新型保存液對(duì)家兔皮膚、眼的刺激性及標(biāo)本保存的實(shí)驗(yàn)研究

梁欣冬，馬文霞，張　優(yōu)，聶　政　(.成都醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)學(xué)員隊(duì)，四川 成都 60500；.成都醫(yī)學(xué)院人體解剖實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 60500)

新型保存液對(duì)家兔皮膚、眼的刺激性及標(biāo)本保存的實(shí)驗(yàn)研究

梁欣冬1，馬文霞1，張優(yōu)1，聶政2(1.成都醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)學(xué)員隊(duì)，四川 成都 610500；2.成都醫(yī)學(xué)院人體解剖實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610500)

[摘要]目的對(duì)一種新型標(biāo)本保存液進(jìn)行初步的毒理學(xué)測試及保存效果評(píng)定，為該產(chǎn)品應(yīng)用的安全實(shí)用性提供科學(xué)依據(jù)。方法24只新西蘭大白耳兔隨機(jī)平均分為生理鹽水組、傳統(tǒng)福爾馬林保存液組、混合液組、新型保存液組，觀察記錄各組液體對(duì)新西蘭大白耳兔的皮膚、眼的刺激性及肝臟標(biāo)本保存效果以及各組液體的揮發(fā)率比較，期望找出更適用于保存標(biāo)本和更低保存成本的一組保存液。結(jié)果新型保存液對(duì)家兔的皮膚和眼有一定的刺激性，且強(qiáng)于甲醛組?；旌弦航M保存效果最好，而新型保存液優(yōu)于甲醛。結(jié)論新型保存液和甲醛的1 ∶1混合液更適用于保存標(biāo)本和降低保存液成本。

[關(guān)鍵詞]新型保存液；皮膚刺激；眼刺激；保存效果

甲醛是一種強(qiáng)揮發(fā)性有機(jī)化合物，無色且具有強(qiáng)烈刺激性氣味的氣體[1]。在我國有毒化學(xué)品優(yōu)先控制名單上甲醛高居第二位[2]。含甲醛溶液的保存液(福爾馬林)防腐作用徹底，可保持尸體組織色澤，操作方法簡便，價(jià)格便宜，是目前最常使用的防腐固定劑。但作為實(shí)驗(yàn)尸體保存液，其明顯的缺點(diǎn)是揮發(fā)性強(qiáng)，對(duì)人的呼吸道黏膜和皮膚的刺激很大[3]。新型保存液是一種新型的無味保存液，目前文獻(xiàn)中關(guān)于其對(duì)皮膚、眼的刺激性及保存效果提及較少或者不全面。本實(shí)驗(yàn)致力于從新型保存液對(duì)家兔皮膚、眼的刺激性等方面進(jìn)行初步的毒理學(xué)測試及保存效果評(píng)定，為該產(chǎn)品的安全應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)用品

藥品：生理鹽水、蒸餾水、5%甲醛溶液、新型保存液(上海于澤生物科技有限公司)、3%戊巴比妥鈉。儀器及工具：燒杯(50 mL)、手術(shù)器械1套、記號(hào)筆、無菌紗布、無菌棉花、膠布、游標(biāo)卡尺(0.02 mm)、直尺(0.1 cm)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

隨機(jī)選取24只兔子(新西蘭大白耳兔)，體質(zhì)量1.9～2.1 kg，雌雄不論，兔子均健康無眼疾。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

將24只兔子隨機(jī)分為4組，做好標(biāo)記，分別做活體實(shí)驗(yàn)和標(biāo)本浸泡實(shí)驗(yàn)。第1組為生理鹽水組，第2組為5%甲醛溶液組，第3組為混合液(5%甲醛溶液與新型保存液1 ∶1混合組)，第4組為新型保存液組。

皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)：分別為4組兔子備皮，備皮區(qū)域?yàn)榧彝眉怪髠?cè)腰區(qū)，注意不要損傷皮膚,面積約為3 cm×3 cm[4-5]。用鑷子夾持浸滿4組保存液的同樣大小的無菌棉花分別輕柔反復(fù)涂于4組兔子的備皮區(qū)域，將多塊無菌紗布重疊覆蓋在其上，用膠布固定。連續(xù)涂抹3 d后觀察是否有變化，每天觀察直至出現(xiàn)明顯變化，期間記錄并拍照。根據(jù)指導(dǎo)原則中的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)記分，并按強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)判斷刺激強(qiáng)度。皮膚刺激性反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：參考中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則(編號(hào)〔Z〕GPT4-1)[6]，以紅斑、水腫等為評(píng)價(jià)指標(biāo)。刺激性分值=(紅斑反應(yīng)總分+水腫反應(yīng)總分)/每組動(dòng)物數(shù)。

眼刺激性實(shí)驗(yàn)：輕輕揭開4組家兔一側(cè)的下眼瞼，將受試物0.1 mL滴入兔眼結(jié)膜囊中，使上下眼瞼被動(dòng)閉合1 s，以防止受試物丟失[7]。觀察家兔眨眼次數(shù)，滴液后反應(yīng)及眼部的變化(測上下瞼裂距、記數(shù)1 min的眨眼次數(shù)，每隔30 min記錄1次，連續(xù)進(jìn)行3次取其平均值[8])。實(shí)驗(yàn)后1 h、24 h、72 h各觀察1 次，3 d后如變化仍未消退可再延期觀察。

肝臟保存效果實(shí)驗(yàn)：皮膚、眼刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取出各組兔子，麻醉后打開腹腔，沖洗肝臟，直至肝臟變?yōu)榘咨謩e取大小略相等的24份，取24個(gè)規(guī)格相同潔凈的燒杯隨機(jī)分為A、B、C、D 4個(gè)組，A、B、C、D組的6個(gè)燒杯隨機(jī)編號(hào)，每個(gè)燒杯放一塊肝臟。對(duì)應(yīng)的編號(hào)注入對(duì)應(yīng)組別的保存液。蓋上小木板，180 d后觀察標(biāo)本的色澤、硬度、溶液的顏色、透明度、有無霉變、沉淀等指標(biāo)[9]。

液體揮發(fā)率實(shí)驗(yàn)：取24只同規(guī)格的燒杯，隨機(jī)分為4組，將每組燒杯分別倒入50 mL的各組液體，燒杯口上蓋1塊木板，模擬尸庫保存標(biāo)本液體情況，觀察常溫常壓下各組液體揮發(fā)情況。觀察時(shí)間間隔為30 d。揮發(fā)率計(jì)算公式：揮發(fā)率=(各組初始容積-觀察時(shí)間燒杯內(nèi)的容積)/初始容積。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)

皮膚刺激反應(yīng)見圖1，涂藥后3 d，生理鹽水組無紅斑、水腫出現(xiàn)；傳統(tǒng)福爾馬林保存液組有輕度紅斑、輕度水腫出現(xiàn)；混合液組有輕度紅斑，無水腫出現(xiàn)；新型保存液組有中度紅斑，輕度水腫出現(xiàn)。涂藥5 d后，生理鹽水組仍無紅斑、水腫出現(xiàn)；傳統(tǒng)福爾馬林保存液組有中度紅斑、中度水腫出現(xiàn)；混合液組無紅斑、水腫出現(xiàn)；新型保存液組有重度紅斑、重度水腫出現(xiàn)。涂藥7 d后，生理鹽水組無紅斑、水腫出現(xiàn)；傳統(tǒng)福爾馬林保存液組有重度紅斑、輕度水腫出現(xiàn)；混合液組無紅斑、無水腫出現(xiàn)；新型保存液組有嚴(yán)重紅斑、中度水腫出現(xiàn)。各組皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)的刺激性分值見表1,數(shù)據(jù)提示新型保存液的皮膚刺激性明顯高于其他各組(P<0.05)，而混合液組和生理鹽水組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2眼刺激性實(shí)驗(yàn)

不同保存液對(duì)兔眼刺激結(jié)果表明：混合液組兔眼淚液的分泌，上下眼瞼間距，紅腫程度與生理鹽水組最相近，5%甲醛溶液組、新型保存液組兔眼淚液分泌增加，上下眼瞼間距減小，虹膜、鞏膜有明顯水腫、充血(圖2)。

a：生理鹽水組;b：5%甲醛溶液組;c：混合液組;d：新型保存液組

圖1　涂藥5 d后4組的情況

*:與生理鹽水組和混合液組比較，P<0.05；#：與其他組比較，P<0.05

a：生理鹽水組;b：5%甲醛溶液組;c：混合液組;d：新型保存液組

圖2滴眼1 h后4組的情況

2.3肝臟保存效果實(shí)驗(yàn)

180 d后，4組保存液對(duì)肝臟的保存效果見表2。4種保存液主要在標(biāo)本的色澤、硬度、彈性及保存后保存液氣味的效果觀察。其中新型保存液和混合液與5%甲醛溶液相比，新型保存液存放后保存液無氣味；混合液在保存液的顏色和標(biāo)本浸泡后的顏色出現(xiàn)微微發(fā)黃的情況。

2.4各組液體的揮發(fā)率

在觀察180 d內(nèi)，第30、60、90天時(shí)，5%甲醛溶液浸泡組保存液揮發(fā)率明顯高于其他各組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而觀察的第120、150、180天，各組揮發(fā)率差異不明顯(表3)。

表2　4組保存液對(duì)肝臟的保存效果

表3　4組保存液的揮發(fā)率(%)

*:與5%甲醛溶液組比較，P<0.05

3討論

一直以來，含甲醛的保存液被人們廣泛使用，但是甲醛本身是一種毒性物質(zhì)，具有較強(qiáng)的致突變作用[10]。長期接觸可引發(fā)多系統(tǒng)、多臟器的損害，并可造成接觸人群腫瘤的發(fā)病率明顯增加。有研究還表明，甲醛有強(qiáng)烈的致癌和促癌作用[11]。在用甲醛作為保存液的醫(yī)學(xué)院校調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，許多學(xué)生出現(xiàn)眼刺痛、流淚、咽干，并伴有不同程度的呼吸困難、惡心、厭食等癥狀。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)部分學(xué)生伴有失眠、記憶力減退、學(xué)習(xí)興趣下降等癥狀[10-12]。本研究通過皮膚刺激試驗(yàn)測定結(jié)果，可以得出新型保存液的刺激性高于其他各組，而混合液的刺激性與生理鹽水組接近，因此，混合保存液刺激性相對(duì)較小，受刺激后皮膚可很快恢復(fù)。由眼刺激實(shí)驗(yàn)可知，5%甲醛溶液對(duì)眼睛有一定的刺激作用，因其主要成分為甲醛，使家兔眼睛出現(xiàn)水腫和炎癥癥狀，由于它具有傷害人體、污染環(huán)境的缺點(diǎn)[13]，多年來人們一直致力于找到一種替代品。通過本次實(shí)驗(yàn)觀測，我們認(rèn)為：新型保存液較福爾馬林刺激性更強(qiáng)，表現(xiàn)為水腫和炎癥癥狀更明顯，并產(chǎn)生大量分泌物。而混合液組刺激性小，與生理鹽水相似。在肝臟保存效果實(shí)驗(yàn)中，混合液及新型保存液從標(biāo)本色澤、硬度、彈性、保存液顏色、保存液透明度、保存液沉淀情況、保存液的氣味等方面均強(qiáng)于生理鹽水及5%甲醛溶液。5%甲醛溶液組防腐敗、發(fā)霉效果與混合液及新型保存液相當(dāng)，但其他指標(biāo)都較差?；旌弦焊黜?xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于新型保存液和5%甲醛溶液組。隨著觀察時(shí)間的增加，各組液體的蒸發(fā)率也相應(yīng)呈現(xiàn)遞增趨勢，在前90 d，生理鹽水、混合液組、新型保存液組與5%甲醛溶液組液體蒸發(fā)率比較有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，90 d后各組液體揮發(fā)率比較無明顯差異。據(jù)甲醛理化性質(zhì)推測，由于甲醛極易揮發(fā)、所配溶液濃度低等導(dǎo)致隨著時(shí)間推移甲醛揮發(fā)導(dǎo)致5%甲醛溶液濃度逐漸變低，蒸發(fā)率接近甚至小于第1組，這說明在尸體保存的時(shí)候要定時(shí)增加尸池福爾馬林的濃度。教學(xué)標(biāo)本是學(xué)生上實(shí)驗(yàn)課的主要道具，一般存放在實(shí)驗(yàn)室，是實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染的主要來源，所以尸體保存液應(yīng)當(dāng)無味、少污染[14]。而混合液組與新型保存液組蒸發(fā)率相當(dāng)，揮發(fā)性都不大，可以作為保存標(biāo)本的液體。此外，出于對(duì)標(biāo)本美觀的考慮，混合液組應(yīng)是很好的選擇。

綜上所述，混合液不僅毒性小、標(biāo)本保存效果好、相對(duì)于單純用新型保存液還能節(jié)約成本。與其它3種液體相比，更適用于保存標(biāo)本和降低保存液成本。所以，混合保存液是一種低刺激性、低毒的保存液可能取代傳統(tǒng)的5%甲醛保存液，改善實(shí)驗(yàn)教學(xué)環(huán)境，確保師生身體健康。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 張瑾.甲醛毒性的研究進(jìn)展[J].職業(yè)與健康,2006，22(23):2041-2042.

[2] 詹亞護(hù),羅媚,龍大宏.改良標(biāo)本保存液在尸體標(biāo)本中的應(yīng)用[J].解剖學(xué)研究，2008，30(5):398-399.

[3] 張黎聲,楊才弟,胡金弟,等.不同濃度福爾馬林嗅味感知定性試驗(yàn)[J].中國臨床解剖學(xué)雜志，2003,21(3):3-4.

[4] 馮秀娟,李忠生,李冰.皮特芬溶液對(duì)家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)[J].醫(yī)藥研究，2006，19(4):25-27.

[5] 孔福明.香妃夏露的皮膚刺激性試驗(yàn)研究[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào),2006,12(8)：189-191.

[6] 王北嬰,李儀奎.中藥新藥研制開發(fā)技術(shù)與方法[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2001:810.

[7] 王凌菲，胡家慶，李康.海奧免沖洗洗浴液對(duì)家兔皮膚、眼刺激性試驗(yàn)研究[J].海軍醫(yī)學(xué)雜志，2010,31(1)：4-6.

[8] 熊艾君,彭娟,陳安,等.標(biāo)本改良保存液的實(shí)驗(yàn)研究[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000,20(3):7-8.

[9] 徐桂清,李霄凌,王巖.改進(jìn)防腐固定保存液的實(shí)驗(yàn)觀察[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,25(2)：174.

[10] 劉向榮,徐增康.甲醛的危害及其衛(wèi)生檢驗(yàn)方法[J].職業(yè)與健康,2003,19(12):472-491.

[11] 楊玉花，襲著革，晁福寰.甲醛污染與人體健康研究進(jìn)展[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜,2005,23(1):68-71.

[12] 段坤昌,宋智敏,張葆功.解剖學(xué)技術(shù)的創(chuàng)新是提高解剖學(xué)教學(xué)質(zhì)量的重要措施[J].解剖科學(xué)進(jìn)展,1996,2(4):361-362．

[13] 秦毅,何仲義,王效軍,等.用霉敵替換甲醛保存標(biāo)本對(duì)醫(yī)學(xué)生健康影響的調(diào)查[J].中國職業(yè)醫(yī)學(xué),2002,29(1): 30-31.

[14] 董偉家,夏志恒,尚海峰.三種人體解剖標(biāo)本保存液的比較[J].四川解剖學(xué)雜志,2009,17(3)：75-76.

(編輯：周小林)

Irritation of a new specimen preservation solution on the skin,eye of rabbits and its effect for specimens preservation

LIANG XIN-dong1,MA WEN-xia1,ZHANG You1,NIE Zheng2(1.Clinical Medicine Students,Chengdu Medical College,Chengdu Sichuan 610500,China;2.Human Anatomy Laboratory,Chengdu Medical College,Chengdu Sichuan 610500,China)

Abstract:ObjectiveTo conduct the preliminary toxicology tests and evaluate the preservation effect on a new specimen preservation solution in order to provide scientific basis for its application security.MethodsTwenty-four New Zealand white rabbits were randomly divided into the normal saline group, the formalin preservation group,the mixture group,and the new preservation solution group.Recorded the irritation of different solution on the skin,eye of rabbits,the effect of liver sample preservation in different solution,and the evaporation rate of these solution.And to find a set of preservative solution which is more suitable for preservation of specimens and can reduce the cost.ResultsThe new preservation solution is stimulus on rabbit skin and eye,and it is stronger than the formaldehyde group.Compared with the other three groups,the mixture group has the best preservation effect, and the new preservation solution group has a better preservation effect than the formalin preservation solution group.ConclusionThe 1 ∶1 mixture solution of the new preservation solution and formaldehyde is more suitable preservation solution and it can reduce the costs.

Keywords:new preservation solution;skin irritation;eye irritation;preservation effect

[收稿日期]2014-12-28[修回日期] 2015-01-15

[通訊作者]聶政，E-mail:nz360518@163.com

[基金項(xiàng)目]成都醫(yī)學(xué)院2013大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃(CXXS201321)

doi:10.11659/jjssx.07E014001

[中圖分類號(hào)]R979.7

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1672-5042(2015)04-0376-04