細(xì)胞核增殖抗原和p53與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Her-2基因表達(dá)的關(guān)系

丁麗，蒲純，喬昱，李金明，張永強(qiáng)

(1.北京醫(yī)院,a 腫瘤內(nèi)科，b呼吸內(nèi)科,北京 100730;2.衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心)

·論著·

細(xì)胞核增殖抗原和p53與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Her-2基因表達(dá)的關(guān)系

丁麗1a，蒲純1b，喬昱1a，李金明2，張永強(qiáng)1a

(1.北京醫(yī)院,a 腫瘤內(nèi)科，b呼吸內(nèi)科,北京 100730;2.衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心)

[摘要]目的分析細(xì)胞核增殖抗原(Ki-67)、p53在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)中的表達(dá)情況及其臨床病理表現(xiàn)特點(diǎn)，并探討Ki-67、p53與Her-2表達(dá)之間的關(guān)系。方法回顧性分析228例乳腺IDC患者的臨床資料，其中Her-2陽性88例，Her-2陰性140例，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)所有乳腺IDC標(biāo)本中Ki-67 及p53的表達(dá)情況，分析Ki-67和p53的表達(dá)與乳腺癌的臨床病理特點(diǎn)及Her-2表達(dá)之間的相關(guān)性。結(jié)果Ki-67高表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期及脈管癌栓均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而在激素受體陰性、絕經(jīng)前、腫瘤分級(jí)髙及Her-2陽性患者中Ki-67高表達(dá)率明顯增高(P<0.05)；p53陽性與月經(jīng)狀態(tài)、腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期及脈管癌栓均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而在激素受體陰性及 Her-2陽性患者中p53陰性率明顯增高(P<0.05)； Her-2陽性乳腺IDC中，p53陽性表達(dá)率為58.0%，Ki-67高表達(dá)率為88.6%，Her-2陰性組中p53及Ki-67高表達(dá)率分別為40.7%和51.4%，兩者相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但Ki-67髙表達(dá)在p53陽性與陰性患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論Ki-67和p53在Her-2陽性乳腺IDC中均表達(dá)升高，提示可以作為乳腺癌預(yù)后不良因素。

[關(guān)鍵詞]癌,導(dǎo)管,乳腺；基因,erbB-2;KI-67抗原;基因,p53

近年來,乳腺癌在我國(guó)發(fā)病率不斷上升，在一些大城市發(fā)病率和死亡率均已躍居女性惡性腫瘤的首位[1]。大量研究已證實(shí)乳腺癌的預(yù)后與ER、PR及Her-2表達(dá)相關(guān)，而其中Her-2陽性表達(dá)是乳腺癌獨(dú)立預(yù)后不良因素[2]。細(xì)胞核增殖抗原(Ki-67)是在增殖細(xì)胞中表達(dá)的一種與細(xì)胞凋亡、增殖相關(guān)的核抗原，目前Ki-67已成為檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性最可靠的指標(biāo)之一[3]；p53是研究比較廣泛的抑癌基因，其突變與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]，p53過度表達(dá)多提示原癌基因在不斷擴(kuò)增，導(dǎo)致腫瘤的深部浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，預(yù)示惡性程度高，預(yù)后差。本研究回顧性分析Ki-67和p53在Her-2陽性和陰性的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)情況，并探討其與Her-2表達(dá)之間的關(guān)系及臨床意義。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象選取北京醫(yī)院2010年9月至2014年9月共228例原發(fā)性乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)患者臨床資料，所選均為女性,年齡28~82歲，平均年齡(55.0±11.9)歲。所有患者均經(jīng)手術(shù)病理明確診斷，手術(shù)方式:改良根治術(shù)192例，保乳術(shù)17例，局部擴(kuò)大切除術(shù)19例。HER-2陽性88例(占38%)，年齡30~76歲，平均年齡(52.7±13.6)歲；HER-2陰性乳腺癌患者140例(占62%)，年齡28～82歲，平均年齡(55.0±11.7)歲。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期83例、Ⅱ期110例、Ⅲ期35例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者137例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者91例。

1.2研究方法 參照美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)/美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)(ASCO/CAP)病理診斷指南，對(duì)雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)結(jié)果評(píng)判采用免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行。ER和PR陽性細(xì)胞數(shù)>1%為陽性；Her-2的結(jié)果評(píng)判采用免疫組織化學(xué)方法及FISH檢測(cè)相結(jié)合辦法，Her-2(+++)視為陽性，Her-2(+)或(-)視為陰性，對(duì)Her-2(++)者行FISH檢測(cè)，若存在基因擴(kuò)增為陽性，否則視為陰性。

Ki-67 陽性細(xì)胞為細(xì)胞核棕黃色著色，光鏡下觀察，5個(gè)高倍鏡視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞所占的細(xì)胞總數(shù)百分比。Ki-67陽性細(xì)胞數(shù)<14%為低表達(dá)，≥14%為高表達(dá)。p53蛋白：細(xì)胞核內(nèi)棕色顆粒為陽性，每張切片檢測(cè)10個(gè)視野(×400)，陽性細(xì)胞≤5%為陰性，陽性細(xì)胞>5%為陽性。

2結(jié)果

2.1Ki-67與乳腺IDC臨床病理特征的關(guān)系 Ki-67的表達(dá)水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期及脈管癌栓均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在激素受體(ER和PR)陰性、絕經(jīng)前患者、腫瘤分級(jí)高以及Her-2陽性的患者中Ki-67高表達(dá)比率明顯增高(P<0.05)，見表1。

2.2p53與乳腺IDC臨床病理特征的關(guān)系p53陽性與月經(jīng)狀態(tài)、腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期及脈管癌栓均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，在ER、PR陽性的患者中，p53陽性的比率明顯低于p53陰性患者(χ2=54.26 ,P<0.05),在Her-2陽性的患者P53陽性比率明顯高于P53陰性患者(χ2=11.79，P<0.05)，見表1。

2.3Ki-67和Her-2在乳腺IDC中表達(dá)情況分析全組228例乳腺IDC患者中，Ki-67高表達(dá)占65%。亞組分析可見Her-2陽性乳腺IDC中Ki-67高表達(dá)率為88.6%，Her-2陰性組中Ki-67高表達(dá)率為51.4%,兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=32.62，P<0.05)，見表2。

2.4p53和Her-2在乳腺IDC中表達(dá)情況分析 全組乳腺IDC患者中p53陽性占47%，P53陽性在Her-2陽性乳腺IDC為58.0%，在Her-2陰性組為40.7%，兩者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.79，P<0.05)，見表3。進(jìn)一步分析顯示，Ki-67在p53陽性與陰性患者中高表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.56,P>0.05)。

3討論

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，乳腺癌被認(rèn)為是一組高度分子異質(zhì)性疾病，僅僅依據(jù)臨床特征對(duì)乳腺癌進(jìn)行分類已不能反映該病的本質(zhì)，且對(duì)臨床治療的指導(dǎo)意義逐漸減弱[5]。目前已知ER、PR和Her-2是判斷乳腺癌預(yù)后和指導(dǎo)治療的重要分子標(biāo)志物，其中Her-2 是乳腺癌預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,Her-2陽性的乳腺癌患者往往具有生存期短,易轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)等特點(diǎn)[6-7]。然而曲妥珠單抗單藥治療對(duì)腫瘤緩解率不到30%，即使聯(lián)合化療依然會(huì)出現(xiàn)耐藥或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[7]。因此臨床需要探索更多與乳腺癌患者復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)。

表1　乳腺IDC中p53、Ki-67的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

表2　Her-2與Ki-67表達(dá)之間關(guān)系[例(%)]

注：Her-2陽性乳腺IDC中Ki-67高表達(dá)率與Her-2陰性組中Ki-67高表達(dá)率比較，χ2=32.62，P=0.000

表3　Her-2與p53表達(dá)之間關(guān)系[例(%)]

注：Her-2陽性乳腺IDC中，p53陽性表達(dá)率與Her-2陰性組中p53高表達(dá)率比較，χ2=11.79，P=0.003

Ki-67是與細(xì)胞增殖高度相關(guān)的核抗原，是Ki-67蛋白的簡(jiǎn)稱，Ki-67廣泛表達(dá)于增值活躍的組織中，而在靜息細(xì)胞中的表達(dá)缺乏，這一特點(diǎn)使其被作為細(xì)胞核增殖標(biāo)記基因[8-10]。乳腺癌組織中Ki-67 表達(dá)水平隨著腫瘤惡性程度的增高而逐漸增高，與乳腺癌的預(yù)后密切相關(guān)[11-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67 在Her-2陽性乳腺IDC中表達(dá)明顯高于Her-2陰性乳腺IDC，這與Her-2陽性乳腺癌惡性度高,預(yù)后欠佳等臨床表現(xiàn)相符合。本研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67高表達(dá)多見于激素受體陰性的患者，考慮可能與激素受體陽性的乳腺癌一般惡性程度低，生長(zhǎng)及增殖速度慢有關(guān)。有研究顯示[13]，Ki-67 在乳腺癌組織中高表達(dá)與乳腺癌原發(fā)腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，提示Ki-67 可作判斷腫瘤侵襲力的標(biāo)志。但王建法等[14]報(bào)道Ki-67 表達(dá)與乳腺癌臨床分期有關(guān)，而與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示Ki-67在絕經(jīng)前及組織學(xué)分級(jí)高的患者中高表達(dá)，這也進(jìn)一步說明了Ki-67 高表達(dá)提示腫瘤惡性度高，可以作為一種不良預(yù)測(cè)因子。

p53基因是乳腺癌中研究最多的抑癌基因，野生型p53主要通過誘導(dǎo)可逆或不可逆的細(xì)胞周期阻滯，提高DNA的修復(fù)能力和抑制新生血管形成，發(fā)揮其抑制增殖的作用，突變型p53失去其抑癌作用[15],突變型p53蛋白可促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。p53基因在正常細(xì)胞中含量很低，一般檢測(cè)不出來，但是突變型的p53基因產(chǎn)生的蛋白半衰期長(zhǎng)達(dá)2~12個(gè)小時(shí)，較易被檢測(cè)，免疫組織化學(xué)中只有突變型的P53基因的表達(dá)產(chǎn)物可以被檢測(cè)出。本研究結(jié)果顯示其突變率47%。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為[4，15-16]，過度表達(dá)的p53提示原癌基因的擴(kuò)增，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞活動(dòng)，引起腫瘤深部浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。本研究中，p53陽性與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期及病理分級(jí)等均無明顯相關(guān)性，但Her-2陽性乳腺IDC患者中p53陽性表達(dá)率明顯高于陰性組(58%，41%)，提示p53與Her-2在促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展方面可能有協(xié)同作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，在Her-2陽性乳腺IDC患者中Ki-67髙表達(dá)及p53陽性表達(dá)明顯升髙，提示三者可能在乳腺IDC的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用。本研究還發(fā)現(xiàn)，盡管Her-2陽性乳腺IDC中Ki-67 和p53均為高表達(dá)，但Ki-67 髙表達(dá)率在p53陽性與陰性患者中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，反之亦然，一方面可能與樣本構(gòu)成不同有關(guān)，另一方面腫瘤發(fā)生發(fā)展本身過程復(fù)雜，涉及多種基因多個(gè)調(diào)控因子的相互作用，三者之間的關(guān)系還有待于更深入的研究。

參考文獻(xiàn)

[1]徐光煒，胡永昇，闞秀.中國(guó)10萬婦女乳腺癌篩查初探[J].中國(guó)腫瘤，2010,19(9):565-568.

[2]Liu AN,Sun P,Liu JN.Clinicopathologic characteristics and prognostic factors in patients with operable HER-2 overexpressing breast cancer[J].Asian Pac J Cancer Prev,2012,13(4):1197-1201.

[3]楊雪琴，李雁.Ki67 在乳腺癌的研究進(jìn)展[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2011，32(6)：852-856.

[4]Norherg T，Klanr S，Karl G，et al.Increased p53 mutation frequency during tumor progress,results from a breast cancer cohort[J].Cancer Ros，2001,61(22)：8317-8321.

[5]Gnant M，Harbeck N，Thomssen C.St.Gallen2011：summary of the consensus discussion[J].Breast Care(Basel)，20l1，6：136-141.

[6]李慧慧，馬飛，曾瑄,等.乳腺癌Her-2的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2011,91(2)：76-80.

[7]Marty M,Cognetti F,Maranichi D,et al.Randomized phase II trial of the efficacy and safety of trastuzumab combined with docetaxelin patients with human epidermal growth factor receptor 2-positive metastatic breast cancer administered as first-line treatment: the M77001 Study Group[J].J Clin Oncol,2005,23(19):4265-4274.

[8]王桂芝,盧書信,張克政.caspase-3、bcl-2基因及Ki-67在胃癌前病變中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)臨床保健雜志,2004,7(3):198-200.

[9]徐本群，馬娟，周瓊，等.P16與Ki67的表達(dá)在子宮頸上皮內(nèi)瘤變組織學(xué)診斷與分級(jí)中的臨床意義[J].安徽醫(yī)藥,2013,17(9):1540-1542.

[10] 黃利,彭瓊,甘惠中,等.p53蛋白、ki-67抗原和表皮生長(zhǎng)因子受體在胃癌組織的表達(dá)及意義[J].中國(guó)臨床保健雜志,2012,15(2):153-156.

[11] Milde-Langosch K,Kam T,Muller V,et al.Validity of proliferation markers KI-67,TOP2A,and RacGAP1 in molecular subgroups of breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat,2013,137(1):57-67.

[12] Yerushalmi R,Woods R,Ravdin PM,et al.KI-67 in breast cancer: prognostic and predictive potential[J].Lancet Oncol,2010,11(2):174-183.

[13] Klintman M，Bendahl PO，Grabau D，et al.The prognostic value of Ki-67 is dependent on estrogen receptor status and histological grade in premenopausal patients with node-negative breast cancer[J].Mod Pathol，2010，23(2)：251-259.

[14] 王建法，顧超，葉宣光.乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Ki-67、VEGF 表達(dá)的相關(guān)性及其臨床意義[J].實(shí)用癌癥雜志，2009，24(5)：450-451.

[15] Panahi M,Saki N,Ashourzadeh S,et al.Expressional correlation of human epidermal growth factor receptor 2,estrogen/progesterone receptor and protein 53 in breast cancer[J].Asian Pac Cancer Prev,2013,14(6):3699-3703.

[16] 李寶江，朱志華，王軍亞,等.Ki67、p53、VEGF 和C-erbB-2 在乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性研究及其臨床意義[J].癌癥，2004，23(10):1176-1179.

The association between the expression of Ki-67,p53 and Her-2 in breast invasive ductal carcinomaDingLi*,PuChun,QiaoYu,LiJinmin,ZhangYongqiang(*DepartmentofMedicalOncology,BeijingHospital,Beijing100730,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of Ki-67 and p53 in breast invasive ductal carcinoma(IDC) and the association between the human epidermal growth factor receptor 2 (Her-2) expression.MethodsA total of 228 breast IDC patients were retrospectively collected and analyzed..The expression of p53 and Ki-67 were detected by streptavidin-peroxidase (SP) immunohistochemistry assay.The association between expression of p53,Ki-67 and Her-2 were analyzed.ResultsKi-67 expression was statistically correlated with menopausal status and pathology grade (P<0.05),but there was no statistically significant difference in tumor size,clinical stages and lymph node metastasis (P>0.05).There was no significant correlation between p53 expression with menopausal status,pathology grade,tumor size and lymph node metastasis (P>0.05).The expression of Ki-67 and p53 were negatively correlated with estrogen receptor (ER) (P=0.00) and progesterone receptor (PR) (P=0.00),and positively correlated with Her-2 overexpression (P=0.00).The positive expression rates of p53 and Ki-67 in breast IDC patients with Her-2 positive were significantly higher than those in patients with Her-2 negative (P<0.05).However，there was no correlation between the expression of Ki-67 and p53 (P>0.05).ConclusionKi-67 and p53 could be used as prognostic factors in breast IDC,which may play a synergetic role in the carcinogenesis and progression of breast IDC.

[Key words]Carcinoma,ductal,breast;Genes,erbB-2;KI-67 antigen;Genes,p53

(收稿日期：2015-03-03)

Corresponding author:Zhang Yongqiang,Email: 13701314630@163.com

通信作者：張永強(qiáng)，博士，主任醫(yī)師，Email:13701314630@163.com

作者簡(jiǎn)介：丁麗，副主任醫(yī)師，Email:doctording2012@163.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(BJ-2011-046)

中圖分類號(hào):R737.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

DOI:10.3969/J.issn.1672-6790.2015.06.001