安徽白山羊超數(shù)排卵技術(shù)

摘要：為了探索安徽白山羊超數(shù)排卵方法，比較不同超數(shù)排卵（簡(jiǎn)稱超排）方案和促卵泡素（FSH）給藥方案對(duì)安徽白山羊超數(shù)排卵效果的影響。結(jié)果表明：以8次遞減法注射FSH超排安徽白山羊，在撤栓時(shí)注射PG，平均回收卵（12.36±667）枚/只；而在撤栓時(shí)、撤栓后12 h注射PMSG，分別平均回收卵（14.83±5.88）、（16.13±6.24）枚/只，可見(jiàn)撤栓后12 h注射PMSG的超排效果優(yōu)于撤栓時(shí)注射PG（P<0.05）；用200 IU FSH分別按8次遞減注射、8次等量注射、6次遞減注射法使安徽白山羊超排，平均回收卵數(shù)分別為（22.3±10.74）、（24.0±4.16）、（16.0±2.65）枚/只，且各組間差異不顯著；用Day0方案、傳統(tǒng)方案超排，平均排卵數(shù)分別為（16.50±0.96）、（13.33±3.32）枚/只，胚胎回收數(shù)分別為（13.83±2.54）、（12.00±2.89）枚/只，2組間差異不顯著。

關(guān)鍵詞：安徽白山羊；超數(shù)排卵；胚胎；促卵泡素；撤栓

中圖分類號(hào)：S814.6；S826.8+93 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）02-0214-02

收稿日期：2014-03-14

基金項(xiàng)目：安徽省自主創(chuàng)新專項(xiàng)（編號(hào)：12z010244）。

作者簡(jiǎn)介：詹年（1988—），男，安徽明光人，碩士研究生，主要從事哺乳動(dòng)物胚胎工程研究。E-mail：zhanian@126.com。

通信作者：劉亞，博士，副教授，主要從事動(dòng)物繁殖生物技術(shù)研究。Tel：（0551）65785492；E-mail：liuya@ahau.edu.cn。安徽白山羊是優(yōu)良的地方品種，具有耐粗飼、適應(yīng)性強(qiáng)、繁殖率高、肉和板皮質(zhì)量好的優(yōu)點(diǎn)[1]，但也存在體型較小、生長(zhǎng)發(fā)育速度較慢等缺點(diǎn)[2]。轉(zhuǎn)基因技術(shù)可在較短時(shí)間內(nèi)培育出常規(guī)方法不能或需要較長(zhǎng)時(shí)期才能育成的品種或種群[3]，原核期胚胎顯微注射及體細(xì)胞核移植是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的重要手段，而這2種技術(shù)都需要獲得足夠數(shù)量的待轉(zhuǎn)動(dòng)物的卵/胚。因此，研究安徽白山羊超數(shù)排卵（簡(jiǎn)稱超排）方法是對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)基因育種的必要前提。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物從合肥博大牧業(yè)科技開(kāi)發(fā)有限公司種羊場(chǎng)及碭山田豐牧業(yè)科技有限公司選取體況良好、無(wú)繁殖疾病史的健康經(jīng)產(chǎn)育齡安徽白山羊。在試驗(yàn)前2～3個(gè)月單獨(dú)分群飼養(yǎng)，并對(duì)所有供體肌肉注射0.2 mg氯前列烯醇（PG）以確保其處于未孕狀態(tài)。

1.1.2主要藥品注射用垂體促卵泡素（FSH），羊超數(shù)排卵專用，購(gòu)自浙江省寧波市三生藥業(yè)有限公司；注射用血促性素（HCG），購(gòu)自寧波第二激素廠；注射用垂體促黃體素（LH）和注射用促性腺激素釋放激素（GnRH），均購(gòu)自寧波三生藥業(yè)有限公司；氯前列烯醇，購(gòu)自遼寧省丹東市綠丹和華動(dòng)物藥業(yè)有限公司；鹽酸賽拉嗪注射液和鹽酸苯唑注射液，均購(gòu)自吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司；羊炔諾酮陰道緩釋裝置（孕酮陰道栓），購(gòu)自西北農(nóng)林科技大學(xué)。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.13種傳統(tǒng)超排方案效果的比較將51只供體山羊隨機(jī)分成3組：第1組22只，第2組6只，第3組23只。分別采用以下3種不同的方案進(jìn)行超排處理，比較其超排效果。

超排方案1：于周期的任意早晨放置孕酮陰道栓（記為0 d），從開(kāi)始后10 d的早晨開(kāi)始遞減法肌肉注射FSH，2次/d，間隔12 h，連用4 d，劑量分別為32、30、28、26、24、22、20、18 IU/只；在注射FSH的最后1 d（開(kāi)始后13 d）上午撤栓，同時(shí)肌肉注射0.3 mg/只 PG；開(kāi)始后14 d晚上肌肉注射 100 IU/只 LH；母羊發(fā)情12 h后配種，間隔12 h復(fù)配1～2次。配種結(jié)束后3 d從輸卵管回收胚胎。

超排方案2：在撤栓時(shí)注射250 IU/只 孕馬血清促性腺激素（PMSG），其余同“超排方案1”。

超排方案3：與“超排方案2”相似，但PMSG的注射時(shí)間改在撤栓后12 h。

1.2.2不同F(xiàn)SH給藥方案超排效果的比較將18只供體母羊隨機(jī)分成3組，每組6只，分別采用如下3種不同的FSH注射方案進(jìn)行超排，比較其超排效果。

FSH給藥方案1：與“1.2.1”節(jié)超排試驗(yàn)設(shè)計(jì)1中的方案3完全相同。

FSH給藥方案2：與“FSH給藥方案1”基本相同，將FSH遞減注射改為等量注射，即注射FSH 25 IU/（只·次），連續(xù)注射8次。

FSH給藥方案3：與“FSH給藥方案1”相似，將FSH遞減注射由8次改為6次，劑量分別為50、50、30、30、20、20 IU/只。

1.2.3Day0超排方案與傳統(tǒng)超排方案效果的比較Day0超排方案。供體山羊在任意日放置孕酮陰道栓（記為-9 d），6 d 后撤栓（-3 d），同時(shí)注射250 IU/只 PMSG和0.2 mg/只 PG進(jìn)行同期發(fā)情處理。撤栓后1 d注射25 μg/只 GnRH，約2 d后母羊排卵（此時(shí)記為0 d）。自0 d早晨開(kāi)始，按遞減法間隔12 h每天早、晚2次注射FSH，連續(xù)3 d，劑量分別為40、38、36、34、32、30 IU/只，第5、第6次注射FSH的同時(shí)注射02 mg/只 PG。周期第3天下午再次注射25 μg/只 GnRH，第11天回收胚胎。

傳統(tǒng)超排方案。與“1.2.1”節(jié)中超排方案3相同。

1.3胚胎回收

在最后一次配種后3 d通過(guò)腹腔鏡檢查卵巢反應(yīng)，并采用手術(shù)法從輸卵管回收胚胎。

1.4統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1不同傳統(tǒng)超排方案超排效果的比較endprint

如表1所示，在撤栓后12 h注射PMSG組的平均回收卵數(shù)最多，達(dá)（16.13±6.24）枚/只，顯著高于撤栓時(shí)注射PG組（P<0.05）；其次為撤栓時(shí)注射PMSG組，平均回收卵（1483±5.88）枚/頭，與其余2組之間的差異均不顯著。

2.2不同F(xiàn)SH給藥方案超排效果的比較

3種FSH給藥方案的平均回收胚胎數(shù)分別為 22.3、24.0、16.0枚/只，說(shuō)明同劑量FSH分4 d進(jìn)行8次注射優(yōu)于分 3 d 進(jìn)行6次注射，但進(jìn)行8次遞減注射與等量注射間超排效果差異不顯著（表2）。

3結(jié)論

3.1不同常規(guī)超排方案對(duì)超排效果的影響

岳奎忠等發(fā)現(xiàn)，在第1次注射FSH時(shí)加注PMSG 200 IU/只可顯著提高供體母羊平均排卵數(shù)及胚胎回收數(shù)[4]。本研究發(fā)現(xiàn)，在撤栓后12 h注射PMSG的平均排卵數(shù)最高（16.13枚/只），顯著高于撤栓時(shí)注射PG組（12.36枚/只）（P<005），而在撤栓時(shí)注射PMSG的平均回收胚胎數(shù)為1483枚/只，與其余2組間差異均不顯著，這可能與試驗(yàn)樣本量較少有關(guān)。但也有研究表明，在撤栓時(shí)注射PMSG減少了排卵數(shù)，并降低了A、B級(jí)胚胎比例[5]，與本試驗(yàn)結(jié)果截然相反。因此，有關(guān)注射PMSG的時(shí)機(jī)及其對(duì)超排效果的影響還有待進(jìn)一步擴(kuò)大試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

3.2不同F(xiàn)SH給藥方案對(duì)山羊超排效果的影響

在應(yīng)用FSH進(jìn)行超數(shù)排卵時(shí)一般都是采用遞減注射法，有分為8次注射（2次/d，間隔12 h，連注4 d）的，也有分為6次的（2次/d，間隔12 h，連注3 d）[6-7]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，同等FSH劑量下，分為8次的遞減注射法及等量注射法平均獲卵數(shù)高于分為6次的遞減注射法（三者排卵數(shù)分別為22.3、24.0、16.0枚/只），但各組間差異并不顯著，這可能是由于樣本數(shù)過(guò)少。

3.3Day0超排方案與傳統(tǒng)超排方案效果的比較

Day0方案是近年來(lái)出現(xiàn)的一種新的超數(shù)排卵方案，即在排卵當(dāng)日進(jìn)行超排處理，使周期的第1波卵泡成熟排卵。此時(shí)無(wú)優(yōu)勢(shì)卵泡存在，也就不存在優(yōu)勢(shì)卵泡對(duì)卵泡募集的抑制作用，從而增加了排卵數(shù)及胚胎回收數(shù)。本試驗(yàn)中Day0方案與傳統(tǒng)方案在黃體數(shù)和胚胎數(shù)上差異并不顯著，驗(yàn)證了Day0方案在安徽白山羊超排上的可行性，進(jìn)一步可測(cè)定安徽白山羊的卵泡波曲線，找到更準(zhǔn)確的第1次卵泡波時(shí)間，改進(jìn)超排方案?？紤]到Day0方案可減少排卵后異常情況（如未排的大卵泡及早期黃體退化等）的發(fā)生[8]，今后可使用此方案。

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