應(yīng)用EP6-A2方案評(píng)價(jià)自建檢測(cè)系統(tǒng)中尿蛋白的線性范圍

周遠(yuǎn)青，梁瑞蓮，呂偉標(biāo)，梁玉全，陳映慧

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬順德第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東順德 528300)

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·論 著·

應(yīng)用EP6-A2方案評(píng)價(jià)自建檢測(cè)系統(tǒng)中尿蛋白的線性范圍

周遠(yuǎn)青，梁瑞蓮，呂偉標(biāo)，梁玉全，陳映慧

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬順德第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東順德 528300)

目的 建立自建檢測(cè)系統(tǒng)中尿蛋白的線性范圍，以供臨床檢驗(yàn)做參考。方法 根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)頒發(fā)的EP6-A2文件，配制11組U-pro濃度為等間距排列的試驗(yàn)標(biāo)本，每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定2次，用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多項(xiàng)式回歸，得出該項(xiàng)目的線性范圍。結(jié)果 自建檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)尿蛋白重復(fù)性CV為1.59%，小于實(shí)驗(yàn)室所規(guī)定的重復(fù)性目標(biāo)2%，數(shù)據(jù)重復(fù)性好，符合實(shí)驗(yàn)要求。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)多項(xiàng)式回歸分析后得出的最適模型為三次多項(xiàng)式，通過(guò)對(duì)其非線性度分析，判斷其為臨床可接受的線性，對(duì)應(yīng)的自建檢測(cè)系統(tǒng)中檢測(cè)尿蛋白線性范圍為5.2～1 355.15 mg/L。結(jié)論 自建檢測(cè)系統(tǒng)中尿蛋白的線性范圍為5.2～1 355.15 mg/L，小于試劑盒說(shuō)明書上的線性范圍0～2 000 mg/L。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的分析性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，以保證其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

尿蛋白； 線性范圍； EP6-A2方案； 自建檢測(cè)系統(tǒng)

根據(jù)“醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法”的要求，臨床實(shí)驗(yàn)室所用的方法、儀器等應(yīng)保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)所用的方法學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)，以保證所選用的方法、試劑、儀器達(dá)到臨床性能、分析性能和經(jīng)濟(jì)性能等各方面的要求[1]。分析性能主要包括精密度、準(zhǔn)確性、特異性、抗干擾性、靈敏度、最低檢出限、線性范圍等，其中線性范圍是較為重要內(nèi)容之一。自建檢測(cè)系統(tǒng)指實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己的意愿選擇儀器、校準(zhǔn)品、試劑等而建立的檢測(cè)系統(tǒng)。因本實(shí)驗(yàn)室的自建檢測(cè)系統(tǒng)的線性范圍可能與試劑盒提供的線性范圍不相符，為了保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性，需要在檢驗(yàn)前建立自建的檢測(cè)系統(tǒng)中檢驗(yàn)項(xiàng)目的線性范圍[2]。本次實(shí)驗(yàn)以尿蛋白為例，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、實(shí)驗(yàn)過(guò)程和數(shù)據(jù)處理等根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)最新核準(zhǔn)的線性判定指南EP6-A2方案設(shè)定[3]，此方案是利用多項(xiàng)式回歸分析判定線性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 取尿蛋白濃度超過(guò)試劑說(shuō)明書上線性檢測(cè)上限的高值(H)樣本和尿蛋白定性為陰性的低值(L)樣本。

1.1.2 儀器與試劑 儀器為日本Hitachi 7600-210型全自動(dòng)生化分析儀；試劑為北京利德曼公司生產(chǎn)的腦脊液與尿蛋白測(cè)定試劑盒；校準(zhǔn)品為試劑盒配套校準(zhǔn)品。

1.2 方法

1.2.1 配制試驗(yàn)樣品 用尿蛋白的高值(H)樣品和低值(L)樣本，取H、L按L、0.9 L+0.1 H、0.8 L+0.2 H、0.7 L+0.3 H、0.6 L+0.4 H、0.5 L+0.5 H、0.4 L+0.6 H、0.3 L+0.7 H、0.2 L+0.8 H、0.1 L+0.9 H、H的比例分別配制11組尿蛋白濃度為等間距排列的試驗(yàn)樣本。

1.2.2 試驗(yàn)測(cè)驗(yàn) 將上述11組試驗(yàn)樣品在自建檢測(cè)系統(tǒng)中按隨機(jī)順序進(jìn)行各自項(xiàng)目的測(cè)定，每組樣品測(cè)試兩次。

1.3 計(jì)算

1.3.1 初步數(shù)據(jù)檢查

1.3.1.1 檢查數(shù)據(jù)是否有極端明顯的差異和錯(cuò)誤，如有，找出原因并重做實(shí)驗(yàn)。

1.3.1.2 以組數(shù)為X軸，測(cè)定濃度為Y軸繪制散點(diǎn)圖，檢查是否存在非常明顯的非線性；判定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有無(wú)明顯離群值。

1.3.1.3 計(jì)算重復(fù)性CV。

1.3.2 多項(xiàng)式回歸分析 逐點(diǎn)對(duì)數(shù)據(jù)做一次、二次和三次多項(xiàng)式回歸分析，其回歸方程分別為Y=b0+b1X(回歸自由度Rdf=2)、Y=b0+b1X+b2X2(回歸自由度Rdf=3)、Y= b0+b1X+b2X2+b3X3(回歸自由度Rdf=4)可以借助SPSS統(tǒng)計(jì)軟件完成。計(jì)算每個(gè)非線性系數(shù)斜率的標(biāo)準(zhǔn)差SEi(可由回歸程序算出)，然后進(jìn)行t檢驗(yàn)，判斷非線性系數(shù)是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即與0之間有無(wú)差異。

1.3.3 計(jì)算線性偏差(DL) 當(dāng)最適多項(xiàng)式不為線性時(shí)，要計(jì)算每個(gè)點(diǎn)的L。每個(gè)濃度處的DL計(jì)算如下：DLi=p(Xi)-(b0+b1Xi)，X的取值范圍從Xi到Xs，p(Xi)為最適多項(xiàng)式回歸模型在Xi處的值，因而DLi為在每個(gè)不同濃度處二次或三次多項(xiàng)式模型與一次多項(xiàng)式(線性)模型的差值。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 初步判斷未發(fā)現(xiàn)明顯的離群值。

2.2 計(jì)算CV經(jīng)計(jì)算得出本實(shí)驗(yàn)重復(fù)性CV為1.59%，小于實(shí)驗(yàn)室所規(guī)定的重復(fù)性目標(biāo)2%，數(shù)據(jù)重復(fù)性良好。

2.3 逐點(diǎn)回歸分析 當(dāng)P<0.05時(shí)，系數(shù)b與0有明顯差異，該曲線符合此階數(shù)函數(shù)，此時(shí)，回歸標(biāo)準(zhǔn)誤越小，說(shuō)明該模型為適合數(shù)據(jù)組。見(jiàn)表1。

表1 尿蛋白檢測(cè)線性范圍逐點(diǎn)多項(xiàng)式回歸

表2 每個(gè)濃度的線性偏離DL%值

注：-表示無(wú)數(shù)據(jù)。

2.4 計(jì)算線性偏離 第1點(diǎn)在四組模型DL%都大于5%，所以第1點(diǎn)不為線性范圍所接收。第1～5點(diǎn)模型中另外四點(diǎn)DL%小于5%，而第1～6點(diǎn)模型中DL3%大于5%，第1～7點(diǎn)模型中有四點(diǎn)DL%大于5%，綜上所述，本試驗(yàn)測(cè)定的線性范圍為第1～5點(diǎn)，即5.20～1 355.15 mg/L。見(jiàn)表2。

3 討 論

近年來(lái)，越來(lái)越多實(shí)驗(yàn)室按自己的意愿選擇檢測(cè)儀器、試劑、標(biāo)準(zhǔn)品組成自建檢測(cè)系統(tǒng)，所選擇的檢測(cè)儀器、試劑、標(biāo)準(zhǔn)品通常不配套或不完全配套，需對(duì)其測(cè)量分析線性范圍的進(jìn)行重新評(píng)價(jià)。

EP6-A2是CLSI最新核準(zhǔn)的線性判定指南，該方案判定線性的多項(xiàng)式回歸分析方法，從統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床要求兩個(gè)方面判定線性，其中涉及目測(cè)檢驗(yàn)、測(cè)量數(shù)據(jù)的精確度檢驗(yàn)和多項(xiàng)式回歸分析，此方法目前被認(rèn)為是判斷線性的較好方法[4-6]。該方案規(guī)定當(dāng)一個(gè)新的測(cè)量方法(廠家或?qū)嶒?yàn)室改良一個(gè)實(shí)驗(yàn)方法時(shí))需要建立新的線性范圍時(shí)，需要7～11個(gè)能覆蓋預(yù)期的測(cè)量范圍的不同濃度的標(biāo)本。生產(chǎn)商希望有更多的測(cè)量點(diǎn)(比預(yù)期的線性范圍寬20%～30%)，這樣能檢測(cè)到“拐點(diǎn)”，就能確定更寬的線性范圍。根據(jù)不精密度的大小，每個(gè)濃度水平測(cè)量2～4次。所以為了建立線性范圍，本實(shí)驗(yàn)用高值和低值濃度的樣本按比例精確配成等間距的不同濃度的11個(gè)樣本隨機(jī)測(cè)定2次，選擇的測(cè)量濃度范圍包含或等于廠家所聲明的最低和最高濃度范圍[7]。

EP6-A2是利用多項(xiàng)式回歸分析判定線性。多項(xiàng)式回歸的最大優(yōu)點(diǎn)是可以通過(guò)增加X(jué)的高階項(xiàng)對(duì)實(shí)測(cè)點(diǎn)進(jìn)行逼近直至滿意為止，從而建立最優(yōu)的多項(xiàng)式方程。另外，可在每個(gè)濃度水平判定非線性度。從本實(shí)驗(yàn)可得，第1～4點(diǎn)和第1～5點(diǎn)模型并不為線性，但可以通過(guò)測(cè)其非線性度判斷其仍為臨床可接受的線性，所以用EP6-A2線性評(píng)價(jià)方案是非?？陀^實(shí)用[8-9]。

結(jié)果可得出本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)離群值，重復(fù)測(cè)定比例誤差CV為1.59%，小于實(shí)驗(yàn)室所規(guī)定的誤差目標(biāo)2%，數(shù)據(jù)重復(fù)性好。第1～5點(diǎn)的數(shù)據(jù)經(jīng)回歸分析后得出的最適模型為三次多項(xiàng)式，但通過(guò)對(duì)其非線性度分析，判斷其仍為臨床可接受的線性，最后得出尿蛋白的線性范圍為5.20～1 355.15 mg/L。得出的線性范圍小于試劑盒給的線性范圍0～2 000 mg/L，所以在臨床檢驗(yàn)應(yīng)用中建議大于1 300 mg/L時(shí)要稀釋復(fù)查。

實(shí)驗(yàn)中用多項(xiàng)式回歸分析，得出的最適模型都不為線性模型，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)過(guò)程中存在較大的誤差，但實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好，原因可能為加樣不準(zhǔn)確造成誤差。所以在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，每個(gè)步驟都必須嚴(yán)格操作。也可能是基質(zhì)效應(yīng)影響了結(jié)果，Sviridow等[10]的研究表明尿液基質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果有很大影響，尤其是尿液離子強(qiáng)度，所以建議用患者尿液為L(zhǎng)標(biāo)本。11組試驗(yàn)數(shù)據(jù)只有5組數(shù)據(jù)在線性范圍以內(nèi)，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)前尿蛋白H設(shè)置得太高，如果更多的點(diǎn)在線性范圍內(nèi)，測(cè)得的線性范圍將更為精密。

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Application of EP6-A2 protocol for evaluating linear range of U-pro testing in self-built test system

ZHOUYuan-qing,LIANGRui-lian,LVWei-biao,LIANGYu-quan,CHENYing-hui

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedShundeFirstPeople′sHospital,SouthernMedicalUniversity,Shunde,Guangdong528300,China)

Objective To establish the linear range of U-pro in the self-built test system for clinical laboratory to provide reference for clinical detection.Methods 11 groups of sample were prepared according to the EP6-A2 document issued by the Clinical and Laboratory Standard Institute(CLSI),which had equal interval U-pro concentrations,every sample was tested twice.The data were conducted the polynomial regression for obtaining the linear range of U-pro by the SPSS software.Results TheCVof repeat test in the self-built test system was 1.59%,less than 2% which was ruled in the laboratory,the data were repeatable.After regression analysis on the data,the optimal model was the cubic polynomial,but through analyzing its nonlinearity,it was judged as the acceptable linearity for clinic.The corresponding linear range of U-pro in the self-built test system was 5.20-1 355.15 mg/L.Conclusion The linear range of U-pro in the self-built test system is 5.20-1 355.15 mg/L,which is less than the linear range of 0-2 000 mg/L provided by the kit instruction.Clinical laboratory should evaluate the analytical performance of testing systems to ensure the accuracy and reliability in the detection results.

U-pro; linear range; EP6-A2; self-built test system

周遠(yuǎn)清，男，本科，主任技師，主要從事臨床生化檢驗(yàn)工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.13.034

A

1672-9455(2015)13-1898-02

2015-01-25

2015-03-10)