外周血細(xì)胞因子對(duì)慢性乙型肝炎患者療效評(píng)判分析

芮志蓮，王永忠

(1.江蘇省溧陽(yáng)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 213300；2.江蘇省常州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 213000)

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·臨床研究·

外周血細(xì)胞因子對(duì)慢性乙型肝炎患者療效評(píng)判分析

芮志蓮1，王永忠2

(1.江蘇省溧陽(yáng)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 213300；2.江蘇省常州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 213000)

目的 探討慢性乙型肝炎患者外周血細(xì)胞因子對(duì)疾病療效判斷的評(píng)估價(jià)值。方法 選取溧陽(yáng)市人民醫(yī)院2012年3月至2013年3月收治的慢性乙型肝炎患者78例作為觀察組，并以同期開(kāi)展常規(guī)體檢的80例健康成人作為對(duì)照組，分別對(duì)兩組患者開(kāi)展血液相關(guān)檢查以及細(xì)胞培養(yǎng)，觀察組患者給予恩替卡韋聯(lián)合復(fù)方牛胎肝提取物片治療，觀察治療前后外周血細(xì)胞因子變化情況。結(jié)果 觀察組患者白細(xì)胞介素-4(IL-4)、γ干擾素水平與對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。觀察組中乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)陽(yáng)性患者的IL-4、γ干擾素水平與HBeAg陰性者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。觀察組患者治療后的各項(xiàng)肝功能指標(biāo)均獲明顯改善，IL-4與γ干擾素水平與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 乙型肝炎患者需要確切的指標(biāo)來(lái)指導(dǎo)治療的開(kāi)展以及效果的評(píng)價(jià)，通過(guò)對(duì)外周血細(xì)胞因子開(kāi)展相關(guān)檢測(cè)，可進(jìn)一步確定Th1/Th2免疫應(yīng)答的平衡狀態(tài)，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

慢性乙型肝炎； 細(xì)胞因子； 外周血

慢性乙型肝炎是臨床中較為多發(fā)的疾病之一[1]，在感染乙型肝炎病毒后，疾病的發(fā)展進(jìn)程主要由機(jī)體免疫和病毒決定。病毒侵襲后患者會(huì)表現(xiàn)出細(xì)胞免疫應(yīng)答與體液免疫應(yīng)答，在細(xì)胞免疫應(yīng)答中主要以T細(xì)胞為主[2]，其應(yīng)答類型與患者的免疫狀況存在十分密切的關(guān)系，疾病的慢性化主要與輔助T細(xì)胞1/輔助T細(xì)胞2(Th1/Th2)的失衡存在關(guān)聯(lián)。本研究選擇78例慢性乙型肝炎患者與80例健康人作為研究對(duì)象，分別檢測(cè)外周血細(xì)胞中的白細(xì)胞介素(IL)-4、IL-11以及γ干擾素的水平，以探討外周血細(xì)胞因子監(jiān)測(cè)對(duì)該病患者臨床療效的指導(dǎo)意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取溧陽(yáng)市人民醫(yī)院2012年3月至2013年3月收治的慢性乙型肝炎患者78例作為觀察組，所有患者均符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者中無(wú)甲型、丙型、丁型、戊型肝炎病毒或存在免疫缺陷型病毒感染者，同時(shí)本組患者在近期均未服用糖皮質(zhì)激素類藥物。觀察組中男43例，女35例；年齡21～55歲，平均(33.9±4.3)歲；乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)呈陽(yáng)性者64例，陰性者14例。同時(shí)選取在本院常規(guī)體檢的健康成人80例作為對(duì)照組，其中男45例，女35例；年齡22～57歲，平均(34.8±5.2)歲。兩組基本情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，組間具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 觀察組患者給予恩替卡韋聯(lián)合復(fù)方牛胎肝提取物片治療，恩替卡韋(江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20100019)，每次0.5 mg，每日1次。復(fù)方牛胎肝提取物片(山東希力藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H37023809)，每次40 mg，每日3次，以48周為1個(gè)療程。

1.2.2 檢測(cè)方法 兩組患者均檢測(cè)外周血細(xì)胞因子，先抽取15 mL肝素抗凝全血，按Ficoll密度梯度離心分離法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)2臺(tái)盼蘭染色證實(shí)細(xì)胞活力大于95%[3]。獲取的外周血單個(gè)核細(xì)胞置于液氮中保存,等待下一步檢測(cè)的實(shí)行。應(yīng)用含胎牛血清的培養(yǎng)液調(diào)整復(fù)蘇細(xì)胞的濃度，水平為1×106個(gè)/mL，再放置于24孔板內(nèi)，將獲取標(biāo)本置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，溫度為37 ℃，經(jīng)72 h后開(kāi)展離心處理，然后獲取上清液準(zhǔn)備檢測(cè)。應(yīng)用雙抗夾心法進(jìn)行細(xì)胞因子的檢測(cè)，選用美國(guó)R&D公司生產(chǎn)的相關(guān)試劑盒，嚴(yán)格依照說(shuō)明書(shū)分別對(duì)每個(gè)標(biāo)本中的細(xì)胞因子數(shù)量進(jìn)行仔細(xì)計(jì)算。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄兩組外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)IL-4、IL-10以及γ干擾素的水平，并將觀察組中HBeAg陽(yáng)性與HBeAg陰性患者分別開(kāi)展比較。同時(shí)對(duì)觀察組患者開(kāi)展治療效果評(píng)估，分別檢測(cè)每個(gè)標(biāo)本的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、血清總膽紅素以及清蛋白等肝功能指標(biāo)，依據(jù)改善程度來(lái)判斷治療的效果，并對(duì)本組患者治療前后的IL-4、IL-10以及γ干擾素開(kāi)展比較與分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者的IL-4、IL-10、γ干擾素水平比較 觀察組患者IL-4水平為(18.63±7.14)ng/L明顯高于對(duì)照組的(7.89±4.10)ng/L；γ干擾素水平為(39.41±19.35)ng/L，明顯低于對(duì)照組的(120.31±40.82)ng/L，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但觀察組IL-10水平[(578.83±153.02)ng/L]與對(duì)照組[(555.81±249.41)ng/L]比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 觀察組不同患者的IL-4、IL-10、γ干擾素水平比較 觀察組中HBeAg陽(yáng)性患者的IL-4水平為(22.01±9.31)ng/L，明顯高于HBeAg陰性者的(11.12±5.11)ng/L；γ干擾素水平為(29.31±12.03)ng/L，明顯低于HBeAg陰性者的(45.05±23.91)ng/L，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HBeAg陽(yáng)性者IL-10水平為(544.23±165.82)ng/L與HBeAg陰性者的(627.68±142.75)ng/L比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 觀察組治療前后各項(xiàng)肝功能指標(biāo)水平比較 觀察組患者治療后的ALT、AST、血清總膽紅素、清蛋白水平均明顯好于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.4 觀察組患者治療前后的IL-4、IL-10、γ干擾素水平比較 觀察組患者治療后的IL-4水平為明顯低于治療前；γ干擾素水平明顯高于治療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而IL-10水平治療前后比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表1 觀察組患者治療前后各項(xiàng)肝功能指標(biāo)水平比較±s，ng/L)

表2 觀察組患者治療前后的IL-4、IL-10、γ干擾素 水平比較

3 討 論

乙型肝炎病毒感染是當(dāng)前全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題[4]，研究顯示全球范圍內(nèi)感染該病毒的患者超過(guò)20億人次，主要包括慢性乙型肝炎患者以及慢性乙型肝炎病毒攜帶者，每一年度約有100萬(wàn)人死于該病[5]。慢性乙型肝炎存在反復(fù)發(fā)作的特征，在病情進(jìn)展過(guò)程中會(huì)經(jīng)過(guò)肝纖維化階段，進(jìn)而有可能演變成肝硬化甚至肝部腫瘤疾病[6]。直至目前，臨床針對(duì)該疾病仍缺乏指向性的治療措施，其治療問(wèn)題依然是臨床中的主要研究課題。乙型肝炎治療的關(guān)鍵在于有效抑制乙型肝炎病毒，進(jìn)一步控制肝纖維化，達(dá)到緩解病情急速惡化的目的。當(dāng)前臨床治療藥物主要為核苷類和干擾素[7]，本研究對(duì)78例乙型肝炎患者采用恩替卡韋與復(fù)方牛胎肝提取物片聯(lián)合治療的方式。恩替卡韋是20世紀(jì)末被研制出的新型鳥(niǎo)嘌呤核苷類似物藥物，具有較強(qiáng)的抗乙型肝炎病毒作用，能夠在患者體內(nèi)與磷酸組成三磷酸鹽，進(jìn)而抑制病毒多聚酶合成，抑制病毒的復(fù)制。復(fù)方牛胎肝提取物片是當(dāng)前臨床常用的抗肝纖維化藥物，藥物中小分子多肽含有的細(xì)胞因子會(huì)對(duì)星狀細(xì)胞的活化起到抑制作用，進(jìn)而降低肝纖維化進(jìn)程。雖然該病當(dāng)前臨床治療效果仍不滿意，但其治療理念一直處于不斷創(chuàng)新的狀態(tài)，藥物聯(lián)合治療是抗病毒的主要發(fā)展趨勢(shì)，但聯(lián)合方式仍需臨床進(jìn)一步研究證實(shí)[8]。

慢性乙型肝炎主要是由于細(xì)胞的免疫功能對(duì)乙型肝炎病毒產(chǎn)生障礙，進(jìn)而逐漸損傷肝細(xì)胞[9]，受到乙型肝炎病毒侵害后，機(jī)體抗原會(huì)出現(xiàn)進(jìn)一步分解的表現(xiàn)，演變成為多種抗原成分，轉(zhuǎn)給T細(xì)胞和B細(xì)胞。損傷后的肝細(xì)胞通常與患者免疫能力存在正相關(guān)性，由于Th1/Th2類細(xì)胞的進(jìn)一步失衡，會(huì)表現(xiàn)出多種病理變化。抗原呈遞細(xì)胞將特異性抗原轉(zhuǎn)給Th細(xì)胞后，會(huì)進(jìn)一步分化成為T(mén)h1/Th2細(xì)胞亞群。在Th1中以IL-2與γ干擾素為主，會(huì)不斷提高細(xì)胞的毒性作用，激發(fā)超敏反應(yīng)引起媒介轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答。IL-4、IL-6以及IL-10是Th2的主要表達(dá)指標(biāo)，均會(huì)引發(fā)抗體不斷生成進(jìn)而出現(xiàn)體液免疫應(yīng)答[10]。當(dāng)Th1/Th2失衡后發(fā)生了慢性乙型肝炎疾病[11]。

Th1/Th2中免疫應(yīng)答平衡可保證患者機(jī)體內(nèi)的免疫功能趨于正常。肝組織受損與清除病毒和Th1分化存在相關(guān)性。Th1細(xì)胞因子逐漸增多后細(xì)胞的免疫能力也會(huì)增強(qiáng)，使免疫反應(yīng)提升進(jìn)而增加了病毒對(duì)臟器的損傷程度[12]。有研究顯示當(dāng)患者的乙型肝炎病毒基因水平下降時(shí)其γ干擾素會(huì)明顯增加[13]。本研究分別對(duì)78例乙型肝炎患者與80例健康成人開(kāi)展了IL-4、IL-10以及γ干擾素的相關(guān)檢測(cè)，結(jié)果顯示觀察組患者的IL-4明顯高于對(duì)照組患者，而γ干擾素水平明顯低于對(duì)照組；同時(shí)觀察組患者中HBeAg呈陽(yáng)性的患者IL-4與γ干擾素水平差異表現(xiàn)得更加明顯，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。以上結(jié)果說(shuō)明觀察組患者的免疫功能較低，而Th1/Th2免疫應(yīng)答細(xì)胞因子存在負(fù)反饋效果。同時(shí)，研究還對(duì)78例乙型肝炎患者開(kāi)展了藥物治療，經(jīng)過(guò)48周的治療后本組患者的各項(xiàng)肝功能指標(biāo)均獲得好轉(zhuǎn)，提示病情有明顯好轉(zhuǎn)。治療后對(duì)觀察組患者開(kāi)展的相關(guān)檢測(cè)表示，IL-4水平明顯下降，而γ干擾素水平明顯上升，提示治療對(duì)Th1/Th2型免疫應(yīng)答起到了有效的調(diào)控與誘導(dǎo)，逐漸改善了Th1/Th2免疫應(yīng)答的平衡，進(jìn)而患者獲得了明顯的改善。說(shuō)明針對(duì)抗病毒治療患者開(kāi)展外周血細(xì)胞因子檢驗(yàn)，能夠依據(jù)其變化情況來(lái)綜合評(píng)估患者機(jī)體免疫的改善程度。

綜上所述，乙型肝炎患者病情遷延程度與乙型肝炎病毒存在密切的相關(guān)性，臨床治療主要為抑制或阻止乙型肝炎病毒基因的復(fù)制，應(yīng)用抗病毒類藥物治療可獲得減緩病情發(fā)展的效果。經(jīng)過(guò)臨床治療后，Th1/Th2型免疫應(yīng)答會(huì)得到有效的調(diào)控與誘導(dǎo)，進(jìn)而促進(jìn)免疫應(yīng)答逐漸恢復(fù)平衡。但治療也需要確切的效果評(píng)價(jià)指標(biāo)來(lái)指導(dǎo)治療的開(kāi)展以及效果的評(píng)價(jià)，通過(guò)對(duì)外周血細(xì)胞因子開(kāi)展相關(guān)檢測(cè)，可進(jìn)一步確定Th1/Th2免疫應(yīng)答的平衡狀態(tài)，可作為乙型肝炎患者治療效果的參考指標(biāo)。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.04.036

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1672-9455(2015)04-0523-02

2014-04-24

2014-08-12)