Cyto Trap酵母雙雜交系統(tǒng)篩選p85α蛋白相互作用蛋白

李小娜,時(shí)小燕,米小軼,黃傳書,劉晉祎

(1.河南大學(xué)中藥研究所,河南開封475004;2.第三軍醫(yī)大學(xué)軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院軍事毒理學(xué)研究所,重慶400038; 3.美國紐約大學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所,紐約10987)

Cyto Trap酵母雙雜交系統(tǒng)篩選p85α蛋白相互作用蛋白

李小娜1,2,時(shí)小燕1,2,米小軼3,黃傳書3,劉晉祎2*

(1.河南大學(xué)中藥研究所,河南開封475004;2.第三軍醫(yī)大學(xué)軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院軍事毒理學(xué)研究所,重慶400038; 3.美國紐約大學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所,紐約10987)

摘 要:目的篩選與p85α蛋白發(fā)生相互作用的新蛋白質(zhì)分子。方法PCR擴(kuò)增小鼠p85α基因全長(zhǎng),并將此基因重組入pSOS載體,構(gòu)建誘餌質(zhì)粒pSOS-p85α,經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定構(gòu)建正確后將其轉(zhuǎn)化酵母菌cdc25Hα,檢測(cè)其在酵母中的表達(dá)及有無自激活作用,并利用Cyto Trap酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與誘餌蛋白p85α相互作用的蛋白質(zhì)分子。結(jié)果成功獲得重組誘餌質(zhì)粒pSOS-p85α,并驗(yàn)證其可在酵母細(xì)胞中表達(dá)誘餌蛋白pSOS-p85α,且誘餌質(zhì)粒在此雙雜交系統(tǒng)中無自激活。利用此系統(tǒng)篩選出4個(gè)能與p85α相互作用的細(xì)胞蛋白,分別為v-Ki-ras2克爾斯滕大鼠肉瘤病毒癌基因同族體蛋白KRAS、小鼠著絲粒蛋白K、小鼠多聚嘧啶結(jié)合蛋白PTBP1、小鼠雄性激素調(diào)節(jié)蛋白R(shí)P2。結(jié)論成功篩選出小鼠p85α蛋白的相互作用蛋白,為進(jìn)一步研究小鼠p85α蛋白及其相關(guān)信號(hào)通路的生物學(xué)功能提供了新線索。

關(guān)鍵詞:p85α蛋白;Cyto Trap酵母雙雜交;蛋白質(zhì)相互作用

＊通訊作者:劉晉祎(1970―),男,重慶人,博士,教授,從事腫瘤遺傳學(xué)機(jī)制的研究工作。

PI3K廣泛參與細(xì)胞的增殖、分化、存活和遷移等信號(hào)傳導(dǎo),該信號(hào)通路的異常與腫瘤細(xì)胞的遷移、粘附、腫瘤血管生成以及細(xì)胞外基質(zhì)的降解等密切相關(guān)。PI3K主要由p85調(diào)節(jié)亞基和p110催化亞基組成。p85調(diào)節(jié)亞基包括p85α、p85β、p85γ。其中, p85α為表達(dá)最多的調(diào)節(jié)亞基,由pik 3r 1基因編碼,在多種組織中廣泛表達(dá),可參與多種信號(hào)刺激作用下的信號(hào)傳導(dǎo)[1]。p85α的活性與乳腺癌、肺癌、黑色素瘤和淋巴瘤等多種人類腫瘤的發(fā)生相關(guān),而抑制p85α活性后細(xì)胞的增殖明顯被抑制[2-3]?？梢妏85α在PI3K/AKT信號(hào)通路中起著重要作用。為了進(jìn)一步闡明p85α在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制,我們以p85α為誘餌蛋白,通過Cyto Trap酵母雙雜交體系,篩選小鼠胚胎cDNA表達(dá)文庫,獲得了4個(gè)可能與p85α相互作用的細(xì)胞蛋白,為進(jìn)一步研究p85α蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用提供了線索。

1　材料和方法

1.1材料

Cyto Trap酵母雙雜交系統(tǒng)包括cdc25Hα酵母菌株、誘餌載體pSOS、目標(biāo)p Myr,陽性對(duì)照質(zhì)粒pSOS MAFB、p Myr MAFB、p Myr SB、陰性對(duì)照質(zhì)粒pSOS Col I、p Myr Lamin C及Mouse embryonic Plasmid cDNA library(Stratagene公司);高保真Taq酶、T4 DNA連接酶、限制性內(nèi)切酶SalI、Bam HI (Ta KaRa公司);質(zhì)粒GFP-p85α為本室保存;酵母培養(yǎng)基YPD Medium、Minimal SDBase、Minimal SD BASE GAL/RAF、-His/-Leu/-UraDO Supplement (Clontech公司);LiSORB、鮭精DNA、聚乙二醇(PEG)、醋酸鋰(LiOAc)、酸洗玻璃珠(Sigma公司);其他生化試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2方法

1.2.1誘餌質(zhì)粒pSOS-p85α的構(gòu)建 以質(zhì)粒GFP-p85α為模板,PCR方法擴(kuò)增出p85α基因全長(zhǎng)片段(2 174 bp)。引物序列如下:p85FL-F 5’-GTAG GATCCCCATGAGTGCAGAGGGCTACCAG-3’; p85FL-R:5’-CGCGTCGACTCATCGCCTCTGTTGTGCATA-3’,分別在引物兩端引入酶切位點(diǎn)Bam-HI和SalI。PCR反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性5 min、94℃變性30 s、55℃退火40 s、72℃延伸2.5 min,共30個(gè)循環(huán);72℃后延伸10 min。PCR產(chǎn)物和載體pSOS用Bam HI和SalI雙酶切,將酶切后的目的基因與載體DNA進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳?；厥赵噭┖?回收目的DNA片段,經(jīng)T4 DNA連接酶于16℃連接過夜。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到DH5α菌中涂板,經(jīng)菌落PCR和雙酶切鑒定無誤后,進(jìn)行測(cè)序鑒定。將含有正確插入目的基因片段誘餌質(zhì)粒命名為pSOS-p85α。

1.2.2酵母感受態(tài)細(xì)胞制備 依據(jù)Stratagene公司的Cyto Trap操作說明書,將cdc25Hα酵母菌株在YPDA固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng),取單克隆接種至含有50 m L YPDA液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)過夜至OD600＞1。YPAD液體培養(yǎng)基稀釋過夜培養(yǎng)物,調(diào)整OD600=0.2,25℃,240 rpm/min,4 h,培養(yǎng)至OD600=0.8。將菌液于3 000 rpm/min,室溫離心5 min,棄上清液;50 m L LiSORB重懸細(xì)胞沉淀,室溫孵育30 min后,3 000 rpm/min,離心5 min。菌體沉淀加入300μL LiSORB重懸后再加入600μL鮭精DNA混合物,充分混勻。再加入5.4 m L的PEG/ Lio Ac溶液和530μL的DMSO混勻,分裝到無菌的微量離心管中,―80℃存放備用。

1.2.3誘餌質(zhì)粒pSOS-p85α的自激活檢測(cè) 設(shè)置陽性對(duì)照組(pSOSMAFB+p Myr MAFB)、陰性對(duì)照組(pSOS MAFB+p Myr LaminC)、自激活檢測(cè)組(pSOS-p85α+p Myr)及定位檢測(cè)組(pSOS-p85α+ p MyrSB),將上述各組分別共轉(zhuǎn)化入酵母感受態(tài)cdc25Hα細(xì)胞。涂布于SD/glucose(―UL)固體培養(yǎng)基培養(yǎng)。4 d后于每平板挑取4個(gè)克隆,用無菌水重懸后,接種于SD/glucose(―UL)和SD/galactose (―UL)平板,分別于25℃和37℃培養(yǎng),觀察菌落生長(zhǎng)狀況。

1.2.4陽性克隆篩選與相互作用蛋白鑒定 將pSOS-p85α全長(zhǎng)質(zhì)粒和p Myr文庫質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化cdc25 Hα酵母感受態(tài)細(xì)胞,涂布于SD/glucose(―UL)固體培養(yǎng)基培養(yǎng),再將單克隆酵母轉(zhuǎn)印到SD/ galactose(―UL)固體培養(yǎng)基培養(yǎng)。經(jīng)2次回復(fù)突變檢測(cè)后,37℃,SD/galactose(―UL)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng),而在SD/glucose(―UL)固體培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)的克隆為陽性克隆。

從推定的陽性克隆酵母中提取質(zhì)粒,分別與pSOS-p85α(用于確定相互作用)或pSOS MAFB、pSOS ColI(陰性對(duì)照)共轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài),涂布于SD/glucose(-UL)固體培養(yǎng)基,陽性克隆分別轉(zhuǎn)印到SD/glucose(―UL)和SD/galactose(―UL)固體培養(yǎng)基上,分別于25℃和37℃培養(yǎng)。在37℃SD/galactose(―UL)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng),而在37℃,SD/ glucose(―UL)固體培養(yǎng)基不生長(zhǎng)的為陽性克隆。從得到的陽性克隆中提取質(zhì)粒,用p Myr載體通用引物測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在pub Med網(wǎng)站上的BLAS工具進(jìn)行同源性比較,找出與p85α相互作用蛋白的基因。

2　結(jié)果

2.1誘餌質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定

以GFP-p85α質(zhì)粒為模板,用引物p85FL-F/R擴(kuò)增出長(zhǎng)度為2 174 bp的片段。1%瓊脂糖凝膠電泳分析,與目的基因p85α全長(zhǎng)基因長(zhǎng)度相符,見圖1。將PCR擴(kuò)增片段定向克隆至誘餌質(zhì)粒pSOS,構(gòu)建獲得重組載體pSOS-p85α。重組載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶Bam HI和SalI雙酶切鑒定正確,選出含有插入目的基因的樣品送測(cè)序,見圖2。測(cè)序結(jié)果顯示,插入片段與NCBI已公布的小鼠p85α核酸序列一致。

2.2pSOS-p85α載體自激活、細(xì)胞質(zhì)定位的檢測(cè)

陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、自激活檢測(cè)組、細(xì)胞質(zhì)定位組,25℃。酵母無論在SD/glucose(―UL)固體培養(yǎng)基和SD/galactose(―UL)固體培養(yǎng)基上均可生長(zhǎng),說明酵母菌正常。酵母在37℃SD/glucose (―UL)固體培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng),說明酵母菌未發(fā)生回復(fù)突變。在37℃SD/galactose(―UL)固體培養(yǎng)基上各組的生長(zhǎng)情況如下:陽性對(duì)照組有白色菌落;陰性對(duì)照組無菌落;自激活檢測(cè)組無菌落。見圖3。表明pSOS-p85α質(zhì)粒無自激活作用,細(xì)胞質(zhì)定位檢測(cè)組有白色菌落,說明pSOS-p85α質(zhì)粒能在酵母細(xì)胞中融合表達(dá),并定位于胞質(zhì),可用Cyto Trap雙雜交系統(tǒng)進(jìn)行篩選。

2.3篩選與p85α相互作用的陽性克隆

37℃培養(yǎng)條件下,在SD/galactose(―UL)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng),而在SD/glucose(―UL)固體培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)的菌落為陽性克隆。重復(fù)3次實(shí)驗(yàn),共獲得78個(gè)推定的陽性克隆,部分結(jié)果見圖4。

提取陽性克隆的p Myr-cDNA文庫質(zhì)粒,Eco RI/ XhoI雙酶切后,得到的插入片段為大小不等的DNA片段。瓊脂糖凝膠電泳鑒定,酶切片段大小與預(yù)期一致。見圖5。

2.4相互作用蛋白驗(yàn)證與鑒定

將推定的78個(gè)陽性克隆酵母質(zhì)粒與pSOS-p85α、pSOSMAFB、pSOSColI共轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)。推定的陽性克隆酵母質(zhì)粒與pSOS-p85α共轉(zhuǎn)化組菌落表現(xiàn)為:25℃,SD/glucose(―UL)和SD/galactose (―UL)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng),而在37℃,SD/glucose (―UL)固體培養(yǎng)基不生長(zhǎng),僅在37℃,SD/galactose(―UL)固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)。推定的陽性克隆酵母質(zhì)粒與pSOSMAFB或pSOSColI共轉(zhuǎn)化組則表現(xiàn)為:25℃,SD/glucose(―UL)和SD/galactose(―UL)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng),在37℃,SD/glucose(―UL)和SD/galactose(―UL)固體培養(yǎng)基均不生長(zhǎng)。經(jīng)提取陽性克隆的酵母質(zhì)粒,在酵母中驗(yàn)證相互作用去除假陽性后,剩余44個(gè)陽性克隆,篩選出的部分陽性克隆,見圖6。cDNA(假設(shè)陽性)在酵母中,pSOS-p85α與p Myr cDNA(假設(shè)陽性)中構(gòu)造共沉淀,在25℃下培養(yǎng),在37℃下時(shí)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行化驗(yàn)和修補(bǔ)。

對(duì)得到的44個(gè)陽性克隆進(jìn)行測(cè)序分析,將DNA序列及相應(yīng)的蛋白質(zhì)序列在NCBI數(shù)據(jù)庫上進(jìn)行BLAST比對(duì),結(jié)果發(fā)現(xiàn)4個(gè)新的與p85α相互作用的蛋白質(zhì)分子。分別為v-Ki-ras2克爾斯滕大鼠肉瘤病毒癌基因同族體蛋白(Mus musculus v-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog, KRAS)、小鼠著絲粒蛋白K(Mus musculus centromere protein K)、小鼠多聚嘧啶結(jié)合蛋白PTBP1 (Mus musculus polypyrimidine tract binding protein 1,Ptbp1)、小鼠雄性激素調(diào)節(jié)蛋白R(shí)P2(Mouse kidney testosterone-regulated RP2)。

3　討論

傳統(tǒng)酵母雙雜交系統(tǒng)對(duì)相互作用蛋白的篩選是基于報(bào)道基因的轉(zhuǎn)錄激活。該系統(tǒng)用于研究發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)的蛋白相互作用,不適用研究定位于膜及胞漿的蛋白間相互作用和自身就是轉(zhuǎn)錄因子的蛋白質(zhì)。Cyto Trap雙雜交系統(tǒng)為一種新型酵母雙雜交系統(tǒng),其主要優(yōu)點(diǎn)在于能研究發(fā)生在細(xì)胞膜的蛋白質(zhì)相互作用,也彌補(bǔ)了傳統(tǒng)酵母雙雜交技術(shù)的局限[4]。

PI3Kp85α作為PI3K中重要的調(diào)節(jié)亞基,廣泛參與細(xì)胞的增殖、分化等過程的信號(hào)傳導(dǎo)與調(diào)節(jié),其激活與多種腫瘤發(fā)生密切相關(guān)[2-3]。我們成功利用Cyto Trap雙雜交系統(tǒng)篩選與p85α蛋白相互作用的小鼠細(xì)胞蛋白,共計(jì)得到4個(gè)未曾報(bào)道的可與p85α相互作用的小鼠細(xì)胞蛋白,分別是:v-Ki-ras2克爾斯滕大鼠肉瘤病毒癌基因同族體蛋白Kras、小鼠著絲粒蛋白K、小鼠RAS相關(guān)病毒癌基因同族體蛋白R(shí)ras2、小鼠多聚嘧啶結(jié)合蛋白PTBP1、小鼠雄性激素調(diào)節(jié)蛋白R(shí)P2。

我們所篩選出來的4個(gè)p85α相互作用蛋白均為文獻(xiàn)沒有報(bào)道。其中Kras屬于Ras超家族成員,可作為分子開關(guān),傳遞細(xì)胞外信號(hào)從而引發(fā)一系列基本的細(xì)胞過程,包括增殖、存活和分化[5]。盡管Ras超家族成員均可自然發(fā)生組成性激活突變。至今為止,研究人員發(fā)現(xiàn),大約30%的人類腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)Ras基因突變[6]。

CENP-KSolt/Sim4為一個(gè)含306個(gè)氨基酸的組成型著絲粒成分,包含一個(gè)亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域。CENPK利用此結(jié)構(gòu)在體外可與Sox6的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)結(jié)合[7-8]。此外,CENPK和CENPH均富含卷曲螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)域,該結(jié)構(gòu)使兩者易于形成穩(wěn)定的異質(zhì)二聚體,參與聯(lián)接動(dòng)點(diǎn)內(nèi)層與紡綞體微管。CENPK對(duì)于CENP蛋白CENP-Q、CENP-H和KNL1以及Hec1/Ndc80在著絲粒的定位均起著重要作用[9]。最近,Komatsu等[10]通過全基因組基因表達(dá)譜分析了三陰性乳腺癌和正常乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞?；蚋患治鼋Y(jié)果發(fā)現(xiàn),CENPK分布顯著增加。敲低CENPK的表達(dá)后,三陰性乳腺癌細(xì)胞阻滯于G1和G2/M期,同進(jìn)細(xì)胞的生存能力明顯降低。

PTBP1又稱作不均一核糖核蛋白I,是一種分子量為58k D的RNA結(jié)合的蛋白質(zhì)。它含有4個(gè)RNA識(shí)別模序(RRM),位于N端的RRM1/2參于PTBP1二聚體形成,而RRM3/4則主要負(fù)責(zé)其與RNA結(jié)合。PTPB1通過多環(huán)節(jié)參與前體mRNA剪接、m RNA穩(wěn)定性維持、前體m RNA和m RNA的代謝調(diào)控[11]。此外,PTBP1還參與內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(IRES)介導(dǎo)的蛋白翻譯起始及多種蛋白的翻譯后調(diào)節(jié),它的活性與細(xì)胞增殖、凋亡、腫瘤發(fā)生及胚胎發(fā)育等密切相關(guān)[12]。

RP2p是由Ofman等通過蛋白質(zhì)組學(xué)方法從小鼠腎臟過氧化物酶體中鑒定出的一種新的nudix水解酶。該蛋白是由D7RP2e基因編碼,包括357個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。RP2p蛋白富含脯氨酸,由α螺旋和β片層構(gòu)成。該蛋白是由nudix水解酶結(jié)構(gòu)域和Co A結(jié)合結(jié)構(gòu)域2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域組成。RP2p為一個(gè)?；o酶A二磷酸酶,可活化Co A、氧化型Co A及許多Co A酯類等底物發(fā)揮生物學(xué)作用[13]。

Arisi等[14]在鑒定阿爾茲海默氏病早期特異性生物學(xué)標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn),Nudt19可作為該病早期階段的生物標(biāo)志物用于臨床診斷。此研究篩選出4種與p85α相互作用的細(xì)胞蛋白,為進(jìn)一步研究p85α新的生物學(xué)功能及調(diào)控機(jī)制提供資料。但Cyto Trap雙雜交可能出現(xiàn)假陽性,p85α與這些蛋白的相互作用需用免疫共沉淀、GST-Pull down及激光共聚焦等方法進(jìn)一步確證,目前相關(guān)驗(yàn)證正在進(jìn)行之中。

參考文獻(xiàn):

[1]Zhao M M,Yang J Y,Wang X B,et al.The PI3K/Akt pathway mediates the protection of SO(2)preconditioning against myocardial ischemia/reperfusion injury in rats[J]. Acta Pharmacol Sin,2013,34(4):501―506.

[2]Song L,Li J,Ye J,et al.p85alpha acts as a novel signal transducer for mediation of cellular apoptotic response to UV radiation[J].Mol Cell Biol,2007,27(7):2 713―2 731.

[3]Wei Y,Jiang Y,Zou F.Activation of PI3K/Akt pathway by CD133-p85 interaction promotes tumorigenic capacity of glioma stem cells[J].Proc Natl Acad Sci U S A.2013, 110(17):6 829―6 834.

[4]Aronheim A,Zandi E,Hennemann H,et al.Isolation of an AP-1 repressor by a novel method for detecting protein-protein interactions[J].Mol Cell Biol,1997,17(6): 3 094―3 102.

[5]Colicelli J.Human RAS superfamily proteins and related GTPases[J].Sci STKE,2004,2004(250):13.

[6]Downward J.Targeting RAS signaling pathways in cancer therapy[J].Nat Rev Cancer,2003,3(1):11―22.

[7]Okada M,Cheeseman I M,Hori T,et al.The CENP-HI complex is required for the efficient incorporation of newly synthesized CENP-A into centromeres[J].Nat Cell Biol,2006,8(5):446―457.

[8]Yamashita A,Ito M,Takamatsu N,et al.Characterization of Solt,a novel Sox LZ/Sox6 binding protein expressed in adult mouse testis[J].FEBS Lett,2000,481 (2):147―151.

[9]Cheeseman I M,Hori T,Fukagawa T,et al.KNL1 and the CENP-H/I/K complex coordinately direct kinetochore assembly in vertebrates[J].Mol Biol Cell,2008,19(2): 587―594.

[10]Komatsu M,Yoshimaru T,Matsuo T,et al.Molecular features of triple negative breast cancer cells by genomewide gene expression profiling analysis[J].Int J Oncol, 2013,42(2):478―506.

[11]Grover R,Ray P S,Das S.Polypyrimidine tract binding protein regulates IRES-mediated translation of p53 isoforms[J].Cell Cycle,2008,7(14):2 189―2 198.

[12]He X,Pool M,Darcy K M,et al.Knockdown of polypyrimidine tract-binding protein suppresses ovarian tumor cell growth and invasiveness in vitro[J].Oncogene, 2007,26(34):4 961―4 968.

[13]Ofman R,Speijer D,Leen R,et al.Proteomic analysis of mouse kidney peroxisomes:identification of RP2p as a peroxisomal nudix hydrolase with acyl-Co A diphosphatase activity[J].Biochem J,2006,393(2):537―543.

[14]Arisi I,Onofrio M,Brandi R,et al.Gene expression biomarkers in the brain of a mouse model for Alzheimer's disease:mining of microarray data by logic classification and feature selection[J].J Alzheimers Dis,2011,24(4): 721―738.

[責(zé)任編輯時(shí) 紅]

Screening of interacting proteins with p85αby CytoTrap yeast two-hybrid system

LI Xiaona1，2，SHI Xiaoyan1，2，MI Xiaoyi3，HUANG Chuanshu3，LIU Jinyi2＊
（1.institute of Chinese material medicine，Henan University，Kaifeng，Henan 475004，China；2.Institute of Toxicology，College of Preventive Medicine，Third Military Medical University，Chongqing，400038，China；3. Institude of Environmental Medicine，New York University，New York，10987）

Abstract：ObjectiveTo screen the mouse proteins that interacts with p85α.MethodsThe recombinant plasmid pSOS-p85αwas constructed by inserting p85αfragment into the bait vector.After sequence verification the plasmid was transformed into competent yeast cells.Then，the expression and self activation of pSOS-p85αprotein was detected in the yeast cells.The mouse proteins interacting with the bait protein pSOS-p85αwere screened with Cyto Trap yeast two-hybrid system.ResultsThe reconstructed plasmid including mouse p85αgene could express pSOS-p85αfusion protein in the yeast cells without self-activation of the protein.Cyto Trap yeast two-hybrid system identified 4 mouse proteins that interacted with p85α，including Mus musculus v-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog，mouse musculus centromere protein K，mouse musculus polypyrimidine tract binding protein 1 and mouse kidney testosterone-regulated RP2.ConclusionFour p85α-binding mouse proteins have been identified using the Cyto Trap yeast two-hybrid system，which provides clues for further investigation of the role of p85α protein and its downstream signal pathway.

Key words：p85αprotein；Claptrap yeast two-hybrid；protein interactions

作者簡(jiǎn)介:李小娜(1987―),女,河南安陽人,碩士研究生,從事腫瘤分子機(jī)制的研究工作。

基金項(xiàng)目:中國博士后科學(xué)基金(2013M542496);河南省教育廳科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(13A310094)。

收稿日期:2015-02-12

中圖分類號(hào):R730.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

文章編號(hào):1672―7606(2015)02―082―05