不同方法測(cè)定痤瘡患者外周血中IL-4及IFN-γ水平分析

全洪兵 于國(guó)東 羅嬌娜 陳偉才 李琳 李廣華

不同方法測(cè)定痤瘡患者外周血中IL-4及IFN-γ水平分析

全洪兵 于國(guó)東 羅嬌娜 陳偉才 李琳 李廣華

目的用不同方法檢測(cè)痤瘡患者外周血中白細(xì)胞介素4(IL-4)、γ干擾素(IFN-γ)的細(xì)胞因子表達(dá)量, 探討?zhàn)畀徎颊呦鄳?yīng)的免疫功能的失衡狀況, 從而為臨床采用更有效的檢測(cè)和治療的方法提供理論依據(jù)。方法60例痤瘡患者為實(shí)驗(yàn)組,60例健康體檢者為對(duì)照組, 分別采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法、流式細(xì)胞術(shù)兩種方法, 檢測(cè)外周血中IL-4及IFN-γ水平, 比較兩種方法測(cè)定實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組血漿IL-4及IFN-γ水平的不同。結(jié)果雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組血清中IL-4表達(dá)量為(45.48±17.36)ng/L, 相對(duì)于對(duì)照組顯著升高(P＜0.001)；IFN-γ為(40.59±16.47)ng/L, 相對(duì)于對(duì)照組顯著降低(P＜0.001), IFN-γ/IL-4比值相對(duì)于對(duì)照組顯著降低(P＜0.001)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組外周血中胞內(nèi)IL-4占總T細(xì)胞百分比為(6.767±1.477)%, 相對(duì)于對(duì)照組顯著升高(P＜0.01), IFN-γ為(5.70±3.766)%, 相對(duì)于對(duì)照組顯著降低(P＜0.001), IFN-γ/IL-4比值相對(duì)于對(duì)照組顯著降低(P＜0.001)。結(jié)論 兩種方法進(jìn)行IL-4及IFN-γ測(cè)定表達(dá)水平不同, 但是痤瘡患者與健康人相比IL-4及IFN-γ表達(dá)升高或降低趨勢(shì)一致。

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；流式細(xì)胞術(shù)；痤瘡；白細(xì)胞介素4 ；γ干擾素

痤瘡(acne)是臨床常見(jiàn)毛囊皮脂腺慢性炎癥性皮膚病,好發(fā)于青春期男女[1]。Andrews《皮膚病學(xué)》中指出：10余歲青少年中90%發(fā)生過(guò)痤瘡[2]。痤瘡的發(fā)病機(jī)制除因皮脂分泌過(guò)多、毛囊皮脂腺導(dǎo)管過(guò)度角化、痤瘡丙酸桿菌引發(fā)炎癥及性激素分泌對(duì)皮脂腺調(diào)控異常等因素外, 近年來(lái)的研究表明, 免疫失衡在痤瘡炎癥發(fā)展中起關(guān)鍵性作用[3]。在痤瘡皮損中, 角質(zhì)形成細(xì)胞和皮脂腺細(xì)胞均可表達(dá)TLR-2 和TLR-4 并誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-8、IL-2、腫瘤壞死因子α 及IFN-γ等細(xì)胞因子, 引起粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞趨化聚集[4,5], T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫活化反應(yīng)參與痤瘡發(fā)病過(guò)程, 并隨著病情的加重而增強(qiáng), IL-4的水平在此過(guò)程會(huì)明顯升高[6]。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)用ELISA方法與流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)痤瘡患者外周血中血清IL-4、IFN-γ的細(xì)胞因子水平與外周血中胞內(nèi)IL-4、IFN-γ占總T細(xì)胞百分比水平, 探討?zhàn)畀徎颊呦鄳?yīng)的免疫功能的失衡狀況, 從而為臨床采用更有效的檢測(cè)和治療方法提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對(duì)象選取本院及廣東省人民醫(yī)院門診2013年8月～2014年3月門診痤瘡患者共60例為實(shí)驗(yàn)組,選擇60例健康體檢者為對(duì)照組, 采用的納入及排除標(biāo)準(zhǔn)如下[7]：納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合Pillsbury診斷標(biāo)準(zhǔn)；②痤瘡分級(jí)明確；③年齡16～30歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦及哺乳期婦女；②有嚴(yán)重心肝腎及免疫系統(tǒng)疾病者；③近1個(gè)月有應(yīng)用糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑。兩組性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及處理 所有研究對(duì)象均于清晨空腹時(shí)采肘靜脈血, 分A、B兩管, A管2 ml EDTA抗凝, B管2 ml肝素鈉抗凝。A管及時(shí)3000 r/min(離心半徑15 cm)離心20 min,分離吸取血漿, 血漿標(biāo)本于-20℃凍存, 待統(tǒng)一條件下以ELISA檢測(cè)。B管直接流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。

1.2.2 檢測(cè)方法 檢測(cè)血漿IL-4及IFN-γ水平, 分別在本院以及廣東省人民醫(yī)院檢測(cè)。本院采用雙抗體夾心ELISA法, 試劑盒由上海將來(lái)試劑有限公司提供, IL-4批號(hào)：201312, IFN-γ批號(hào)：201312, 嚴(yán)格按說(shuō)明書操作。廣東省人民醫(yī)院采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th1/Th2細(xì)胞(CD3/ IFN-γ/ IL-4)(試劑盒為美國(guó)BD提供, FastImmune Cytokine Value, 貨號(hào)：340460, 批號(hào)：615324), 嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè)外周血血清中IFN-γ、IL-4的表達(dá)水平分別為(40.59±16.47)ng/L、(45.48±17.36)ng/L, IFN-γ/IL-4為(0.9848±0.4403), 與對(duì)照組進(jìn)行比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。見(jiàn)表1, 圖1(A)。

2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中胞內(nèi)IFN-γ、IL-4占總T細(xì)胞的百分比分別為(5.70±3.766)%、(6.767±1.477)%, IFN-γ/ IL-4為(0.8962±0.466), 與對(duì)照組進(jìn)行比較, IFN-γ百分比與IFN-γ/IL-4比值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001), IL-4比值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)表1, 圖1(B)。

表1 兩組不同方法IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平檢測(cè)比較 (±s)

表1 兩組不同方法IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平檢測(cè)比較 (±s)

注：與對(duì)照組比較,aP＜0.001,bP＜0.01

檢測(cè)方法 組別 例數(shù) IFN-γ IL-4 IFN-γ/IL-4 ELISA方法 實(shí)驗(yàn)組(ng/L) 60 40.59±16.47a 45.48±17.36a 0.9848±0.4403a對(duì)照組(ng/L) 60 75.64±23.21 30.13±12.13 2.819±1.314流式細(xì)胞術(shù) 實(shí)驗(yàn)組(%) 60 5.70±3.766a 6.767±1.477b 0.8962±0.466a對(duì)照組(%) 60 10.92±6.036 5.683±1.935 2.12±1.203

圖1 兩組不同方法IFN-γ、IL-4水平檢測(cè)比較

2.3 ELISA方法與流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)IFN-γ/IL-4比值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 表明兩種方法檢測(cè)IFN-γ/IL-4具有一致性。

3 討論

痤瘡的發(fā)病機(jī)制中, 免疫失衡在痤瘡炎癥發(fā)展中起關(guān)鍵性作用[8]。T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫活化反應(yīng)和體液免疫均參與了痤瘡的發(fā)病機(jī)制, T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫活化反應(yīng)參與痤瘡發(fā)病過(guò)程[9]。

本文采用ELISA方法與流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)痤瘡患者外周血中血清IL-4、IFN-γ的細(xì)胞因子水平與外周血中胞內(nèi)IL-4、IFN-γ占總T細(xì)胞百分比水平與對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比分析。雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè)外周血血清中IFN-γ、IL-4的表達(dá)水平, 與對(duì)照組進(jìn)行比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中胞內(nèi)IFN-γ、IL-4占總T細(xì)胞的百分比, 與對(duì)照組進(jìn)行比較, IFN-γ百分比與IFN-γ/IL-4比值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001), IL-4比值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。ELISA方法與流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行比較, IFN-γ/IL-4比值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 表明兩種方法檢測(cè)IFN-γ/IL-4具有一致性。

本文研究說(shuō)明痤瘡患者外周血中無(wú)論是血清中還是胞內(nèi), 都存在IFN-γ/IL-4比例相對(duì)于正常人顯著降低, 細(xì)胞因子水平失衡。痤瘡治療上目前臨床主要采用抗感染、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、抗雄激素、中藥熏蒸[10]等常規(guī)藥物方法, 但治療存在不良反應(yīng)多、易反復(fù)等問(wèn)題, 可通過(guò)細(xì)胞主動(dòng)免疫治療,與免疫抑制劑等從調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能方面等新方法著手治療痤瘡, 可能達(dá)到良好效果。

[1]趙辨.臨床皮膚病學(xué).第3版.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社,2001:935.

[2]Odom RB, James WD, Berger TG. Andrews Diseases of the Skin.9th ed. Philadelphia: Sauders,2000:284-306.

[3]Jugeau S, Tenaud I, Knol AC, et al. Induction of toⅡ-Iike receptors by Propion ibacterium acnes. Br J Dermatol,2005,153(6):1105-1113.

[4]McCaskill JG, Chason KD, Hua X, et al. Puomonary inmune responses to Propionibacterium acnes in C57BL/6 and BALB/cmice. Am J Respir Cell Mol Biol,2006,35(3):347-356.

[5]林新瑜, 羅旭松, 董巍, 等.痤瘡患者血清白介素-1α、白介素-6、白介素-8和α-腫瘤壞死因子水平的檢測(cè)分析.臨床皮膚科雜志,2003,32(6):435-436.

[6]吳小紅, 劉瓦利.細(xì)胞免疫和體液免疫在尋常性痤瘡發(fā)病中作用.中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志,2006,22(11):915-916.

[7]Lehmann HP, Robinson KA, Andrews JS, et al. Acne therapy: a methodologic review. J Am Acad Dermatol,2002,47(2):231-240.

[8]李佳妍.痤瘡發(fā)病機(jī)制中免疫應(yīng)答的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)綜述雜志,2008,25(9):1124-1126.

[9]馬喜興, 劉科峰. 座瘡發(fā)病機(jī)制中的免疫因素.中國(guó)美容醫(yī)學(xué)雜志,2011,20(4):695-696.

[10]梅莉紅, 干慧慧, 曾義斌, 等.中藥熏蒸治療輕、中度尋常痤瘡療效觀察及血清細(xì)胞因子水平檢測(cè).中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志,2011,25(9):716-718.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.15.025

2015-04-27]

525300 廣東省佛山市順德區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科(全洪兵于國(guó)東 陳偉才 李琳)；廣東省佛山順德區(qū)計(jì)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科(羅嬌娜)；廣東省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(李廣華)