由于犬不能交配而對(duì)犬施行人工授精時(shí)，可采用手指按摩法采集犬的精液，用原精立即輸入母犬的陰道內(nèi)，也可以稀釋后輸入一部分，剩余稀釋精液在48 h 內(nèi)使用。同樣，采用冷藏精液給母犬輸精時(shí)，可在獲得精液時(shí)及48 h 后輸精。在采精前應(yīng)確保母犬接近發(fā)情期的可受配期。

采用鮮精或冷藏精液時(shí)，可進(jìn)行陰道內(nèi)輸精，盡可能把精液輸?shù)阶訉m頸外口(Burke，1986) ?？刹捎媒囟塘说呐Ｓ幂斁珜?dǎo)管，使用犬用陰道開張器引導(dǎo)輸精導(dǎo)管到正確位置。有人建議，在輸精后模仿公、母犬“鎖結(jié)”的情況，把一兩根手指插入母犬陰門，刺激雌性生殖道出現(xiàn)交配時(shí)的生殖道的活動(dòng)。目前有一種Osiris 輸精導(dǎo)管，在管外套有Foley 充氣球(Nianski，2006) ，輸精時(shí)充入氣體，既可模仿自然交配時(shí)母犬陰道鎖緊公犬陰莖，又可以阻止精液回流。但是還沒有證據(jù)表明，這種輸精導(dǎo)管與常用輸精導(dǎo)管相比可多大程度提高受胎率。無論采用何種方法輸精，輸精后幾分鐘內(nèi)應(yīng)將母犬后軀抬高，防止精液回流。

凍精解凍后輸精: 冷凍精液在陰道內(nèi)輸精的受胎率低于子宮內(nèi)輸精。因此，目前推薦采用的方法是通過子宮頸，或直接通過外科手術(shù)或腹腔鏡將精液輸入子宮內(nèi)。根據(jù)國(guó)外的報(bào)道，犬子宮內(nèi)輸精的產(chǎn)仔率接近85%，而陰道內(nèi)輸精只有60%左右。但是，陰道內(nèi)多次輸精可以提高受胎率，子宮內(nèi)多次輸精意義不大。使用Osiris 輸精導(dǎo)管陰道內(nèi)輸精，受胎率仍然只有60% 左右(Nianski，2006) 。由于母犬陰道和子宮頸管較長(zhǎng)，子宮頸外口位置不易掌握，輸精導(dǎo)管很難穿過子宮頸管。使用挪威型輸精器(外部為聚四氟乙烯樹脂套管，套管內(nèi)是一根直徑約2 mm 輸精管) 可成功進(jìn)行子宮內(nèi)輸精，不過掌握這種輸精器的使用技術(shù)需要進(jìn)行大量的操作實(shí)踐，掌握后方能熟練進(jìn)行。

有國(guó)外學(xué)者描述的子宮內(nèi)輸精方法如下: 母犬站立，一般不使用鎮(zhèn)靜劑，一只手經(jīng)腹壁固定子宮頸，另一只手將輸精導(dǎo)管穿過子宮頸進(jìn)入子宮。輸精后，保持塑料套管與套管內(nèi)輸精管閉合，并抬起母犬后軀，避免精液回流?？捎脙?nèi)窺鏡定位子宮頸外口，輔助固定子宮頸。需要說明的，中等大小母犬的輸精比較容易，過度肥胖的母犬輸精較為困難。在操作人員對(duì)子宮頸輸精方法還不熟練的情況下，也可以通過外科手術(shù)或腹腔鏡輸精。

4 輸精時(shí)間的正確把握

母犬對(duì)公犬表現(xiàn)性接受行為的時(shí)間較長(zhǎng)，但可受精時(shí)間卻相對(duì)較短。因此，要得到最好的輸精效果，必須準(zhǔn)確把握排卵時(shí)間。自然交配時(shí)，許多配種人員只允許在母犬出現(xiàn)發(fā)情前出血的12 d 后進(jìn)行一次交配。與使用冷藏精液輸精比較，使用冷凍精液更需要確定最適輸精時(shí)間。公犬自身的生育力也非常重要，精子在產(chǎn)道中的存活力是決定受胎率的關(guān)鍵因素。存活時(shí)間長(zhǎng)的精子即使不是在最佳時(shí)間輸精也可以使母犬妊娠，而存活時(shí)間短的精子則可能在母犬尚未排卵之前即已死亡而不能使母犬受孕。

母犬的孕酮和LH 濃度在排卵前升高，測(cè)定其濃度變化，可以預(yù)測(cè)排卵時(shí)間。也可以用超聲波檢查卵巢，確定排卵時(shí)間。觀察陰道的細(xì)胞學(xué)變化預(yù)測(cè)排卵時(shí)間不夠準(zhǔn)確，尤其對(duì)采用凍精輸精不適宜。在發(fā)情期開始以后(或出現(xiàn)高比例的陰道角化上皮細(xì)胞以后) ，每天檢測(cè)血中孕酮濃度可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)排卵時(shí)間。孕酮在LH 出現(xiàn)峰值時(shí)由基礎(chǔ)濃度增至2.0 ～3.0 ng/mL，排卵時(shí)上升到4.0 ～8.0 ng/mL，排卵后2 d 上升到10 ～25 ng/mL。因此，孕酮濃度的第一次上升可以作為L(zhǎng)H 峰值出現(xiàn)的指示。還可以通過生物測(cè)定法(如半定量測(cè)定LH) 直接測(cè)定血清和尿中LH(Durrant 等，2006) ，輸精最好是在排卵后2 ～3 d 進(jìn)行。研究表明，在最佳時(shí)間輸精的產(chǎn)仔率(78%) 和窩產(chǎn)仔數(shù)(5.8 ±0.2 個(gè))均高于延遲輸精(分別為56%和4.5 ±0.5 個(gè)) 時(shí)。