• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    環(huán)境濃度抗生素選擇性壓力改變活性污泥微生物群落結(jié)構(gòu)

    2015-03-14 01:18:06張瀅楹耿金菊任洪強(qiáng)許柯丁麗麗
    生態(tài)毒理學(xué)報(bào) 2015年5期
    關(guān)鍵詞:革蘭氏活性污泥菌門

    張瀅楹,耿金菊,任洪強(qiáng),許柯,丁麗麗

    南京大學(xué)環(huán)境學(xué)院 污染控制與資源化研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,南京210023

    環(huán)境濃度抗生素選擇性壓力改變活性污泥微生物群落結(jié)構(gòu)

    張瀅楹,耿金菊*,任洪強(qiáng),許柯,丁麗麗

    南京大學(xué)環(huán)境學(xué)院 污染控制與資源化研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,南京210023

    四環(huán)素;磺胺甲噁唑;活性污泥;微生物群落結(jié)構(gòu);廢水處理效能

    近年來,隨著抗生素的大量使用,由此產(chǎn)生的生態(tài)環(huán)境影響也越發(fā)受到人們的關(guān)注。全球抗生素的年消耗量約在10~20萬t,85%以上的抗生素或其代謝產(chǎn)物經(jīng)由病人和動(dòng)物的糞尿排出體外,從而進(jìn)入到生態(tài)環(huán)境[1-2]。進(jìn)入環(huán)境中的抗生素除了會(huì)對土壤和表層水體等造成化學(xué)污染外,還可能誘導(dǎo)產(chǎn)生耐藥細(xì)菌和抗性基因,且抗性基因在不同環(huán)境介質(zhì)中的傳播、擴(kuò)散并持久性殘留,抗性基因往往可能比抗生素本身的危害更大[3]。目前,城市生活污水、醫(yī)院污水、地表水甚至部分地下水都已檢出多種抗生素的存在,濃度在ng·L-1~ mg·L-1量級。四環(huán)素(TC)和磺胺甲噁唑(SMX)作為常用的廣譜類抗生素,被廣泛地用于治療細(xì)菌感染引起的疾病,在環(huán)境中檢出頻率較高。污水處理廠二級出水中檢出濃度可達(dá)到0.5~10 μg·L-1[4-6],部分制藥廢水中濃度則高達(dá)mg·L-1量級[7]。

    環(huán)境中抗生素濃度和種類的不斷增加可能會(huì)改變微生物群落結(jié)構(gòu)和功能。據(jù)研究報(bào)道,河流中抗生素的存在會(huì)改變生物膜的微生物群落結(jié)構(gòu),并隨著抗生素污染程度的加重,生物膜中對應(yīng)的放線菌含量也隨之升高[8]。在硝化生物膜反應(yīng)器中,四環(huán)素的存在導(dǎo)致了部分菌屬如Flavobacterium、Caulobacter 、Zooglea 等含量的降低,但同時(shí)伴隨著Sandarakinorhabdus 等菌種含量的增加[9]。在瀝濾池污水處理系統(tǒng)中,四環(huán)素的存在會(huì)減少其中微生物種類和數(shù)量,優(yōu)勢種群的減少幅度最高可達(dá)15%[10]。污水處理系統(tǒng)作為抗生素進(jìn)入天然水環(huán)境的主要途徑,是水環(huán)境中抗生素的重要貯存地和傳播源,活性污泥法是污水處理的主要工藝,然而迄今為止,抗生素選擇性壓力對活性污泥法中微生物群落結(jié)構(gòu)及功能影響的研究尚少且不夠深入。

    本研究分別以TC和SMX兩種抗生素作為研究對象,探討了環(huán)境濃度(5 μg·L-1和50 μg·L-1)抗生素選擇性壓力下,生物處理過程污水處理效能及活性污泥微生物活性的變化,并利用磷脂脂肪酸(PLFA)及16S rRNA基因高通量測序研究了其對微生物群落結(jié)構(gòu)的影響,為科學(xué)評價(jià)抗生素類污染物在污水生物處理工藝中的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法 (Materials and methods)

    1.1 試劑與材料

    實(shí)驗(yàn)中所用的TC及SMX均購自北京百靈威科技有限公司,純度≥98%。其他常規(guī)化學(xué)試劑均為分析純,購自南京化學(xué)試劑有限公司。

    實(shí)驗(yàn)所用的接種污泥來源于南京江心洲污水處理廠(A/O工藝)的曝氣池,污泥濃度約為4 500 mg·L-1,VSS/SS(揮發(fā)性固體懸浮物與總固體懸浮物之比)約為0.7 ~ 0.8,污泥沉降指數(shù)SVI在80 ~120之間。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 反應(yīng)器的啟動(dòng)與運(yùn)行

    將取自污水處理廠的活性污泥分別接種到6個(gè)相同的序批式活性污泥反應(yīng)器(SBR)中,SBR反應(yīng)器分為進(jìn)水、反應(yīng)、沉淀、出水和閑置5個(gè)基本過程,其操作靈活性好,可以很好地模擬以A/O為主體的市政污水處理工藝。實(shí)驗(yàn)中反應(yīng)器有效體積為4 L,其中R0為無抗生素添加的對照組,R1添加50 μg·L-1TC,R2添加50 μg·L-1SMX,R3添加5 μg·L-1TC,R4添加5 μg·L-1SMX,R5添加5 μg·L-1TC和5 μg·L-1SMX。實(shí)驗(yàn)配制的模擬廢水由C6H12O6、NH4Cl和KH2PO4及微量元素組成,進(jìn)水COD為300 mg·L-1,其中C:N:P為100:5:1(質(zhì)量比)。6個(gè)反應(yīng)器的運(yùn)行參數(shù)保持一致,污泥濃度控制在3 000 mg·L-1,單個(gè)運(yùn)行周期為12 h(包括進(jìn)水0.5 h,曝氣10 h,沉淀1 h,出水0.5 h),污泥停留時(shí)間7 d,進(jìn)水pH為6.8~7.0,溶解氧控制在(3.75±0.30) mg·L-1,溫度維持在(25±5) ℃。

    1.2.2 檢測指標(biāo)與方法

    PLFA為甲基化活性污泥中提取的磷脂后得到的脂肪酸產(chǎn)物,不同微生物能夠通過不同生化反應(yīng)形成不同的磷脂脂肪酸,從而使其具有特異的指示性。PLFA的提取方法根據(jù)Balser等的方法進(jìn)行了適當(dāng)修正[14-15],通過對活性污泥樣品的提取、分離及皂化、甲基化、萃取等一系列前處理,最終將提取出的PLFA采用安捷倫7800A氣相色譜進(jìn)行測定。氣相色譜各參數(shù)由MIDI Sherlock程序設(shè)置調(diào)用[16-17]。

    微生物群落結(jié)構(gòu)(主要為細(xì)菌)采用16S rRNA基因高通量測序(Miseq, Illumina)進(jìn)行檢測。污泥樣品4 000 r·min-1后棄上清液,利用FastDNA?SPIN Kit for Soil (Qbiogene, USA)進(jìn)行DNA的提取,提取后的DNA樣品利用基于細(xì)菌16S rRNA gene V1V2區(qū)通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系為50 μL,包括5 μL的10×Ex Taq Buffer,4 μL的MgCl2(25 μmol·L-1),0.25 μL的Ex Taq DNA聚合酶(5 U·μL-1),1 μL正反引物(20 μmol·L-1),2 μL的DNA模板(20 ng·μL-1),加滅菌水至50 μL。PCR擴(kuò)增條件為:初始變性98 ℃、5 min;98 ℃變性30 s,退火50 ℃、30 s,72 ℃延伸40 s,20個(gè)循環(huán);最后72 ℃延伸10 min。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物后,采用純化試劑盒(Cycle-Pure Kit, OMEGA Bio-tek, Inc.) 純化后送至江蘇中宜金大分析檢測有限公司進(jìn)行Miseq測序。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

    PLFA和16S rRNA基因高通量測序解析微生物群落結(jié)構(gòu)均選取了R0為代表作為生物平行樣品,測定結(jié)果平行性良好,證明以上2種方法具有可行性。

    常規(guī)水質(zhì)指標(biāo)的數(shù)據(jù)處理采用Origin 9.0軟件,微生物活菌比結(jié)果采用ImageJ軟件進(jìn)行分析,Miseq數(shù)據(jù)經(jīng)Sickle及Mothur降噪后,通過RDP分類處理。單因素方差分析AVONA用于檢驗(yàn)不同樣品對于各項(xiàng)微生物活性指標(biāo)是否具有顯著性差異,當(dāng)P< 0.05時(shí),認(rèn)為具有顯著性差異,使用的分析軟件為SPSS statistics 22.0.0。

    香農(nóng)-威爾(Shannon-Wiener)多樣性指數(shù)通常被定義為:

    式中,H 為Shannon-Wiener指數(shù),s 是每個(gè)樣品中磷脂脂肪酸的總數(shù),pi為各磷脂脂肪酸占總峰面積的的百分比。氣相色譜分析的峰面積用來計(jì)算為每個(gè)磷脂脂肪酸的pi值[17]。

    2 結(jié)果(Results)

    2.1 抗生素選擇性壓力對廢水處理效能及微生物活性的影響

    不同抗生素選擇性壓力下SBR反應(yīng)器在整個(gè)運(yùn)行階段的COD去除率如圖1所示。由圖可見反應(yīng)器在30 d左右達(dá)到穩(wěn)定運(yùn)行態(tài),在相應(yīng)的操作條件下,COD的去除率均高于90%,不同反應(yīng)器穩(wěn)定后的COD平均去除率為R0(93.2%),R1(91.87%),R2(90.26%),R3(92.64%),R4(91.68%),R5(91.41%)。2種濃度的TC和SMX持續(xù)添加條件下, 6個(gè)反應(yīng)器COD去除率無顯著性差異(P> 0.05),相比之下,添加了TC的實(shí)驗(yàn)組(R1,R3)對COD去除效果略好于SMX組(R2,R4)。

    圖2給出了6個(gè)SBR反應(yīng)器在運(yùn)行階段NH4+-N的去除效果,由于硝化菌的世代周期較長,因此前30 d中NH4+-N的去除效果不穩(wěn)定,超過30 d后,各反應(yīng)器的脫氮過程逐漸進(jìn)入穩(wěn)態(tài),平均NH4+-N去除率分別為R0(78.57%),R1(74.93%),R2(73.94%),R3(76.98%),R4(75.36%),R5(76.11%)。同COD的去除效果類似,6個(gè)反應(yīng)器之間NH4+-N的去除效果也無顯著性差異(P> 0.05)。

    各反應(yīng)器進(jìn)出水抗生素濃度測定結(jié)果如表1所示。TC和SMX在SBR反應(yīng)器中去除率維持在25%~30%間,這與反應(yīng)器各操作運(yùn)行參數(shù)(污泥齡、水力停留時(shí)間)等因素有關(guān)。

    采用LIVE/DEAD熒光染色法作為微生物活菌水平的檢測方法,可以從微生物細(xì)胞膜完整性的角度評價(jià)污泥系統(tǒng)中微生物的活菌水平,具有前處理簡單、測定方便、不受細(xì)菌種類影響等諸多優(yōu)點(diǎn)。微生物活菌比可以用來判定活性污泥在受到抗生素選擇性壓力下細(xì)胞膜的損傷程度(表2)。反應(yīng)器進(jìn)入穩(wěn)定階段后,暴露于抗生素選擇性壓力下的活性污泥活菌比相比于空白組有所上升,最高為添加了50 μg·L-1SMX的實(shí)驗(yàn)組R2,其活菌比例占65.67%,但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組間并無顯著性差異(P> 0.05)。

    在微生物代謝過程中,三磷酸腺苷(ATP)對提供生命活動(dòng)所需的能量有著極為重要的作用。活性污泥體系中可以用ATP含量來直觀反映微生物的代謝水平,分析簡單快速。由表2可知,添加了抗生素的活性污泥微生物ATP含量則顯著下降(P =0.013<0.05),其中添加50 μg·L-1TC的R1實(shí)驗(yàn)組ATP含量降至(4.55±0.028) RLU/mg MLVSS(以單位混合液揮發(fā)性懸浮固體濃度MLVSS計(jì)量),低于添加相同濃度SMX的R2實(shí)驗(yàn)組的(8.37±1.05) RLU/mg MLVSS。這表明抗生素選擇性壓力會(huì)降低微生物的活性,且TC對微生物活性的影響要大于SMX。

    圖2 抗生素選擇性壓力對SBR反應(yīng)器去除的影響removal of SBR reactors

    圖3 第60天各反應(yīng)器PLFA生物標(biāo)記優(yōu)勢菌種

    圖4 不同抗生素選擇性壓力下SBR反應(yīng)器活性污泥微生物群落結(jié)構(gòu)的演變(第60天)

    圖5 不同抗生素選擇性壓力下各反應(yīng)器活性污泥微生物群落結(jié)構(gòu)熱圖(屬水平,相對豐度>0.10%,第60天)

    2.2 PLFA解析微生物群落結(jié)構(gòu)的變化

    反應(yīng)器穩(wěn)定運(yùn)行末期整個(gè)PLFA組成情況如表3所示,PLFA的碳鏈長度主要分布在C12至C20之間。微生物的群落結(jié)構(gòu)即不同類群微生物的相對豐度,可以通過微生物各種群的特征脂肪酸的相對含量表征。PLFA生物標(biāo)記可反映革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌及原生動(dòng)物等的相對含量。一般來說,多種支鏈脂肪酸可以表征革蘭氏陽性菌(如iso-、anteiso-、支鏈脂肪酸),單不飽和脂肪酸和環(huán)丙烷脂肪酸可指示革蘭氏陰性菌,特定的脂肪酸(20:2ω6、20:3ω6、20:4ω6)可表征原生動(dòng)物[17,20]。

    如圖3所示,在6個(gè)反應(yīng)器中,革蘭氏陽性菌的比例均高于革蘭氏陰性菌,隨著抗生素選擇性壓力的施加,革蘭氏陽性菌明顯高于空白對照組,添加50 μg·L-1TC的實(shí)驗(yàn)組R1革蘭氏陽性菌含量最高,為52.17%,其次是添加50 μg·L-1SMX的實(shí)驗(yàn)組R2(45.65%),抗生素濃度為5 μg·L-1的R3(40.35%)和R4(40.61%)中革蘭氏陽性菌含量接近,復(fù)合污染的實(shí)驗(yàn)組R5(36.97%)革蘭氏陽性菌比例僅略高于空白對照組R0(34.9%)。革蘭氏陰性菌數(shù)量變化趨勢與陽性菌相反,抗生素選擇性壓力下革蘭氏陰性菌含量均明顯低于空白對照組。另外,添加了抗生素后原生動(dòng)物的含量也明顯減少,由R0組的3.82%降至R1(0.99%)、R2(0.75%)、R3(0.98%)、R4(1.56%)和R5(2.23%)。為了考察PLFA的豐富度和均勻度,采用Shannon-Wiener多樣性指數(shù)來反應(yīng)微生物種群的多樣性。如表4所示,在低濃度的抗生素選擇性壓力下,穩(wěn)定階段的微生物的群落多樣性指數(shù)相比空白對照組呈現(xiàn)下降趨勢。

    2.3 16S rRNA基因高通量測序解析微生物群落結(jié)構(gòu)的變化

    通過16S rRNA基因高通量測序技術(shù)對活性污泥的微生物群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,如圖4所示,空白對照組的活性污泥主要以變形菌門為主(Proteobacteria , 41.95%),其中Beta 變形菌(Betaproteobacteria, 30.72%)和Gamma 變形菌(Gammaproteobacteria, 8.96%)是優(yōu)勢菌,而Alpah 變形菌(Alphaproteobacteria, 2.27%),Delta 變形菌(Deltaproteobacteria , 1.48%)及Epsilion 變形菌(Epsilonproteobacteria , <0.01%)均占比較少。除變形菌門占主體外,其次是放線菌門(Actinobacteria , 32.01%)和擬桿菌門(Bacteroidetes , 9.22%)。另外,含量低于10%的門類微生物包括TM7(7.86%),厚壁菌門(Firmicutes , 1.13%),酸桿菌門(Acidobacteria, 1.07%),硝化螺菌(Nitrospira , 0.96%)等共計(jì)11個(gè)門。相比之下,暴露于抗生素選擇性壓力的實(shí)驗(yàn)組變形菌門減少明顯,加入50 μg·L-1TC的R1變形菌門減少至33.01%,加入50 μg·L-1SMX的R2影響更為明顯,變形菌門含量驟降至16.53%。暴露于5 μg·L-1TC、5 μg·L-1SMX及兩者同時(shí)存在的條件下,變形菌門占比分別為20.58%、24.64%和23.89%??股剡x擇性壓力下的優(yōu)勢菌是放線菌門,其相對含量分別為R1(45.53%)、R2(51.62%)、R3(57.52%)、R4(47.38%)、R5(55.75%),而空白對照組R0放線菌門僅為32.01%。除放線菌門外,變化比較明顯的是擬桿菌門,空白對照組R0擬桿菌占比9.72%,而加入TC的實(shí)驗(yàn)組R1和R3擬桿菌門比例減少,分別占5.09%和9.56%,加入SMX的實(shí)驗(yàn)組R2和R4擬桿菌有所上升,分別為17.61%和21.54%,兩者各添加5 μg·L-1的R5中擬桿菌占5.49%,與單獨(dú)TC影響的結(jié)果接近。

    表1 各反應(yīng)器進(jìn)出水抗生素濃度Table 1 The influent and effluent TC and SMX concentrations of six reactors

    表2 各反應(yīng)器活性污泥活菌比及三磷酸腺苷(ATP)含量Table 2 Live/dead values and adenosine triphosphate (ATP) concentrations of six SBR reactors

    注:MLVSS為混合液揮發(fā)性懸浮固體濃度。

    Note: MLVSS is mixed liquor volatile suspended solids.

    表3 第60天各反應(yīng)器中活性污泥整體PLFA情況(%)Table 1 The whole PLFA profiles of activated sludge in six reactors at the 60thday (%)

    注:表中數(shù)值代表每個(gè)樣品的每個(gè)組分的峰值面積占總面積的比值;ND表示未檢出。

    Note: The values were the percentage of the peak area of each analyte to the total area of each sample. ND mean not detected.

    表4 各反應(yīng)器香農(nóng)-威爾多樣性指數(shù)(第60天采樣)Table 4 Shannon-Wiener diversity indices of PLFA in each reactor (Sampling at the 60thday)

    如圖5所示,在屬水平上,空白對照組R0的優(yōu)勢微生物(相對豐度>0.10%)包括Micropruina (18.77%,放線菌門)、Zoogloea (12.28%,變形菌門)、TM7 (7.86%,TM7門)、Dechloromonas (6.26%,變形菌門)、Nakamurella (6.25%,放線菌門)、Rudaea (3.55%,變形菌門)、Terrimonas (1.82%,變形菌門)。添加抗生素的實(shí)驗(yàn)組Micropruina 比例均明顯增加(R129.40%,R224.27%,R324.42%,R430.35%,R532.49%),Zoogloea 比例明顯減少(R13.73%,R22.99%,R32.7%,R42.24%,R54.73%),TC和SMX選擇性壓力下該兩種屬變化趨勢較為一致。

    3 討論(Discussion)

    在對出水水質(zhì)影響方面,低濃度的抗生素選擇性壓力下污水處理效能所受影響不大,COD和NH4+-N的去除效果僅略低于空白對照組(圖1),這主要是由于本研究中所選擇的抗生素濃度均較低,相當(dāng)或略高于目前實(shí)際水體中的檢出水平??股氐钠骄コ示S持在25%~30%間,與本研究各項(xiàng)工藝操作參數(shù)(如泥齡、水力停留時(shí)間等)相關(guān)。

    在對微生物活性影響方面,較低的抗生素濃度對微生物的活菌比的影響不具有顯著性差異,說明低濃度的抗生素對微生物的毒性不大,但當(dāng)抗生素的濃度較高、污染較為嚴(yán)重時(shí),死菌的比例會(huì)明顯增高。如Proia等[8]研究發(fā)現(xiàn)在多種抗生素選擇性壓力下,生物膜中死菌比例隨著抗生素污染程度的加劇而明顯上升。在低濃度的抗生素選擇性壓力下,ATP含量顯著下降(表2),ATP含量下降可以表征微生物的活性降低。在微生物代謝過程中,ATP對提供生命活動(dòng)所需的能量有著極為重要的作用?;钚晕勰囿w系中可以用ATP含量來直觀反映微生物的代謝水平,有研究報(bào)道,在低溫等極端條件下,生物膜內(nèi)部ATP含量降低,生物活性降低[18]。尹軍等[19]研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)pH值過大地偏離適宜數(shù)值,或受到S2-、CN-等有毒物質(zhì)影響時(shí),活性污泥微生物細(xì)胞新陳代謝的功能隨之變化,ATP值下降,微生物活性受到不良影響。

    在對微生物群落結(jié)構(gòu)影響方面,PLFA鑒定技術(shù)目前已被廣泛應(yīng)用與土壤、水體沉積物、地下水等環(huán)境微生物群落結(jié)構(gòu)的研究中[17]。在低濃度的抗生素選擇性壓力下,通過PLFA生物標(biāo)記法可以看出微生物的群落結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化,Shannon-Wiener多樣性指數(shù)的降低代表著微生物多樣性的減少。牛川等[21]通過PLFA分析低溫下活性污泥微生物性能時(shí)發(fā)現(xiàn),在低溫條件下,微生物物種豐富度和多樣性降低。

    利用16S rRNA基因高通量測序技術(shù)對微生物的種群結(jié)構(gòu)及功能進(jìn)行分析,可以更深入地了解微生物群落結(jié)構(gòu)的變化[22]。在低濃度抗生素選擇性壓力下,作為活性污泥微生物優(yōu)勢菌的變形菌門數(shù)量明顯減少,可能是其受抗生素沖擊的影響較大[23]。放線菌明顯增多,在并未發(fā)生絲狀菌膨脹的情況下出現(xiàn)這樣明顯變化,可能是微生物自身在面對抗生素的沖擊下分泌更多的胞外聚合物以形成一層保護(hù)屏障,作為革蘭氏陽性菌,放線菌的增加也驗(yàn)證了PLFA結(jié)果中革蘭氏陽性菌比例增加。在屬級別上,檢出比例最高的Micropruina 屬于放線菌門,有文獻(xiàn)報(bào)道其具有一定的耐毒性[24-25],在抗生素選擇性壓力下,該屬比例的增加可以證明其具有抵御部分抗生素沖擊負(fù)荷的作用。同時(shí),指示Micropruina 的主要脂肪酸為C14:0 iso、C15:0 anteiso、C16:0、C16:0 iso[26],這4種脂肪酸在PLFA的結(jié)果中均占主要成分,并通過兩種表征微生物群落結(jié)構(gòu)的手段得到了很好的印證。另外,如圖5所示,Zoogloea 也是重要的微生物之一,屬于Beta 變形菌,該菌是菌膠團(tuán)的主要組成成分[27],在添加了抗生素后其含量下降,說明抗生素選擇性壓力對于活性污泥微生物菌膠團(tuán)的形成有顯著的影響,這也可以解釋在抗生素存在下ATP含量降低,微生物活性降低的原因。另外,Thiobacter 屬于Gamma 變形菌門,有研究報(bào)道該菌屬的存在有利于降解磺胺類有機(jī)物[28-29],本研究中僅在添加了SMX的反應(yīng)器中檢測到該菌屬,推測其可能會(huì)對SMX的降解起到重要作用。

    綜上表明:在環(huán)境濃度(5 μg·L-1和50 μg·L-1)TC和SMX兩種抗生素選擇性壓力下,SBR反應(yīng)器中的出水水質(zhì)(COD和NH4+-N)受到的影響不明顯;ATP測定結(jié)果表明活性污泥微生物活性降低;PLFA和16S rRNA基因高通量測序結(jié)果表明微生物種群結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯變化,革蘭氏陽性菌比例上升,其中主要是放線菌含量增加,革蘭氏陰性菌比例下降,原生動(dòng)物數(shù)量減少,生物多樣性減少。然而,本研究主要針對60 d抗生素選擇性壓力下活性污泥微生物群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析,長期作用下對污水處理效能的影響及抗生素選擇性壓力對活性污泥體系中抗生素抗性基因傳播的影響還需要進(jìn)一步研究。

    [1] Baquero F, Martinez J L, Canton R. Antibiotics and antibiotic resistance in water environments [J]. Current Opinion in Biotechnology, 2008, 19(3): 260-265

    [2] Kümmerer K. Antibiotics in the aquatic environment—A review—Part I [J]. Chemosphere, 2009, 75(4): 417-434

    [3] 羅義, 周啟星. 抗生素抗性基因(ARGs)——一種新型環(huán)境污染物[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2008, 28(8): 1499-1505

    Luo Y, Zhou Q X. Antibiotic resistance genes (ARGs) as emerging pollutants [J]. Acta Scientiae Circumstantiae, 2008, 28(8): 1499-1505 (in Chinese)

    [4] Gu C, Karthikeyan K G. Interaction of tetracycline with aluminum and iron hydrous oxides [J]. Environmental Science & Technology, 2005, 39(8): 2660-2667

    [5] Batt A L, Kim S, Aga D S. Comparison of the occurrence of antibiotics in four full-scale wastewater treatment plants with varying designs and operations [J]. Chemo sphere, 2007, 68(3): 428-435

    [6] Gros M, Rodríguez-Mozaz S, Barceló D. Fast and comprehensive multi-residue analysis of a broad range of human and veterinary pharmaceuticals and some of their metabolites in surface and treated waters by ultra-high-performance liquid chromatography coupled to quadrupole-linear ion trap tandem mass spectrometry [J]. Journal of Chromatography A, 2012, 1248(27): 104-121

    [7] Deng Y, Zhang Y, Gao Y, et al. Microbial community compositional analysis for series reactors treating high level antibiotic wastewater [J]. Environmental Science & Technology, 2011, 46(2): 795-801

    [8] Proia L, Lupini G, Osorio V, et al. Response of biofilm bacterial communities to antibiotic pollutants in a Mediterranean River [J]. Chemosphere, 2013, 92(9): 1126-1135

    [9] Matos M, Pereira M A, Parpot P, et al. Influence of tetracycline on the microbial community composition and activity of nitrifying biofilms [J]. Chemosphere, 2014, 117: 295-302

    [10] Atoyan J A, Staroscik A M, Nelson D R, et al. Microbial community structure of a leach field soil: Response to intermittent aeration and tetracycline addition [J]. Water, 2013, 5(2): 505-524

    [11] 國家環(huán)境保護(hù)局. 水和廢水監(jiān)測分析方法(第4版)[S]. 北京: 中國環(huán)境科學(xué)出版社, 2002

    [12] Sule P, Wadhawan T, Wolfe A, et al. Use of the Bac Titer-Glo microbial cell viability assay to study bacterial attachment in biofilm formation [J]. Promega Notes, 2008, 99: 19-21

    [13] Kim S, Eichhorn P, Jensen J N, et al. Removal of antibiotics in wastewater: Effect of hydraulic and solid retention times on the fate of tetracycline in the activated sludge process [J]. Environmental Science & Technology, 2005, 39(15): 5816-5823

    [14] Smithwick E A H, Turner M G, Metzger K L, et al. Variation in NH4+mineralization and microbial communities with stand age in lodgepole pine (Pinus contorta ) forests, Yellowstone National Park (USA) [J]. Soil Biology and Biochemistry, 2005, 37(8): 1546-1559

    [15] Kao-Kniffin J, Balser T C. Elevated CO2differentially alters belowground plant and soil microbial community structure in reed canary grass-invaded experimental wetlands [J]. Soil Biology and Biochemistry, 2007, 39(2): 517-525[16] Dong X, Huai-Ying Y, De-Yong G, et al. Soil microbial community structure in diverse land use systems: A comparative study using Biolog, DGGE, and PLFA analyses [J]. Pedosphere, 2008, 18(5): 653-663

    [17] Niu C, Geng J, Ren H, et al. The strengthening effect of a static magnetic field on activated sludge activity at low temperature [J]. Bioresource Technology, 2013, 150: 156-162[18] 吳成強(qiáng), 楊敏, 張昱. 低溫生物膜和活性污泥的生物活性比較[J]. 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào), 2005, 10(5): 647-650

    Wu C Q, Yang M, Zhang Y. Comparison of microbial activities in bio-film reactor and in activated sludge reactor at low temperature [J].Chinese Journal of Applied & Environmental Biology, 2005, 10(5): 647-650 (in Chinese)

    [19] 尹軍, 桑磊, 李琳. ATP 檢測在活性污泥工藝中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 吉林建筑工程學(xué)院學(xué)報(bào), 2007, 3(24): 7-11

    Yin J, Sang L, Li L. Status of application and study of ATP measurement in activated sludge process [J]. Journal of Jilin Architectural and Civil Engineering Institute, 2007, 3(24): 7-11 (in Chinese)

    [20] 陳振翔, 于鑫, 夏明芳, 等. 磷脂脂肪酸分析方法在微生物生態(tài)學(xué)中的應(yīng)用[J]. 生態(tài)學(xué)雜志, 2005, 24(7): 828-832

    Chen Z X, Yu X, Xia M F, et al.Application of phospholipid fatty acid (PLFA) analysis in microbial ecology [J]. Chinese Journal of Ecology, 2005, 24(7): 828-832 (in Chinese)[21] Niu C, Geng J, Ren H, et al. The cold adaptability of microorganisms with different carbon source in activated sludge treating synthetical wastewater [J]. Bioresource Technology, 2012, 123: 66-71

    [22] Yu K, Zhang T. Metagenomic and metatranscriptomic analysis of microbial community structure and gene expression of activated sludge [J]. Plos One, 2012, 7(5): e38183[23] Xia S, Jia R, Feng F, et al. Effect of solids retention time on antibiotics removal performance and microbial communities in an A/O-MBR process [J]. Bioresource Technology, 2012, 106: 36-43

    [24] Begum S A, Batista J R. Microbial selection on enhanced biological phosphorus removal systems fed exclusively with glucose [J]. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 2012, 28(5): 2181-2193

    [25] Wang Z, Gao M, She Z, et al. Effects of hexavalent chromium on performance and microbial community of an aerobic granular sequencing batch reactor [J]. Environmental Science and Pollution Research, 2015, 22(6): 4575-4586[26] Shintani T, Liu W T, Hanada S, et al. Micropruina glycogenica gen. nov., sp. nov., a new Gram-positive glycogen-accumulating bacterium isolated from activated sludge [J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2000, 50(1): 201-207

    [27] Farkas M, Táncsics A, Kriszt B, et al. Zoogloea oleivorans sp. nov., a floc-forming, petroleum hydrocarbon-degrading bacterium isolated from biofilm [J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2015, 65(Pt 1): 274-279

    [28] Collado N, Buttiglieri G, Marti E, et al. Effects on activated sludge bacterial community exposed to sulfamethoxazole [J]. Chemosphere, 2013, 93(1): 99-106

    Environmental Concentration Antibiotic Selection Pressure Changed Microbial Community Composition of Activated Sludge

    Zhang Yingying, Geng Jinju*, Ren Hongqiang, Xu Ke, Ding Lili

    School of the Environment, Nanjing University, State Key Laboratory of Pollution Control and Resource Reuse, Nanjing 210023, China

    Received 24 May 2015 accepted 10 July 2015

    tetracycline; sulfamethoxazole; activated sludge; microbial community composition; wastewater treatment efficiency

    國家自然科學(xué)基金(No.51278241)

    張瀅楹(1990-),女,碩士研究生,研究方向?yàn)槲鬯疃忍幚恚珽-mail: zyyorwheat@163.com;

    *通訊作者(Corresponding author), E-mail: jjgeng@nju.edu.cn

    10.7524/AJE.1673-5897.20150524001

    2015-05-24錄用日期:2015-07-10

    1673-5897(2015)5-066-09

    X171.5

    A

    耿金菊(1978—),女,環(huán)境科學(xué)博士,副教授,主要研究方向水處理與水環(huán)境修復(fù),廢水深度處理及生物處理,污染物的環(huán)境行為及生態(tài)效應(yīng)。

    張瀅楹, 耿金菊, 任洪強(qiáng), 等. 環(huán)境濃度抗生素選擇性壓力改變活性污泥微生物群落結(jié)構(gòu)[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào),2015, 10(5): 66-74

    Zhang Y Y, Geng J J, Ren H Q, et al. Environmental concentration antibiotic selection pressure changed microbial community composition of activated sludge [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2015, 10(5): 66-74 (in Chinese)

    猜你喜歡
    革蘭氏活性污泥菌門
    女性下生殖道分泌物檢測中革蘭氏染色法的應(yīng)用分析
    五代頭孢有何區(qū)別
    野生樹鼩與人工飼養(yǎng)樹鼩消化道不同部位微生物組成的比較研究
    饑餓與重?cái)z食對河蟹腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響
    昆蟲體內(nèi)微生物多樣性的影響因素研究進(jìn)展
    妊娠期糖尿病腸道菌群變化及臨床價(jià)值分析
    活性污泥系統(tǒng)ASM2d模型的自適應(yīng)模糊PID控制
    活性污泥系統(tǒng)ASM2d模型的自適應(yīng)模糊PID控制
    污水活性污泥處理過程的溶解氧增益調(diào)度控制
    草莓微生物污染分析及革蘭氏陰性細(xì)菌和霉菌鑒定
    中文字幕高清在线视频| 青春草视频在线免费观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 大话2 男鬼变身卡| 制服丝袜香蕉在线| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲国产av影院在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 精品国产国语对白av| 国产精品99久久99久久久不卡 | 在线观看一区二区三区激情| 熟女av电影| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 午夜日本视频在线| 成人国产麻豆网| 国产亚洲最大av| 亚洲国产最新在线播放| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 青春草视频在线免费观看| 黄色一级大片看看| 麻豆av在线久日| 又大又黄又爽视频免费| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产免费视频播放在线视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲av综合色区一区| 搡老岳熟女国产| 国产一区二区三区综合在线观看| 免费观看av网站的网址| av福利片在线| 激情五月婷婷亚洲| 在线观看免费高清a一片| 美国免费a级毛片| 亚洲精品国产av蜜桃| 精品人妻在线不人妻| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 国产97色在线日韩免费| 综合色丁香网| 久久精品国产综合久久久| 免费日韩欧美在线观看| 国产成人欧美| 免费黄网站久久成人精品| 精品人妻一区二区三区麻豆| 男女无遮挡免费网站观看| 深夜精品福利| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲美女视频黄频| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产精品久久久av美女十八| 成人免费观看视频高清| 91aial.com中文字幕在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲av成人精品一二三区| 9色porny在线观看| 老司机亚洲免费影院| 丝袜在线中文字幕| 人妻一区二区av| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美日韩综合久久久久久| 天天操日日干夜夜撸| 人成视频在线观看免费观看| 99香蕉大伊视频| 一级毛片电影观看| 中国国产av一级| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美 日韩 精品 国产| 国产xxxxx性猛交| 久久精品人人爽人人爽视色| 最黄视频免费看| 亚洲欧洲日产国产| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲在久久综合| 天天操日日干夜夜撸| 各种免费的搞黄视频| 久久精品国产综合久久久| 午夜精品国产一区二区电影| 日韩一区二区视频免费看| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品 国内视频| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 亚洲美女视频黄频| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲国产最新在线播放| 飞空精品影院首页| 秋霞伦理黄片| 国产男女超爽视频在线观看| 观看av在线不卡| 久久久国产一区二区| 国产免费视频播放在线视频| 国产乱来视频区| 精品亚洲成国产av| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美黑人欧美精品刺激| 高清黄色对白视频在线免费看| 人人妻人人澡人人看| 久久ye,这里只有精品| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲成人免费av在线播放| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲欧美精品自产自拍| 婷婷色综合大香蕉| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 少妇人妻精品综合一区二区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产毛片在线视频| 国产成人精品久久二区二区91 | 超碰成人久久| 飞空精品影院首页| 国产精品国产av在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 日本午夜av视频| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲精品第二区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产熟女欧美一区二区| 99精品久久久久人妻精品| 久久久久人妻精品一区果冻| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲伊人色综图| 亚洲在久久综合| 日韩一本色道免费dvd| 日本vs欧美在线观看视频| 看免费av毛片| 亚洲三区欧美一区| 美女中出高潮动态图| 国产av码专区亚洲av| bbb黄色大片| 国产成人av激情在线播放| 老司机在亚洲福利影院| 国产精品久久久av美女十八| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产成人欧美在线观看 | 色综合欧美亚洲国产小说| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 18禁观看日本| 岛国毛片在线播放| 一区在线观看完整版| 久久久久久久精品精品| 另类精品久久| 免费在线观看完整版高清| av在线观看视频网站免费| 免费av中文字幕在线| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 极品人妻少妇av视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 婷婷色av中文字幕| 尾随美女入室| 亚洲一区二区三区欧美精品| 色吧在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 99热全是精品| 美女午夜性视频免费| 午夜福利在线免费观看网站| 91国产中文字幕| 精品久久久久久电影网| 国产精品女同一区二区软件| 黑人猛操日本美女一级片| 国产男人的电影天堂91| 卡戴珊不雅视频在线播放| 丰满饥渴人妻一区二区三| 人妻 亚洲 视频| 大话2 男鬼变身卡| 一区二区av电影网| 在线观看免费高清a一片| 国产爽快片一区二区三区| 久久久欧美国产精品| 一级片免费观看大全| 亚洲天堂av无毛| 两个人看的免费小视频| 国产亚洲av高清不卡| 午夜免费观看性视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 中文字幕人妻熟女乱码| 我的亚洲天堂| 国产成人欧美| avwww免费| 大陆偷拍与自拍| 91aial.com中文字幕在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 水蜜桃什么品种好| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产一区二区三区av在线| 最新在线观看一区二区三区 | h视频一区二区三区| 国产av码专区亚洲av| 香蕉国产在线看| 人人妻人人澡人人看| 天美传媒精品一区二区| netflix在线观看网站| 婷婷成人精品国产| 午夜免费观看性视频| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲av中文av极速乱| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 少妇 在线观看| 两个人免费观看高清视频| 满18在线观看网站| 女人精品久久久久毛片| 欧美乱码精品一区二区三区| 丝袜在线中文字幕| 亚洲视频免费观看视频| 伊人亚洲综合成人网| 一本色道久久久久久精品综合| 午夜免费鲁丝| 麻豆乱淫一区二区| 精品视频人人做人人爽| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产成人免费观看mmmm| av电影中文网址| 国产乱人偷精品视频| 免费观看人在逋| 精品久久蜜臀av无| 国产精品熟女久久久久浪| 国产淫语在线视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产激情久久老熟女| 亚洲一区中文字幕在线| 两个人免费观看高清视频| 久久久亚洲精品成人影院| 欧美中文综合在线视频| av电影中文网址| 波多野结衣av一区二区av| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 咕卡用的链子| 新久久久久国产一级毛片| 欧美激情高清一区二区三区 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美日本中文国产一区发布| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 婷婷色综合www| 赤兔流量卡办理| 国产熟女午夜一区二区三区| 黄色毛片三级朝国网站| 飞空精品影院首页| 黄色视频不卡| 男人操女人黄网站| 午夜福利视频精品| 免费黄网站久久成人精品| 久久久久久久久久久免费av| 一区在线观看完整版| 啦啦啦在线免费观看视频4| 午夜精品国产一区二区电影| 午夜福利免费观看在线| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 一区在线观看完整版| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲国产欧美网| 丝瓜视频免费看黄片| 90打野战视频偷拍视频| 少妇的丰满在线观看| 一本大道久久a久久精品| 久久精品国产a三级三级三级| 九草在线视频观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 丝袜在线中文字幕| 看免费成人av毛片| 婷婷色综合大香蕉| 99久久99久久久精品蜜桃| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲成色77777| 成人国产麻豆网| 精品卡一卡二卡四卡免费| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 精品久久蜜臀av无| 一二三四在线观看免费中文在| 久久天堂一区二区三区四区| 91国产中文字幕| 两个人看的免费小视频| 婷婷成人精品国产| 亚洲中文av在线| 国产成人免费观看mmmm| 一二三四在线观看免费中文在| 国产欧美亚洲国产| 中国三级夫妇交换| 在现免费观看毛片| 国产又爽黄色视频| 中文天堂在线官网| 亚洲国产精品一区三区| 如何舔出高潮| 大陆偷拍与自拍| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 下体分泌物呈黄色| 久久天堂一区二区三区四区| 91aial.com中文字幕在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 韩国精品一区二区三区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩av免费高清视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 九草在线视频观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 中文字幕精品免费在线观看视频| 考比视频在线观看| 日本午夜av视频| 咕卡用的链子| 人妻 亚洲 视频| 欧美日韩视频精品一区| 91精品伊人久久大香线蕉| av在线老鸭窝| 一级,二级,三级黄色视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 成年av动漫网址| 国产成人精品久久久久久| 精品第一国产精品| 久久久久久人妻| 制服丝袜香蕉在线| 久久久久人妻精品一区果冻| 成年av动漫网址| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产一区二区 视频在线| av线在线观看网站| 人成视频在线观看免费观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 18禁观看日本| 国产成人精品久久久久久| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久久久国产一级毛片高清牌| 97精品久久久久久久久久精品| 大香蕉久久网| 狂野欧美激情性xxxx| 韩国av在线不卡| 精品酒店卫生间| 亚洲国产欧美在线一区| 99热全是精品| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久久久国产一级毛片高清牌| 在线免费观看不下载黄p国产| 老司机影院毛片| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 热re99久久精品国产66热6| 欧美日韩综合久久久久久| 777米奇影视久久| 欧美精品亚洲一区二区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 男人操女人黄网站| av电影中文网址| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产极品天堂在线| 中国国产av一级| 伊人久久国产一区二区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 最黄视频免费看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲视频免费观看视频| 99热网站在线观看| 国产精品一二三区在线看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲综合精品二区| 不卡视频在线观看欧美| 国产精品 欧美亚洲| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产xxxxx性猛交| 亚洲熟女精品中文字幕| 日本欧美国产在线视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 日韩中文字幕欧美一区二区 | 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲国产欧美网| 男女床上黄色一级片免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲欧美清纯卡通| 看免费成人av毛片| 国产精品三级大全| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 午夜福利在线免费观看网站| 欧美中文综合在线视频| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 咕卡用的链子| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 成人漫画全彩无遮挡| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 免费高清在线观看视频在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 老司机影院毛片| 9色porny在线观看| 国产精品国产av在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 国产午夜精品一二区理论片| 久久这里只有精品19| 欧美日韩精品网址| 国产av码专区亚洲av| 天堂8中文在线网| 美女午夜性视频免费| 亚洲欧洲国产日韩| 久热爱精品视频在线9| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 视频在线观看一区二区三区| 久久精品国产综合久久久| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲av男天堂| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 国产成人一区二区在线| 操美女的视频在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产精品国产av在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 一级a爱视频在线免费观看| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久久久精品精品| 日韩电影二区| 少妇人妻 视频| 国产精品久久久久久久久免| 日韩大码丰满熟妇| 欧美精品亚洲一区二区| 久久99一区二区三区| 国产成人精品福利久久| 大码成人一级视频| videos熟女内射| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产黄频视频在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日本欧美国产在线视频| 免费观看av网站的网址| 人妻人人澡人人爽人人| 久久女婷五月综合色啪小说| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲在久久综合| av天堂久久9| 午夜免费男女啪啪视频观看| 大片电影免费在线观看免费| 中文字幕亚洲精品专区| 久久99一区二区三区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产精品欧美亚洲77777| 免费黄频网站在线观看国产| 中国三级夫妇交换| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产一区亚洲一区在线观看| 91成人精品电影| 日韩伦理黄色片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 午夜av观看不卡| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美成人午夜精品| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美精品亚洲一区二区| 美女大奶头黄色视频| 永久免费av网站大全| 精品久久久久久电影网| 欧美亚洲日本最大视频资源| 男女之事视频高清在线观看 | 国产国语露脸激情在线看| 久久精品久久久久久久性| 亚洲av国产av综合av卡| a 毛片基地| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 色播在线永久视频| 捣出白浆h1v1| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久毛片免费看一区二区三区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲成人免费av在线播放| 免费在线观看黄色视频的| 99热全是精品| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲中文av在线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲视频免费观看视频| 日韩大片免费观看网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产乱来视频区| 最新的欧美精品一区二区| 免费黄色在线免费观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 在现免费观看毛片| 黄频高清免费视频| 美国免费a级毛片| 欧美日韩综合久久久久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 波野结衣二区三区在线| 中文字幕av电影在线播放| 国产在线视频一区二区| 久久青草综合色| 欧美日本中文国产一区发布| 高清不卡的av网站| 女人久久www免费人成看片| 嫩草影院入口| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 最近手机中文字幕大全| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 人妻人人澡人人爽人人| 香蕉丝袜av| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲第一区二区三区不卡| 2021少妇久久久久久久久久久| 制服丝袜香蕉在线| 国产精品99久久99久久久不卡 | 欧美日韩精品网址| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久热爱精品视频在线9| 亚洲精品视频女| 国产精品国产三级国产专区5o| 十八禁人妻一区二区| 国产日韩欧美视频二区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 热99国产精品久久久久久7| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产成人精品福利久久| av国产精品久久久久影院| 午夜福利,免费看| 9色porny在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 1024香蕉在线观看| 搡老乐熟女国产| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久午夜综合久久蜜桃| 日韩一区二区视频免费看| 777米奇影视久久| 国产日韩欧美在线精品| 国产97色在线日韩免费| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 免费在线观看黄色视频的| 老司机靠b影院| 免费高清在线观看视频在线观看| 热re99久久国产66热| 亚洲精品一二三| 欧美国产精品一级二级三级| 十八禁高潮呻吟视频| 国产 一区精品| 悠悠久久av| 日韩不卡一区二区三区视频在线| www.自偷自拍.com| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产精品免费大片| 两个人免费观看高清视频| 男女国产视频网站| 亚洲人成网站在线观看播放| 成人影院久久| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 丰满迷人的少妇在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产一区二区 视频在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 51午夜福利影视在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲伊人色综图| 少妇的丰满在线观看| 丁香六月天网| 在线精品无人区一区二区三| 观看美女的网站| 久久女婷五月综合色啪小说| 美女国产高潮福利片在线看| 街头女战士在线观看网站| 欧美 日韩 精品 国产| 日日撸夜夜添| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精品99久久99久久久不卡 | 午夜福利影视在线免费观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产老妇伦熟女老妇高清| 大香蕉久久成人网| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 91精品伊人久久大香线蕉| 久久国产精品大桥未久av| 在现免费观看毛片| 欧美日韩成人在线一区二区| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲精品,欧美精品| 777米奇影视久久| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久久精品94久久精品| 人妻一区二区av| 一二三四中文在线观看免费高清| 看十八女毛片水多多多| 国产精品久久久久成人av| 视频在线观看一区二区三区| 三上悠亚av全集在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 久久鲁丝午夜福利片| 日韩免费高清中文字幕av| 婷婷色麻豆天堂久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 日韩不卡一区二区三区视频在线| 丝袜喷水一区|