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    CD44 和CD166 在直腸癌肝轉(zhuǎn)移診斷中的價值研究

    2015-03-18 11:43:56司志英李有才忻州職業(yè)技術(shù)學(xué)院檢驗教研室靜樂034000
    中國免疫學(xué)雜志 2015年8期
    關(guān)鍵詞:直腸癌陽性研究組

    司志英 靳 英 李有才 (忻州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 檢驗教研室,靜樂 034000)

    直腸癌為消化系統(tǒng)常見的一種惡性腫瘤,年發(fā)病率系消化系統(tǒng)腫瘤首位[1]。早期明確診斷,給予及時的手術(shù)治療,往往預(yù)后較佳。由于直腸癌不具有早期的明顯癥狀,不僅無法明確診斷,隨著患者病變進(jìn)展,還可能發(fā)生肝轉(zhuǎn)移,也是影響手術(shù)治療及預(yù)后的最主要因素[2]。研究顯示,40.0%以上直腸癌患者確診時,均發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,多數(shù)為肝轉(zhuǎn)移[3]。另據(jù)文獻(xiàn)報道,肝轉(zhuǎn)移為直腸癌原發(fā)灶切除、晚期直腸癌患者死亡的關(guān)鍵因素[4]。本文回顧分析自2008 年10 月至2013 年10 月以來,于忻州市人民醫(yī)院治療的76 例直腸癌患者臨床資料,旨在研究直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織CD44 與CD166 陽性表達(dá)的臨床意義。報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 自2008 年10 月至2013 年10 月以來,于忻州市人民醫(yī)院治療的76 例直腸癌患者,依據(jù)是否出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移將其分為研究組(肝轉(zhuǎn)移組,n=40)、對照組(無肝轉(zhuǎn)移組,n=36),研究組:女22例,男18 例,年齡39~75 歲,平均(58.5±4.3)歲,病程6 個月~3 年,平均(2.3±0.6)年;對照組:男19 例,女17 例,年齡38~73 歲,平均(57.4±3.1)歲,病程10 個月~5 年,平均(2.2±0.4)年,兩組在性別、年齡、病程方面均不存在統(tǒng)計學(xué)差異(P >0.05)。

    1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 血常規(guī)、肝腎功能未見異常者;入組前疾病情況經(jīng)影像學(xué)證實者;病理證實系直腸腺癌者;年齡在30~70 歲之間者;對本文研究知情同意并簽字者。

    1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 排除既往過敏史、精神病史者;排除內(nèi)科疾病或者其他嚴(yán)重臨床并發(fā)癥者;排除惡性腫瘤既往病史者;排除本文研究禁忌癥者。

    1.4 實驗儀器及試劑 Nikon 光學(xué)顯微鏡、顯微照相系統(tǒng);D293 型隔水式恒溫培養(yǎng)箱;SIEMENS Leica全自動脫蠟機(jī);SIEMENS 1220HI 型烤片機(jī)、1210HI型撈片機(jī)、2145RM 型切片機(jī)。CD166 單抗;D44 單抗;聚合物輔助劑;二抗CD44/CD166 試劑盒:免疫組化SP 染色試劑盒;標(biāo)記抗山羊辣根酶IgG 多聚體;小牛血清;PBS 緩沖液;DAB 試劑盒(均由北京中山生物科技有限公司提供)。

    1.5 實驗方法 SP 免疫組化法。厚4 μm 連續(xù)兩張切片,于載玻片平鋪,65℃環(huán)境下過夜。分別予以CD44、CD166 免疫組化。按照常規(guī)進(jìn)行二甲苯脫蠟,梯度酒精脫水,以蒸餾水沖洗,以PBS 進(jìn)行5 min 浸泡。以枸櫞酸緩沖液于高壓下實施抗原修復(fù),3 min 高壓鍋噴氣,室溫下冷卻。以3.0% 的H2O2于室溫下進(jìn)行5~10 min 孵育,以PBS 液進(jìn)行3 min 振蕩清洗,3 次重復(fù)后,滴加比例為1∶150 的CD44/CD166 羊抗人抗體,于37℃環(huán)境下進(jìn)行1~2 h 孵育。以PBS 沖洗2 min,重復(fù)3 次后滴加聚合物輔助劑,于37℃環(huán)境下孵育20 min,以PBS 沖洗2 min,重復(fù)3 次后滴加標(biāo)記抗山羊辣根酶IgG 多聚體,于37℃環(huán)境下進(jìn)行20 min 孵育,以PBS 進(jìn)行2 min 沖洗,3 次重復(fù)后以DAB 進(jìn)行顯色,于顯微鏡下控制染色程度,以自來水沖洗10 min,以蘇木素進(jìn)行復(fù)染2 min,予以鹽酸酒精進(jìn)行分化,以自來水沖洗10 min 返藍(lán)。以梯度酒精常規(guī)脫水,以二甲苯透明,以中性樹膠進(jìn)行封片。

    1.6 觀察指標(biāo) 觀察研究組CD44、CD166 陽性表達(dá)與年齡、性別、臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes 分期、組織分化等病理參數(shù)的相關(guān)性,觀察對比兩組腫瘤組織CD44、CD166 陽性表達(dá)情況,觀察對比兩組CD44、CD166 陽性表達(dá)對生存率的影響。

    1.7 實驗結(jié)果判定 以細(xì)胞質(zhì)、上皮細(xì)胞膜呈棕黃色判定為CD44 陽性,切片無陽性細(xì)胞判定為CD44陰性。以細(xì)胞質(zhì)、上皮細(xì)胞膜呈棕黃色判定為CD166 陽性,切片無陽性細(xì)胞判定為CD166 陰性。

    1.8 統(tǒng)計學(xué)處理 選擇SPSS19.0 軟件對數(shù)據(jù)予以統(tǒng)計處理,其中計數(shù)資料對比選擇χ2檢驗,計量資料以±s 表示,將P <0.05 作為統(tǒng)計學(xué)差異。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組腫瘤組織CD44、CD166 陽性表達(dá)情況對比 研究組CD44、CD166 陽性表達(dá)率分別為72.50%、85.00%,對照組CD44、CD166 陽性表達(dá)率分別為36.11%、41.67%,兩組相較,呈明顯差異(P <0.05)。具體如表1。

    2.2 影響肝轉(zhuǎn)移直腸癌腫瘤組織CD44 表達(dá)因素分析 直腸癌肝轉(zhuǎn)移組腫瘤組織中CD44 表達(dá),與年齡、性別、組織分化程度,無密切關(guān)系(P >0.05),與浸潤深度、Dukes 分期密切相關(guān)(P <0.05)。見表2。

    2.3 影響肝轉(zhuǎn)移直腸癌腫瘤組織CD66 表達(dá)因素分析 直腸癌肝轉(zhuǎn)移組腫瘤組織中CD166 表達(dá),與年齡、性別、組織分化程度,無密切關(guān)系(P >0.05),與浸潤深度、Dukes 分期密切相關(guān)(P <0.05)。見表3及圖1~4。

    2.4 CD44、CD166 表達(dá)對兩組直腸癌患者生存率的影響對比 研究組CD44、CD166 陽性表達(dá)在1年、2 年、3 年、4 年、5 年各時間點的生存率情況,與對照組相較,均呈明顯差異(P <0.05)。如表4。

    表1 兩組腫瘤組織CD44、CD166 陽性表達(dá)情況對比〔n(%)〕Tab.1 In tumor tissue of positive expression of CD44,CD166 two groups of contrast〔n(%)〕

    表2 研究組CD44 陽性表達(dá)情況的影響因素分析〔n(%)〕Tab.2 Positive expression of CD44 factors〔n(%)〕

    表3 研究組CD166 陽性表達(dá)情況的影響因素分析〔n(%)〕Tab.3 Positive expression of CD166 factors〔n(%)〕

    表4 兩組CD44、CD166 陽性表達(dá)對生存率的影響對比〔n(%)〕Tab.4 Two positive impact on survival comparison〔n(%)〕

    圖1 未轉(zhuǎn)移直腸癌組織中CD44 以弱陽性表達(dá)為主Fig.1 CD44 was weakly expressed in colorectal cancer tissues

    圖2 肝臟轉(zhuǎn)移直腸癌組織中CD44 表達(dá)呈強(qiáng)陽性Fig.2 CD44 expression was strongly positive in liver metastasis of rectal cancer

    圖3 未轉(zhuǎn)移直腸癌組織中CD166 呈弱陽性表達(dá)Fig.3 CD166 was weakly expressed in tissues of colorectal cancer

    圖4 肝臟轉(zhuǎn)移直腸癌組織CD166 呈強(qiáng)陽性表達(dá)Fig.4 CD166 was strongly expressed in liver metastasis of rectal cancer

    3 討論

    CRC(大腸癌)為消化道最常見的一種惡性腫瘤。據(jù)文獻(xiàn)報道,該病患病率可達(dá)到0.05%,并且呈逐年上升態(tài)勢。目前,肝臟轉(zhuǎn)移為直腸癌患者出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移比較常見的部位,因早期無顯著表現(xiàn),診斷具有一定難度[5]。

    文獻(xiàn)報道,腫瘤由異質(zhì)性細(xì)胞構(gòu)成,腫瘤細(xì)胞克隆分化與干細(xì)胞十分相似。研究顯示,因腫瘤干細(xì)胞為腫瘤起始細(xì)胞,能夠維持腫瘤的分化,具有浸潤、增殖以及異質(zhì)特性。因此,腫瘤干細(xì)胞被認(rèn)為是腫瘤的發(fā)生發(fā)展、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的根源,對其高度表達(dá)的標(biāo)記物進(jìn)行研究,具有非常重要的臨床價值[6]。

    CD44 為細(xì)胞表面糖基化黏附分子,分布于內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、T 細(xì)胞中,CD44 基因是高度保守的19~20 個外顯子構(gòu)成,在11 號染色體的短臂上,經(jīng)轉(zhuǎn)錄后,不同修飾方式可生成兩種蛋白,CD44s(標(biāo)準(zhǔn)型)、CD44v(變異型)。研究顯示CD44 高表達(dá),不僅體現(xiàn)腫瘤進(jìn)展,同時可對腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移起到促進(jìn)作用[7]。

    結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的生物學(xué)變化十分復(fù)雜,腫瘤細(xì)胞表面受體可識別和黏附基底膜,腫瘤細(xì)胞自身可分泌多種蛋白酶,這些蛋白酶可降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì),基底膜被降解后,可伸出偽足,向周圍組織間質(zhì)遷移。經(jīng)脈管進(jìn)入血液、淋巴循環(huán)并逃避免疫系統(tǒng)的攻擊,最后伴隨血液循環(huán)或淋巴循環(huán)到達(dá)繼發(fā)部位,于繼發(fā)部位組織發(fā)生黏附,形成克隆并增生生長,繼而促使微血管生成;最后形成轉(zhuǎn)移瘤。在本文結(jié)果中顯示,直腸癌肝轉(zhuǎn)移CD44 陽性表達(dá),與未發(fā)生肝轉(zhuǎn)移組呈顯著差異,說明CD44 能夠作為直腸癌肝轉(zhuǎn)移的特征性標(biāo)志物。對早期診療具有非常重要的臨床意義。此外,本文結(jié)果顯示,直腸癌Dukes 分期、浸潤深度與CD44 具有密切關(guān)系,Dukes分期與CD44 高表達(dá)呈增高態(tài)勢,說明CD44 能夠促進(jìn)直腸癌腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步侵襲轉(zhuǎn)移,對治療方案的制定,也具有非常重要的臨床意義。CD166 為免疫球蛋白超基因家族中的成員,不僅能夠與機(jī)體淋巴細(xì)胞的抗原CD6 特異性結(jié)合,表現(xiàn)為同嗜性黏附、同型間結(jié)合,而且可以呈異嗜性黏附、異型間結(jié)合。CD166 在腫瘤組中呈高表達(dá)狀態(tài),而且能夠調(diào)節(jié)腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移[8]。本文結(jié)果顯示,直腸癌肝轉(zhuǎn)移CD166 陽性表達(dá),與未發(fā)生肝轉(zhuǎn)移組有顯著差異,說明CD166 也能夠作為直腸癌肝轉(zhuǎn)移的特征性標(biāo)志物。對早期診療也具有非常重要的臨床意義。同時,本文結(jié)果顯示,直腸癌Dukes 分期、浸潤深度與CD166 均具有密切關(guān)系,而Dukes 分期與CD166 高表達(dá)呈增高態(tài)勢,說明CD166 同樣能夠促進(jìn)直腸癌腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步侵襲轉(zhuǎn)移。

    文獻(xiàn)報道,CD166 低表達(dá)的腫瘤,其腫瘤細(xì)胞與原發(fā)灶的黏附性降低,便于其發(fā)生轉(zhuǎn)移,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[9]。但是也有臨床病例研究報道[10],CD166 的高表達(dá)與大多數(shù)腫瘤的侵襲性、轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān),我們的實驗結(jié)果與之相吻合。此外,也有一些有文獻(xiàn)報道,在直腸癌病例中,腫瘤組織中MVD(微血管密度)明顯升高,而且與CD166 的高表達(dá)呈正相關(guān),此外與正常血管內(nèi)皮細(xì)胞相比,由血管生成而來的血管內(nèi)皮細(xì)胞的CD166 陽性表達(dá)更高。說明CD166 可通過促進(jìn)新生血管的生成,促進(jìn)腫瘤的進(jìn)一步轉(zhuǎn)移。

    綜上所述,直腸癌患者腫瘤組織CD44、CD166陽性表達(dá),是肝轉(zhuǎn)移的特征性標(biāo)志物,能夠判定直腸癌發(fā)生、發(fā)展過程,有助于直腸癌早期診療方案的制定。

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