Notch1在膽管癌細(xì)胞光動(dòng)力療法中的作用研究

蘇　進(jìn)，鄧小峰，熊　力，文　宇，苗雄鷹

(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院， 肝膽外科， 湖南 長沙 410011)

Notch1在膽管癌細(xì)胞光動(dòng)力療法中的作用研究

蘇進(jìn)，鄧小峰，熊力，文宇，苗雄鷹*

(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院， 肝膽外科， 湖南 長沙 410011)

摘要：目的：1、研究Photosan介導(dǎo)光動(dòng)力療法(Photodynamic Therapy，PDT)對(duì)膽管癌細(xì)胞的殺傷作用。2、探討Notch1在膽管癌發(fā)生中的表達(dá)情況以及Notch1在PDT治療膽管癌細(xì)胞中的作用。方法：1、體外培養(yǎng)人膽管癌QBC939細(xì)胞株，在細(xì)胞對(duì)數(shù)生長期用不同濃度Photosan處理，并用半導(dǎo)體激光治療儀不同強(qiáng)度光照后，采用MTT法檢測(cè)PDT對(duì)QBC939細(xì)胞的殺傷作用。觀察不同的光敏劑孵育時(shí)間、光敏劑濃度及光照劑量對(duì)PDT效果的影響。2、采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法和蛋白印跡法檢測(cè)膽管癌細(xì)胞Notch1表達(dá)，經(jīng)Photosan介導(dǎo)光動(dòng)力作用膽管癌細(xì)胞后，檢測(cè)膽管癌細(xì)胞內(nèi)Notch1表達(dá)變化。結(jié)果：1、MTT結(jié)果顯示Photosan介導(dǎo)的PDT對(duì)膽管癌細(xì)胞有殺傷作用(P<0.05)，而且這種殺傷作用在一定范圍內(nèi)隨著光敏劑濃度增加、光敏劑孵育時(shí)間、光照劑量呈正相關(guān)。2、免疫細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)Notch1在膽管癌細(xì)胞中高表達(dá)，其表達(dá)主要位于細(xì)胞膜及胞漿，并且經(jīng)PDT處理后Notch1表達(dá)量較前減少(P<0.05)。結(jié)論： Notch1與膽管癌細(xì)胞生長、增殖密切相關(guān)，且Notch1在PDT對(duì)膽管癌細(xì)胞產(chǎn)生的抑制、促凋亡和殺傷作用中有重要作用。

關(guān)鍵詞：光動(dòng)力療法；膽管癌；Notch1信號(hào)

流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在世界范圍內(nèi)膽管癌的發(fā)病率及死亡率均有上升趨勢(shì)，中國是膽管癌的發(fā)病大國, 約占全球膽管癌的55%[1, 2]。膽管癌的治療手段很多，手術(shù)切除仍為首選治療，但早期膽管癌缺乏明顯臨床癥狀，在診斷后使得超過50%患者失去手術(shù)切除機(jī)會(huì)，非切除膽管癌患者的生存期一般<1年[3]。光動(dòng)力療法(photodynamic therapy， PDT)目前被認(rèn)為是腫瘤姑息性治療手段之一，PDT具有高選擇性、操作簡單、可重復(fù)性、副作用少、治療效果佳等優(yōu)點(diǎn)，不僅能夠提高不可切除膽管癌患者生存期，同時(shí)能改善患者的生活質(zhì)量。PDT主要通過產(chǎn)生活性氧來誘導(dǎo)腫瘤凋亡，體外試驗(yàn)及裸鼠膽管癌模型上均得到了證實(shí)，但具體的分子機(jī)制仍有待更深一步研究[4, 5]。最近越來越多的研究發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)通路在決定膽管癌生物學(xué)特性上有著重要意義，Notch信號(hào)過表達(dá)能促進(jìn)膽管癌細(xì)胞增殖、遷移、上皮細(xì)胞間質(zhì)化(EMT)、腫瘤血管形成及抗腫瘤藥免疫等，并與膽管癌的分化程度相關(guān)[6]。本研究旨在探討Notch信號(hào)在光動(dòng)力治療膽管癌中的作用及 PDT的可能分子機(jī)制，為基于Notch信號(hào)通路的光動(dòng)力治療提供依據(jù)。

1材料和方法

1.1材料

QBC939購自中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院細(xì)胞中心，光敏劑Photosan購自德國(Seehof Labiratorium F&E GmbH Wesselburenerkoog)， MTT(Sigma-Aldrich公司，美國)，Hochest 33258(谷歌公司，武漢)，兔抗鼠Notch1多克隆抗體(Abcam公司，美國)，半導(dǎo)體激光光動(dòng)力儀(深圳雷邁公司)，光纖(深圳雷邁公司)，超凈臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司)，恒溫CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermo公司，美國)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(Thermo公司，美國)，倒置顯微鏡(奧林巴斯，日本)，激光掃描共聚焦顯微鏡Leica TCS SP5(Leica/徠卡，德國)，熒光顯微鏡(奧林巴斯公司，日本)。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)及MTT試驗(yàn)

膽管癌細(xì)胞株QBC939貼壁生長于DMEM完全培養(yǎng)液(含10%胎牛血清，青霉素100 U/mL，鏈霉素100 mg/L)，于37 ℃、5%CO2飽和濕度恒溫箱中培養(yǎng)，約48 h傳代一次，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，胰酶消化后離心制懸，計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，濃度約為4×104/mL，接種于96孔板中，每組設(shè)4個(gè)平行孔，置于溫箱中孵育24 h后棄培養(yǎng)液，分別加入濃度為0 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、4 mg/L、8 mg/L、16 mg/L的Photosan，孵育時(shí)間分別設(shè)為0 h、1 h、2 h、4 h、8 h，光照前棄上清液，PBS清洗3次后加入含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)液，調(diào)整半導(dǎo)體激光儀光照劑量分別為 0 J/cm2、5 J/cm2、10 J/cm2、15 J/cm2進(jìn)行照射，波長為630 nm，溫箱中孵育24 h后進(jìn)行MTT試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)吸光度(波長為570 nm)，測(cè)定各孔OD值，空白對(duì)照組進(jìn)行調(diào)零，觀察PDT對(duì)QBC939的殺傷、抑制作用，并計(jì)算各組的細(xì)胞存活率=(實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值)×100%。以上試驗(yàn)重復(fù)3次，全程在避光下進(jìn)行。

1.2.2細(xì)胞免疫熒光測(cè)定Notch1在QBC939中的表達(dá)

取對(duì)數(shù)生長期的QBC939細(xì)胞種植于置有蓋玻片的6孔板中，溫箱中培養(yǎng)24 h后制成細(xì)胞爬片，4%多聚甲醛固定并用破膜工作液處理，依次加入兔抗鼠Notch1多克隆抗體(稀釋比1∶100)、山羊抗兔Hochest二抗，DAPI染核，抗熒光淬滅封片劑封片，熒光顯微鏡拍照分析，激光共聚焦顯微鏡對(duì)Notch1表達(dá)分布進(jìn)行亞定位，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。爬片成功后經(jīng)PDT處理，同法進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞中出現(xiàn)紅色為陽性，其中細(xì)胞核染色且符合評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的定性為細(xì)胞核陽性。通過觀察各視野中細(xì)胞染色強(qiáng)度，以文獻(xiàn)中報(bào)道的陽性病例作為陽性對(duì)照。其中，根據(jù)熒光強(qiáng)弱分為：強(qiáng)陽性(+++)，陽性(++)，弱陽性(+)，表達(dá)陰性為(-)。

1.2.3Western-Blot測(cè)定PDT處理后QBC939中Notch1蛋白表達(dá)

于PDT處理后提取QBC939細(xì)胞中Notch1總蛋白，將其加入SDS聚丙烯凝膠電泳進(jìn)行分離，然后轉(zhuǎn)入PVDF膜，用封閉液按1∶200的比例稀釋兔抗鼠Notch1多克隆抗體或抗β-actin抗體，膜與一抗孵育4 ℃過夜，封閉液按1∶500比例稀釋二抗，室溫?fù)u床2 h，然后放入NBT/ BCIP中顯色，掃描，陽性條帶用Quantity One 4.4.1軟件分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2結(jié)果

2.1PDT對(duì)QBC939細(xì)胞存活率的影響

PDT處理后通過光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，QBC939細(xì)胞生長抑制明顯，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯皺縮，細(xì)胞核固縮，折光性下降，部分出現(xiàn)包膜皺縮、胞質(zhì)濃縮、核固縮、染色質(zhì)邊集、核裂解和凋亡小體形成，表現(xiàn)為壞死、凋亡改變。不同Photosan濃度、光敏劑孵育時(shí)間及光照劑量對(duì)QBC939存活率的影響見圖1-圖3，隨機(jī)選定其中兩個(gè)參數(shù)，得出另外一個(gè)參數(shù)的最佳值，最終當(dāng)光照劑量為10 J/cm2、光敏劑濃度為8 mg/L、光敏劑孵育時(shí)間為4 h時(shí)，PDT對(duì)細(xì)胞的殺傷效果最佳(P<0.05)，抑制率達(dá)到72.72%，繼續(xù)增加光敏劑濃度、光照劑量及光敏劑孵育時(shí)間PDT所致細(xì)胞存活率的下降不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且實(shí)驗(yàn)過程中未見明顯光毒性及光敏劑毒性(P>0.05)。因此，Photosan介導(dǎo)PDT治療QBC939安全有效，且當(dāng)Photosan濃度8 mg/L、光敏劑孵育時(shí)間4 h及光照劑量10 J/cm2時(shí)治療效果最佳。

圖1　選定光敏劑孵育時(shí)間為4 h、光照劑量為10 J/cm2時(shí)，不同光敏劑濃度對(duì)細(xì)胞存活率的影響Fig.1　The impacts of Photosan concentrations on cell viability of PDT, when light dose was 10 J/cm2 and incubate time was 4 h

圖2　選定光敏劑濃度為8 mg/L、光敏劑孵育時(shí)間為4 h時(shí)，不同光照劑量對(duì)細(xì)胞存活率的影響Fig.2　The impacts of light dose on cell viability of PDT, when Photosan concentration was 8 mg/L and incubate time was 4 h

圖3　選定光敏劑濃度為8 mg/L、光照劑量為10 J/cm2時(shí)，不同光敏劑孵育時(shí)間對(duì)細(xì)胞存活率的影響Fig.3　The impacts of incubation times on cell viability of PDT, when Photosan concentration was 8 mg/L and light dose was 10 J/cm2

圖4　激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)Notch1的表達(dá)(×400)A：Notch1，主要表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中；B：DAPI染核；C：A和B合并Fig.4　The expression of Notch1, detected by laser scanning confocal microscope(×400)A: Notch1, mainly expressed in cytomembrane and cytoplasm; B: Nucleus; C: A and B Merged

2.2免疫熒光檢測(cè)PDT對(duì)QBC939 Notch1表達(dá)的影響

圖5　Notch1在QBC939中呈強(qiáng)陽性表達(dá)(×200)A：Notch1蛋白；B：DAPI染核；C：A和B合并；D：PDT處理后Notch1蛋白表達(dá)，E：DAPI染核，F(xiàn)：D和E合并；G、H、I為陰性對(duì)照Fig.5　Notch1 was overexpressed in QBC939, detected by fluorescence microscope (×200)A:Notch1; B:Nucleus; C:A and B merged; D:The expression of Notch1 after PDT; E:Nucleus; F:D and E merged; G, H and I was negative control

免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Notch1蛋白在 QBC939中強(qiáng)陽性表達(dá)(圖5)，在激光共聚焦顯微鏡下可以看出Notch1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中(圖4)。設(shè)定參數(shù)為光敏劑濃度16 mg/L、光照劑量為10 J/cm2時(shí)，經(jīng)PDT處理后48 h行免疫熒光發(fā)現(xiàn)Notch1的熒光強(qiáng)度表達(dá)明顯降低，呈弱陽性(圖5)。

2.3Western Blot檢測(cè)PDT處理后Notch1蛋白的表達(dá)

Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Notch1在QBC939細(xì)胞中均呈過表達(dá)狀態(tài)，設(shè)定參數(shù)為光敏劑濃度1 mg/L、光照劑量5 J/cm2、光敏劑孵育時(shí)間4 h，PDT處理后孵育48 h后行凝膠電泳，測(cè)量Notch1蛋白灰度值為19.51± 2.25，與對(duì)照組比較表現(xiàn)出下降(P<0.05)；當(dāng)參數(shù)設(shè)定光敏劑濃度16 mg/L、光照劑量10 J/cm2、光敏劑孵育時(shí)間4 h時(shí)，PDT處理后，Notch1蛋白灰度值為14.55±2.01，與對(duì)照組比較有明顯差異(P<0.05)，A、B兩組之間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖6)。

圖6　PDT處理后Notch1的表達(dá)變化.0組為對(duì)照組(未經(jīng)PDT處理)A、B組經(jīng)PDT處理(A組為低劑量光照、低濃度光敏劑組；B組為高劑量光照、高濃度光敏劑組)Fig.5　The expression of Notch1 after PDT, detected by Western-Blot. Group O was blank control. Group A and B deal with PDT(group A treated with 1 mg/L Photosan at light dose 5 J/cm2,while B treated with 16 mg/L Photosan at light dose 10 J/cm2)

3討論

光動(dòng)力療法(PDT)應(yīng)用于膽管癌的治療已有數(shù)十年，先后經(jīng)歷了體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)驗(yàn)三個(gè)階段，目前臨床上主要用于不可切除膽管癌的姑息性治療和術(shù)前新輔助治療[7-8]，也有個(gè)別報(bào)道稱應(yīng)用膽道良性腫瘤和癌前病變的治療，如膽管乳頭狀瘤和重度非典型增生[9-10]。光動(dòng)力療法在膽管癌細(xì)胞中的殺傷作用得到了國內(nèi)外學(xué)者的證實(shí)，姜海濤[11]等使用血卟啉衍生物(HPD)介導(dǎo)光動(dòng)力療法作用于膽管癌細(xì)胞，證實(shí)PDT在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中有顯著的殺傷抑制作用，其抑制程度達(dá)到了80%。韓國學(xué)者Kim[12]等采用LED光源、光敏劑5-ALA對(duì)膽管癌細(xì)胞株HuCC-T1的殺傷作用研究，在無明顯光敏劑毒性的范圍內(nèi)隨著光敏劑孵育時(shí)間延長，PDT效應(yīng)越好。Wagner[13]等研究發(fā)現(xiàn)不同膽管癌細(xì)胞株對(duì)PDT的敏感性變化較大，并認(rèn)為造成這種結(jié)果的原因在于miRs的作用。深入研究PDT在腫瘤作用的機(jī)制及相關(guān)影響因素將對(duì)提高腫瘤治療療效提供指導(dǎo)。

PDT所致的腫瘤細(xì)胞凋亡主要通過誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)外凋亡通路實(shí)現(xiàn)。大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證明[14-16]PDT通過上調(diào)caspase-3、caspase-7、caspase-9和caspase-12等凋亡蛋白的表達(dá)激活內(nèi)外源性凋亡通路，最終誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，其中以內(nèi)源性占主導(dǎo)作用。最近有研究發(fā)現(xiàn)[6]Notch信號(hào)與膽管癌發(fā)生、發(fā)展、遷移和浸潤等特征有密切關(guān)系，一定程度上決定了腫瘤干細(xì)胞的狀態(tài)，在腫瘤的形成過程中發(fā)揮著原癌基因的特性。Zender等[17]發(fā)現(xiàn)Notch1信號(hào)胞內(nèi)域(NICD)高表達(dá)誘導(dǎo)肝內(nèi)膽管癌的形成，其下游靶基因HES-1在膽管癌多種細(xì)胞系中的高表達(dá)也得到證實(shí)。Notch1/2/3/4在肝外膽管癌中表達(dá)均有上調(diào)，其中Notch1的異常表達(dá)與肝外膽管癌的TNM分期相關(guān)，與腫瘤進(jìn)展存在一定關(guān)系[18]。但也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)[19-20]Notch1在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)伴隨著P53基因的異常表達(dá)，認(rèn)為Notch1的過表達(dá)和 P53的失活在促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展有協(xié)同作用。由此可見，Notch信號(hào)在膽管癌的發(fā)生中有重要作用，并有可能協(xié)同多種因素促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。

本次實(shí)驗(yàn)中，我們首先通過MTT實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證PDT對(duì)膽管癌細(xì)胞的殺傷抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)光動(dòng)力療法對(duì)QBC939細(xì)胞抑制作用明顯(如圖1-3)，其抑制程度達(dá)72.72%，與完全空白對(duì)照組相比有明顯差異(P<0.05)，在一定范圍內(nèi)，這種作用隨著PDT上述的三個(gè)參數(shù)強(qiáng)度的增加而增強(qiáng)，由此可以看出這三個(gè)參數(shù)在一定程度上能決定PDT的療效，為光動(dòng)力的后續(xù)研究發(fā)展提供了基礎(chǔ)實(shí)踐依據(jù)。然而在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，PDT并不能完全殺死膽管癌細(xì)胞，處理一段時(shí)間后QBC939得到重新生長，這也是PDT治療后腫瘤復(fù)發(fā)的原因，在動(dòng)物模型及人體臨床應(yīng)用中，腫瘤微環(huán)境變化更加微妙，而且受到光照滲透能力的限制，甚至光源導(dǎo)入途徑的困難處境，因此，除了本實(shí)驗(yàn)中涉及的三個(gè)光動(dòng)力參數(shù)以外，我們同時(shí)應(yīng)當(dāng)將目光定位于其他直接限制臨床應(yīng)用及影響臨床療效的因素上，如光敏劑的改進(jìn)、光源的革新，以及多種治療手段的聯(lián)合應(yīng)用等。

然后驗(yàn)證Notch1信號(hào)與PDT所致細(xì)胞凋亡的關(guān)系。通過免疫熒光我們發(fā)現(xiàn)Notch1蛋白在QBC939中明顯高表達(dá)，說明了Notch1可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在一定關(guān)系。通過共聚焦顯微鏡對(duì)Notch1表達(dá)進(jìn)行亞定位發(fā)現(xiàn)其主要表達(dá)位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中，這充分符合Notch受體胞內(nèi)合成、胞膜上組裝并發(fā)揮生物學(xué)特征的特點(diǎn)。經(jīng)過PDT處理后，Notch1的熒光強(qiáng)度較對(duì)照組明顯下調(diào)，呈弱陽性狀態(tài)，Western-blot檢測(cè)Notch1蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.05)，QBC939增殖明顯受到抑制，并出現(xiàn)凋亡，說明了Notch1在膽管癌細(xì)胞中起促進(jìn)增殖和抑制凋亡的作用。且PDT高參數(shù)組(B組)較低參數(shù)組(A組)相比，Notch1蛋白表達(dá)下降更加明顯(P<0.05)，說明了在一定范圍內(nèi)PDT的療效與Notch1表達(dá)量負(fù)相關(guān)。由此可見，PDT可能通過引起QBC939細(xì)胞Notch1蛋白表達(dá)的減少來抑制細(xì)胞生長、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡甚至壞死，可能成為繼激活經(jīng)典凋亡通路后光動(dòng)力誘發(fā)細(xì)胞凋亡的新的機(jī)制。然而，Notch信號(hào)通路的其他成員在PDT治療中的作用如何仍需要更深入研究，光動(dòng)力治療過程中Notch信號(hào)通路與凋亡通路之間的關(guān)系如何仍然有待探討和挖掘。因此，深入探索Notch信號(hào)通路與PDT的關(guān)系，在此基礎(chǔ)上全面開展基于Notch信號(hào)的光動(dòng)力治療，可能成為腫瘤光動(dòng)力治療的新方向。

4結(jié)論

綜上分析，體外實(shí)驗(yàn)中PDT對(duì)膽管癌細(xì)胞有明顯的抑制和促凋亡作用，而這種作用可能和Notch信號(hào)通路表達(dá)異常有著密切關(guān)系。和細(xì)胞凋亡的兩大經(jīng)典途徑不同的是，Notch通路較為簡單，而且可以通過和VEGF信號(hào)相互影響和調(diào)節(jié)腫瘤血管形成[21]，甚至是偶聯(lián)多種信號(hào)通路影響腫瘤的生物學(xué)特性，目前已經(jīng)有部分靶向Notch信號(hào)通路的要藥物應(yīng)用臨床研究中，證實(shí)了其臨床應(yīng)用的實(shí)用性。因此，靶向Notch信號(hào)的光動(dòng)力治療、PDT與靶向Notch信號(hào)的聯(lián)合治療或者指導(dǎo)腫瘤干細(xì)胞的治療等值得我們更進(jìn)一步的研究和探索，為將來腫瘤的治療提供一種新的思路和方法。

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The Research of Notch1 in Photodynamic Therapy of Cholangiocarcinoma Cells

SUJin，DENGXiaofeng，XIONGLi，WENYu，MIAOXiongying*

(Department of Hepatobiliary Surgery, The 2nd Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410011, Hunan, China)

Abstract：Objective：1.Research the killing effect of Photosan mediated photodynamic therapy(PDT) for cholangiocarcinoma cells. 2.Investigate the expression of Notch1 protein in cholangiocarcinoma cells and the function of Notch1 when deal with PDT. Methods：1.Cholangiocarcinoma cells line QBC939 was cultured in vitro, and incubated with different concentration of Photosan when QBC939 growth is in the logarithmic phase, then irradiated with semi-conducted laser device with different light doses. Detect the killing effects of PDT for cholangiocarcinoma with MTT assay when applying with different incubation time and changable concentrations of photosensitizer and variable doses of light. 2.Detect the expression of Notch1 protein in cholangiocarcinoma cells by using immunofluoresence method and Western-blot method, and detect the variation of Notch1 after PDT. Result:1.MTT assay show that Photosan mediated PDT have killing effect to cholangiocarcinoma cells(P<0.05). Under certain circumstance, this result positively correlate to the longer incubation time, higher photosensitizer concentration and larger dose of light. 2.Notch1 was highly expressed in membrane and cytoplasm in cholangiocarcinoma which was detected by immunochemistry assay. The rate of Notch1 was decreassed when deal using different parameters for PDT. Conclusions：Notch1 protein was highly related to the development and proliferation of cholangiocarcinoma cells and plays important role in killing and hampering the growth of cholangiocarcinoma cells while treating with PDT.

Key words：photodynamic therapy; cholangiocarcinoma; Notch1 signal

文章編號(hào)：1007-7146(2015)06-0513-05

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

中圖分類號(hào)：R735.8

*通訊作者：苗雄鷹，中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院普外科教授，博士生導(dǎo)師。(電子郵箱)4896142@qq.com

作者簡介：蘇進(jìn)，中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院碩士研究生，研究方向?yàn)楦文懩[瘤。(手機(jī))15874182107；(電子郵箱)915769309@qq.com

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81372628;81402536);長沙市科技局科技計(jì)劃(K1205018-31)；湖南省自然科學(xué)基金(12JJ5048);湖南省科技計(jì)劃(2012FJ3129；2013WK3029)；湖南省科技廳項(xiàng)目(2014WK2016)；美捷登青年科學(xué)研究基金(MJR20140011)

收稿日期：2015-09-10;修回日期:2015-10-10

doi:10.3969/j.issn.1007-7146.2015.06.004