硫酸嗎啡口腔崩解片的穩(wěn)定性研究Δ

胡 蕾，戴 青，劉 芳，劉松青#（.第三軍醫(yī)大學第一附屬醫(yī)院藥學部，重慶 400038；2.重慶市第三人民醫(yī)院藥學部，重慶 40004）

硫酸嗎啡口腔崩解片（Morphine sulfate orally disintegrating tablets，以下簡稱硫酸嗎啡口崩片）具有服用方便、起效時間快、生物利用度高、鎮(zhèn)痛效用強的特點，特別適用于無水條件下的鎮(zhèn)痛治療和吞水即嘔吐的癌癥化療患者的治療，也可有效地被運用于戰(zhàn)傷救治[1-2]。已有研究討論了嗎啡口崩片的制備工藝及處方，本試驗在其基礎上進一步考察所選處方的質量及穩(wěn)定性[3]。參考2010年版《中國藥典》（二部）硫酸嗎啡緩釋片[4]項下要求，以高效液相色譜（HPLC）法測定口崩片中硫酸嗎啡的含量，且通過影響因素試驗、加速試驗及長期試驗評價該制劑的穩(wěn)定性，初步確定該制劑貯藏條件及有效期。

1 材料

1.1 儀器

BP211D型電子天平（德國Sartorius公司）；3531型離心機（美國Abbott公司）；Waters2690液相色譜系統(tǒng)、2487雙波長紫外檢測器（美國Waters 公司）；XMTD-7007 型藥品穩(wěn)定性試驗箱（重慶市永生實驗儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

硫酸嗎啡口崩片（第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院自制，批號：100401、100402、100403，片質量：60 mg，含硫酸嗎啡：每片10 mg）；硫酸嗎啡對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：171238-200907，純度：99.9%）；庚烷磺酸鈉、甲醇均為色譜純，冰醋酸、氫醌均為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定HPLC方法學的建立與考察

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗[4]色譜柱：Diamosil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-庚烷磺酸鈉醋酸溶液（取庚烷磺酸鈉2.02 g，加水適量溶解，加冰醋酸5 ml，加水稀釋至1 000 ml，搖勻，50 ∶50，V/V），流速：0.8 ml/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：233 nm；進樣體積：10 μl。理論板數(shù)按硫酸嗎啡峰計不低于1 000。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取對照品適量（硫酸嗎啡10.0 mg），加氫醌溶液（取氫醌30 mg，加流動相1 000 ml溶解）10 ml溶解成1 000 μg/ml；精密量取4 ml置于50 ml量瓶中，再以氫醌溶液稀釋成80 μg/ml的母液，待用。

2.1.3 供試品溶液的制備 取自制硫酸嗎啡口崩片樣品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（60 mg，相當于硫酸嗎啡10 mg），置于25 ml量瓶中，加氫醌溶液適量，超聲處理使硫酸嗎啡溶解，用氫醌稀釋至刻度，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液1 ml，置于25 ml量瓶中，加氫醌溶液稀釋至刻度，搖勻成16 μg/ml溶液，即得。

2.1.4 方法專屬性試驗 取相同處方組成但缺主藥成分的空白口崩片樣品，按“2.1.3”項下方法制得硫酸嗎啡陰性對照液，考察輔料對主藥的測定是否存在干擾。陰性對照、對照品和供試品溶液（批號：100401）的色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.陰性對照；B.對照品；C.供試品；1.溶劑；2.嗎啡Fig 1 HPLC chromatogramsA.negative control；B.control；C.sample；1.solvent；2.morphine

由圖1 可見，在此色譜條件下，硫酸嗎啡與其他峰分離較好，且峰形良好，保留時間適中，輔料對其測定無干擾。

2.1.5 標準曲線的制備 分別精密吸取硫酸嗎啡對照品母液（80 μg/ml）1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml至10 ml量瓶中，以氫醌溶液定容成8、12、16、20、24 μg/ml的系列質量濃度溶液，搖勻，分別精密量取10 μl注入色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積。將峰面積（y）與質量濃度（x）作線性回歸，得硫酸嗎啡的線性回歸方程：y＝9.54×103x+1.37×103（r＝0.999 9）。結果表明，硫酸嗎啡檢測質量濃度線性范圍為8～24 μg/ml。

2.1.6 精密度考察 按“2.1.5”項下方法，精密制備高、中、低3種質量濃度（8、16、24 μg/ml）硫酸嗎啡對照品溶液各5份，進樣測定，計算日內精密度RSD 分別為0.38%、0.34%、0.42%（n＝5）；按上述方法連續(xù)5 d 分別進樣測定，計算日間精密度RSD分別為0.89%、0.69%、0.31%（n＝5）。

2.1.7 加樣回收率考察 取硫酸嗎啡口崩片樣品（批號：100401）20 片，研細，精密稱取適量（60 mg，相當于硫酸嗎啡10 mg），置于25 ml量瓶中，加氫醌溶液適量，超聲處理使硫酸嗎啡溶解，用氫醌稀釋至刻度（80 μg/ml）；分別精密量取上述供試品溶液（80 μg/ml）0.5 ml 15 份置于10 ml 量瓶中，分為3組，分別加入硫酸嗎啡對照品溶液（80 μg/ml）0.6、1.5、2.4 ml，分別用氫醌溶液稀釋至刻度，定容成質量濃度為8.8、16、23.2 μg/ml的3種溶液，搖勻，離心，取上清液進樣10 μl，測定硫酸嗎啡含量，計算回收率。結果，平均回收率為98.36%～100.80%，表明該方法回收率較好，能滿足含量測定的要求，詳見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝3）Tab 1 Results of recovery test（n＝3）

2.1.8 溶液穩(wěn)定性考察（1）樣品穩(wěn)定性試驗：按照“2.1.3”項下方法進行樣品處理后，分別考察其在儀器樣品室10 ℃條件下0、6、12、24 h 的穩(wěn)定性，及在常溫下0、1、2、4 h 的穩(wěn)定性。結果在兩種條件下，測得含量的RSD 分別為0.82%和0.13%（n＝4），表明樣品的穩(wěn)定性良好。（2）對照品穩(wěn)定性：取80 μg/ml對照品母液置于－20 ℃下考察其穩(wěn)定性。分別于0、1、3、6 d時取2 ml，置于10 ml量瓶中用氫醌溶液稀釋成16 μg/ml，測定質量濃度，計算含量的RSD為0.88%（n＝4），表明對照品溶液在－20 ℃條件下6 d內的穩(wěn)定性良好。

2.1.9 樣品含量測定 分別取3 個批號的樣品各20 片研細，分別按“2.1.3”項下的方法制得供試品溶液，每批各3份，搖勻，進樣，測定樣品中的硫酸嗎啡含量，結果分別為（102.40±0.51）%、（102.26±0.59）%、（101.13±2.60）%，RSD為0.68%，表明其含量符合口崩片的制劑標準。

2.2 硫酸嗎啡口崩片的穩(wěn)定性研究

根據2010年版《中國藥典》對制劑穩(wěn)定性考察要求[4]，通過影響因素試驗、加速試驗及長期試驗考察硫酸嗎啡口崩片的穩(wěn)定性，確定其貯存條件及有效期。

有關物質檢測方法：參考硫酸嗎啡緩釋片標準中相關方法[4]，取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量（約相當于硫酸嗎啡20 mg），加氫醌溶液（取氫醌30 mg，加流動相1 000 ml溶解）10 ml，超聲處理，使硫酸嗎啡溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液（2 000 μg/ml）；精密量取適量，加氫醌溶液溶解并定量稀釋制成每1 ml中約40 μg的溶液，作為對照溶液（40 μg/ml）。精密量取供試品溶液和對照品溶液各10 μl，分別注入色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，各雜質峰面積之和不得大于對照溶液主峰面積（2.0%）。有關物質（%）＝各雜質峰面積之和/對照溶液主峰面積×100%。

崩解時間測定方法：在5 ml玻璃小管中預先盛有37 ℃、2 ml蒸餾水，任取片劑1片置于小玻璃管中，即刻計時，靜態(tài)條件下觀察片劑崩解情況。以完全崩解且混懸介質全部通過710 μm篩網為準，記錄崩解時間[3]。

2.2.1 影響因素試驗 取批號為100402的樣品，除去外包裝，分別取20 片樣品置于2 種高濕條件下[25 ℃、相對濕度（RH）92.5%，25 ℃、RH 75%]放置10 d。于第5 天、第10 天取樣測定，并與0 d質量比較，結果見表2。

表2 吸濕增質量結果Tab 2 Results of hygroscopic growth

由表2可知，高濕（25 ℃、RH 92.5%）條件下樣品的吸濕增質量率大于5%，因此選擇高濕（25 ℃、RH 75%）條件下考察吸濕增質量率。

取批號為100402 的樣品，除去外包裝，分別取20 片樣品置于強光（4 500 lx）、高溫（60 ℃）、高濕（25 ℃、RH 75%）條件下，放置10 d。于第5天、第10天取樣測定，并與0 d質量比較，結果見表3。

表3 影響因素試驗結果Tab 3 Results of influential factors test

由表3可知，本品3種試驗條件下放置10 d，外觀、含量、有關物質各檢查項均無明顯變化，表明本品對強光、高溫較穩(wěn)定；另，吸濕增質量研究表明本品有一定吸濕性，但吸濕增質量率未超過規(guī)定標準（5%）。因此，模擬的上市包裝選擇鋁塑包裝，并于陰涼處密閉保存以維持產品質量穩(wěn)定。

2.2.2 加速試驗 3 批樣品模擬上市包裝，取適量，在40 ℃、RH75%條件下放置6個月。于1、2、3、6月分別取樣測定，并與0月數(shù)據比較。結果表明各項檢測指標未見明顯變化，詳見表4。

表4 加速試驗結果Tab 4 Results of accelerated rest

2.2.3 長期試驗 3 批樣品模擬上市包裝，取適量，在25 ℃、RH60%條件下放置，于3、6、9、12、18、24 個月分別取樣測定，并與0 月數(shù)據比較。結果表明，各項檢測指標結果基本穩(wěn)定，吸濕增質量率未超過規(guī)定標準（5%）；體外崩解時限檢查結果表明樣品在貯存的過程中崩解時限無明顯變化趨勢，詳見表5。因此，長期穩(wěn)定性考察結果表明本口崩片有效期可定為2年。

3 討論

表5 長期試驗結果Tab 5 Results of long-term test

本研究參照2010年版《中國藥典》硫酸嗎啡緩釋片項下方法，以HPLC法測定硫酸嗎啡口崩片中硫酸嗎啡的含量。根據方法專屬性試驗結果表明，口崩片中的空白輔料不影響主藥硫酸嗎啡的測定，故不需改變方法學中的色譜條件即可準確測定硫酸嗎啡含量。硫酸嗎啡具還原性，在光照條件下能被空氣氧化，可生成偽嗎啡和N-氧化嗎啡，而其水溶液在中性或堿性條件下易被氧化[5]，故使用HPLC法測定硫酸嗎啡含量時，流動相中加入了冰醋酸調節(jié)pH，且加入具有較強還原性質的氫醌（鄰苯二醌）作為抗氧化劑，使檢測時樣品性質保持穩(wěn)定[6-7]。

本品為口崩片，由于其制劑工藝的特點，所用輔料具有較強的吸濕性，因此需密封保存[8]。本文模擬上市包裝選擇泡罩包裝（又稱水泡眼包裝）作為硫酸嗎啡口崩片直接接觸藥品的包裝材料。所用材料主要為藥用鋁箔及塑料硬片（PTP），泡罩包裝外加防潮袋，符合原國家藥品監(jiān)督管理局《藥品包裝用材料、容器管理辦法（暫行）》有關各項規(guī)定[9]。參考《中國藥典》穩(wěn)定性考察項目，根據影響因素試驗、加速試驗及長期試驗（24 個月）結果，各項指標均符合規(guī)定，產品質量穩(wěn)定，產品有效期確定為2年。

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