影響新生兒干血片G6PD篩查試驗結(jié)果的相關(guān)因素分析

陳丕績，蔣 明，謝意文，蔡巧青

(1.廣東省深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院檢驗科 518081;2.北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦產(chǎn)科，深圳 518000)

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·論 著·

影響新生兒干血片G6PD篩查試驗結(jié)果的相關(guān)因素分析

陳丕績1，蔣 明1，謝意文1，蔡巧青2

(1.廣東省深圳市鹽田區(qū)人民醫(yī)院檢驗科 518081;2.北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦產(chǎn)科，深圳 518000)

目的 分析新生兒干血片紅細胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)篩查試驗過程中可能產(chǎn)生影響的各類因素，為提高臨床質(zhì)控水平、有效減少檢測過程中的外在影響因素提供參考。方法 以該院2013年6月至2014年5月862例新生兒為研究對象，分別進行受試新生兒基本資料、標本留置時間、溫度、打孔部位、血片去除、加酮試劑后儀器測定時間的分組研究，探討G6PD測定結(jié)果的影響因素。結(jié)果 季節(jié)性上，春夏季新生兒G6PD水平明顯低于秋冬季；分娩方式上，陰道產(chǎn)G6PD水平明顯低于剖宮產(chǎn)；標本留置時間上，留置時間越長，G6PD水平越低；溫度方面，2～8 ℃冷藏G6PD水平明顯高于室溫；血片去除方面，去除血片的G6PD水平明顯高于不去除血片；加酮試劑后儀器測定時間方面，隨著測定時間的延長，G6PD水平逐漸下降。干血片G6PD檢測結(jié)果在季節(jié)、分娩方式、標本留置時間、溫度、血片去除和加酮試劑后儀器測定時間方面檢測數(shù)據(jù)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。性別和打孔部位對G6PD水平變化無明顯影響(P>0.05)。結(jié)論 應(yīng)在新生兒G6PD篩查過程中建立起完善有效的管理與質(zhì)控機制，加強管理，并根據(jù)影響因素適當調(diào)整臨床診斷的臨界點，以減少假陰性或假陽性的產(chǎn)生，提高臨床新生兒篩查的工作質(zhì)量。

新生兒； 干血片； 紅細胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶； 影響因素

紅細胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)是維持紅細胞膜穩(wěn)定的重要元素，一旦出現(xiàn)G6PD缺乏，紅細胞易受損傷因子分割，引起血管內(nèi)溶血誘發(fā)新生兒高膽紅素血癥以及兒童生長發(fā)育期間的溶血性貧血，對嬰幼兒的健康和發(fā)育造成威脅[1-2]。在我國，新生兒早期篩查G6PD是重要的防治新生兒高膽紅素血癥的手段，主要通過濾紙干血法進行G6PD的檢測[3]。但由于血樣中檢測物水平相對較低，又是濾紙檢查，G6PD的整個檢測過程中影響因素較多，對檢測結(jié)果產(chǎn)生直接影響，加強檢測過程中的質(zhì)量監(jiān)控十分重要。本研究通過對本院新生兒干血片G6PD篩查試驗過程中的各類因素進行分析，希望為提高臨床質(zhì)控水平、有效減少檢測過程中的外在影響因素提供參考。

1 資料與方法

1．1 一般資料 以本院2013年6月至2014年5月862例新生兒為研究對象，包括男442例，女420例。陰道產(chǎn)528例，剖宮產(chǎn)334例。孕周36+2～41+3周，平均(39.2±1.6)周。全部新生兒均于娩出后72 h足跟部采血，并應(yīng)用美國S&S903型濾紙制備成濾紙血片標本，經(jīng)自然陰干后分置于塑料袋內(nèi)，于2～8 ℃環(huán)境下保存待測。

1．2 試驗設(shè)計

1．2．1 基本資料研究 對受試新生兒的性別、出生時間、分娩方式等進行統(tǒng)計記錄。

1．2．2 標本留置時間研究 于標本內(nèi)隨機選取40例血樣，并分成4組，分別于標本采集后1～4 d給予G6PD水平檢測。

1．2．3 溫度研究 于剩余標本內(nèi)隨機選取20例血樣，均放置1 d后進行G6PD檢測，分為兩組，一組置于2～8 ℃保存，一組置于室溫下保存。

1．2．4 打孔部位研究 隨機選取剩余標本100例于2～8 ℃環(huán)境下保存1 d后檢測，分別行中央和邊緣血片打孔各50例。

1．2．5 血片去除研究 剩余標本內(nèi)隨機選取100例，分別實施血片去除與不去除試驗各50例。

1．2．6 加酮試劑后儀器測定時間研究 剩余標本內(nèi)隨機選取40例，加酮試劑前操作相同，加酮試劑后分別于酮試劑加入時,加入后5、10、15 min進行G6PD檢測。

1．3 G6PD檢測結(jié)果 采用3 mm直徑打孔鉗于濾紙干血片上進行血片打孔，置入包被板孔內(nèi)，相關(guān)試驗操作方法嚴格參照試劑盒說明，試劑盒及多標記分析儀為美國珀金-埃爾默股份有限公司提供，采用機載軟件進行G6PD的結(jié)果處理。

2 結(jié) 果

新生兒干血片G6PD檢測結(jié)果影響因素見表1。季節(jié)性上，春夏季新生兒G6PD水平明顯低于秋冬季；分娩方式上，陰道產(chǎn)兒G6PD水平明顯低于剖宮產(chǎn)兒；標本留置時間上，留置時間越長，G6PD水平越低；溫度方面，2～8 ℃冷藏G6PD水平明顯高于室溫；血片去除方面，去除血片的G6PD水平明顯高于不去除血片；加酮試劑后儀器測定時間方面，隨著測定時間的延長，G6PD水平逐漸下降。干血片G6PD檢測結(jié)果在季節(jié)、分娩方式、標本留置時間、溫度、血片去除和加酮試劑后儀器測定時間方面比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。性別和打孔部位對G6PD水平變化無明顯影響，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 干血片G6PD檢測結(jié)果影響因素比較(n=862，U/gHb)

續(xù)表1 干血片G6PD檢測結(jié)果影響因素比較(n=862，U/gHb)

3 討 論

新生兒的臨床疾病篩查是我國現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)發(fā)展過程中的要素之一，也是實踐我國優(yōu)生優(yōu)育社會理念的重要保障[4-5]。新生兒篩查有助于早期發(fā)現(xiàn)新生兒缺陷，盡早針對性地實施治療，從而降低出生缺陷率、提高患兒生長發(fā)育水平[6]。G6PD缺乏癥為X性連鎖顯性遺傳類疾病，屬于紅細胞酶遺傳性缺陷，在我國的發(fā)病范圍較廣，發(fā)病率主要表現(xiàn)為南高北低的態(tài)勢[7]。據(jù)統(tǒng)計全球約有4億人患有G6PD缺乏癥[8]。新生兒G6PD缺乏癥最主要的臨床表現(xiàn)是新生兒膽紅素血癥，可致核黃疸的發(fā)生，嚴重影響患兒智力的發(fā)育。隨著新生兒膽紅素血癥臨床重視程度的提高，G6PD早期篩查也越來越突顯出其重要地位。

G6PD目前在我國臨床檢測中仍以濾紙片干血斑標本，即干血片為主。在實施血液標本檢測實驗的整個過程中，需要經(jīng)歷標本采集、保存、遞送、檢測、結(jié)果審核等多個步驟[9]，對于疑似病例還需復(fù)檢，流程相對復(fù)雜，過程中可能影響檢測結(jié)果的外在因素也較多。再加上G6PD本身在血液標本中水平較低，更加大了對準確檢測的影響性。因此探討新生兒干血片G6PD篩查的影響因素對于減少實驗過程中的不利因素、提高篩查質(zhì)量和提升臨床診斷率具有重要意義。

在本研究中，作者以本院新生兒娩出72 h后足部血樣為研究對象，通過不同的分組方式對可能影響G6PG水平的各類因素進行比較分析。結(jié)果顯示，新生兒的性別和檢測過程中的打孔部位對G6PD的檢測結(jié)果無明顯影響，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。但檢測季節(jié)、分娩方式、標本留置時間、溫度、血片去除與否及加酮試劑后儀器測定時間等方面對新生兒干血片G6PD水平存在明顯影響，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

本研究結(jié)果表明，秋冬季節(jié)G6PD的活性高于春夏季，剖宮產(chǎn)分娩的新生兒血樣干血片G6PD活性高于陰道分娩新生兒，提示在實施G6PD篩查診斷時對于臨界值的選取應(yīng)參考季節(jié)和分娩方式因素。標本留置時間上，隨著留置時間的延長，G6PD逐漸失活，說明在進行相關(guān)檢測時，最好在完成濾紙干血片置備后，盡早檢測。干血片保存溫度顯示，2～8 ℃低溫環(huán)境可保持G6PD有較高的活性，而置于室溫下的標本G6PD水平明顯下降，提示在進行標本置備與保存時，應(yīng)選擇低溫保存，降低G6PD的失活率。不去除血片的測定結(jié)果低于去除血片的檢測結(jié)果，主要原因可能與加入酮試劑未沉入反應(yīng)板井底有關(guān)，如紙片仍懸浮于表層，在實施激光及熒光測定時紙片產(chǎn)生阻礙作用，使檢測到的激光或熒光強度減弱，直接影響G6PD的檢測結(jié)果。當然，隨著儀器檢測時間的不斷延長，G6PD的活性也隨之不斷下降，影響檢測結(jié)果的準確性，建議加入酮試劑后應(yīng)盡快應(yīng)用儀器檢測。

綜上所述，新生兒干血片的標本采集、保存、運輸、檢測等過程均可能對G6PD的檢測水平產(chǎn)生影響，包括溫度、時間、分娩方式等，季節(jié)因素影響G6PD水平可能與溫度也有一定相關(guān)性，但目前尚無研究明確季節(jié)因素對G6PD檢測結(jié)果影響的根本原因。為提高干血片G6PD的檢測準確性，應(yīng)在新生兒篩查的整個過程中建立起完善有效的管理與質(zhì)控機制，加強管理，減少負面因素，并根據(jù)影響因素適當調(diào)整臨界點，以減少假陰性或假陽性的產(chǎn)生，綜合提高臨床新生兒篩查的工作質(zhì)量[10]。

[1]舒慧英，于潔，李曉靜．新生兒葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥的篩查現(xiàn)狀[J/CD]．中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志:電子版，2013，9(5)：696-700．

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Analysis of factors infecting result of neonatal dried blood G6PD screening test

CHENPi-ji1,JIANGMing1，XIEYi-wen1，CAIQiao-qing2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,People′sHospitalofYantianDistrict,Shenzhen,Guangdong518081,China;2.theShenzhenHospitalofPekingUniversity,Shenzhen,Guangdong518000,China)

Objective To analyze factors which might affect the result of neonatal dried blood spots glucose tablets of red blood cell -6- dehydrogenase (G6PD) screening test,to improve the clinical quality control level,effectively reduce the external factors in the process of detection.Methods A total of 862 neonatus in June 2013 to May 2014 were selected in this research.According to the basic data,sample retention time,temperature,punching parts,blood removal,addition of ketone reagent determination time,all the subjects were grouped and investigated the factors affecting the determination results of G6PD.Results In terms of season,G6PD level of neonatus in spring and summer was significant lower than that of autumn and winter.In the terms of delivery mode,G6PD level of neonatus by vaginal birth was significant lower than that by cesarean section.In terms of samples indwelling time,the longer the indwelling time,the lower the G6PD level.In terms of temperature,the G6PD level of samples stored up in 2～8 ℃ was significant higher than that in room temperature.In terms of blood removal,G6PD level removed blood spots was significant higher than that of neonatus didn′t remove blood spots.In terms of addition of ketone reagent instrument for measuring time,G6PD level decreased along with the extension of time of determination.The G6PD levels of different groups divided by season,mode of delivery,sample retention time,temperature,blood removal and addition of ketone reagent instrument for measuring time were significant different (P<0.05),but those levels of different groups divided by gender and drilling sites had no significant different (P>0.05).Conclusion Management and quality control system should be established in the screening test of G6PD,the management should be strengthened to reduce the false negative or positive results.

neonatus； dried blood spots； erythrocyte glucose -6- phosphate dehydrogenase； influence factor

陳丕績，男，本科，副主任技師，主要從事檢驗醫(yī)學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.04.028

A

1672-9455(2015)04-0505-02

2014-06-10

2014-10-20)