種植體周圍炎齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35的表達(dá)及臨床意義

尹光山,王明德

(1.臨朐縣人民醫(yī)院口腔頜面外科,山東 臨朐 262600； 2.濰坊市人民醫(yī)院口腔頜面外科,山東 濰坊 261041)

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種植體周圍炎齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35的表達(dá)及臨床意義

尹光山1※,王明德2

(1.臨朐縣人民醫(yī)院口腔頜面外科,山東 臨朐 262600； 2.濰坊市人民醫(yī)院口腔頜面外科,山東 濰坊 261041)

摘要：目的探討白細(xì)胞介素(IL)2、IL-17、IL-35在種植體周圍炎齦溝液中的表達(dá)及意義。方法選擇2011年1月至2013年12月臨朐縣人民醫(yī)院收治的40例種植體周圍炎患者(A組)為研究對(duì)象。選擇健康種植體患者40例為B組。選擇健康人群50例為健康對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)3組探診深度、齦溝出血指數(shù)(SBI)、受試者齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35水平，并對(duì)齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35水平與性別、年齡、探診深度、SBI進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果A組探診深度、SBI、齦溝液量顯著高于B組和對(duì)照組[(4.49±0.71) mm比(2.59±0.62) mm，(2.54±0.59) mm；(3.45±0.89)比(0.69±0.22)，(0.64±0.27)；(1.96±0.82) μL比(0.89±0.25) μL，(0.69±0.21) μL](P<0.01)；B組和對(duì)照組探診深度、SBI、齦溝液量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。A組IL-17水平高于B組和對(duì)照組[(10.61±1.02) ng/L比(7.58±0.98) ng/L、(5.49±0.91) ng/L](P<0.05)，B組IL-17水平高于對(duì)照組(P<0.05)；A組IL-2、IL-35水平低于B組和對(duì)照組[(3.19±0.49) ng/L比(3.69±0.68) ng/L，(3.91±0.72) ng/L；(62.78±4.29) ng/L比(75.82±4.63) ng/L，(82.49±4.81) ng/L](P<0.01)，B組IL-2、IL-35水平低于對(duì)照組(P<0.05)。IL-17與年齡、探診深度、SBI呈正相關(guān)(r=0.710,0.629,0.749,P<0.05)，IL-2、IL-35與年齡、探診深度、SBI呈負(fù)相關(guān)(r=-0.698，-0.381，-0.761；r=-0.715，-0.387，-0.752，P<0.05)。結(jié)論IL-17在種植體周圍炎患者齦溝液中呈高表達(dá)，IL-2、IL-35在種植體周圍炎患者齦溝液中呈低表達(dá)；齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35的特異性表達(dá)與種植體周圍炎密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：種植體周圍炎；齦溝液；細(xì)胞因子；炎癥反應(yīng)；免疫功能

function

種植體周圍炎是種植體周圍組織的炎癥反應(yīng)，可導(dǎo)致患者支持骨喪失，甚至引起種植體脫落，可嚴(yán)重影響患者的口腔健康[1]，對(duì)該病盡早診治對(duì)病情的控制和改善具有重要意義[2]?？谇谎仔约膊r(shí)患者體內(nèi)細(xì)胞因子可出現(xiàn)異常表達(dá)，表明機(jī)體存在一定的炎癥反應(yīng)和免疫紊亂[3]。本研究通過檢查種植體周圍炎患者齦溝液中白細(xì)胞介素(interleukin,IL)2、IL-17、IL-35的水平，旨在探討IL-2、IL-17、IL-35在種植體周圍炎齦溝液中的表達(dá)及意義。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2011年1月至2013年12月臨朐縣人民醫(yī)院收治的40例種植體周圍炎患者(A組)為研究對(duì)象，符合種植體周圍炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，患者男18例、女22例，年齡20～70歲，平均(39±4)歲；≥60歲組15例，<60歲組25例。選擇同期被本院收治的健康種植體患者40例為B組，男17例、女23例，年齡21～65歲，平均(40±4)歲。選擇同期在本院門診體檢的健康人群50例為健康對(duì)照組，男22例、女28例，年齡19～65歲，平均(37±3)歲。3組在性別、年齡等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究均獲受試者知情并簽署知情同意書。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：符合種植體周圍炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；無全身系統(tǒng)疾?。唤肽陜?nèi)未接受牙周治療、未服用抗生素；無其他原發(fā)腦部器質(zhì)性病變；知情同意[3]。排除標(biāo)準(zhǔn)：有種植體周及牙周組織疾病治療史者；有精神疾病史；有酒精藥物濫用史；近半年內(nèi)服用免疫抑制劑、避孕藥者；孕婦；吸煙者；未完成隨訪者[3]。

1.3研究方法

1.3.1齦溝液的采集將Whatman 3號(hào)濾紙裁成寬2 mm×20 mm大小的紙條，置于干凈容器中備用。采集齦溝液：用無菌干棉球擦干牙面，隔濕，去除較大的菌斑，輕吹牙齦，將制備好的濾紙條插入種植體頰側(cè)近遠(yuǎn)中、舌(腭)側(cè)近遠(yuǎn)中齦溝中，1 min后取出，用游標(biāo)卡尺測(cè)量并記錄浸濕長(zhǎng)度，剪去干燥部分，置于裝有0.9%NaCl注射液的Eppendorf管中，每管含1個(gè)樣本的4條濾紙，離心半徑8 cm，10 000 r/min，4 ℃離心10 min，取上清液，-70 ℃冷凍保存。

1.3.2齦溝液定量將健康者血清0.1~ 2.0 μL分為20組(以0.01 μL遞增)，用 5 μL進(jìn)樣器取各組標(biāo)準(zhǔn)量血清滴于相同的Whatman 3號(hào)濾紙條，每組3條濾紙，游標(biāo)卡尺測(cè)量濾紙浸濕長(zhǎng)度。根據(jù)健康者血清量與濾紙浸濕面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算齦溝液量。

1.3.3標(biāo)本檢測(cè)室溫下解凍標(biāo)本20 min，離心半徑8 cm，1000 r/min離心10 min，取上清液，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)所有受試者齦溝液中IL-17、IL-35水平，采用CBA法檢測(cè)齦溝液中IL-2質(zhì)量濃度，試劑盒購自于上海華大科技有限公司。嚴(yán)格按照說明書操作[1]。

1.4觀察指標(biāo)統(tǒng)計(jì)3組探診深度、齦溝出血指數(shù)(sulcus bleeding inde，SBI)、受試者齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35質(zhì)量濃度、性別、年齡、探診深度、SBI。

2結(jié)果

2.1三組患者探診深度、齦溝液、SBI比較三組間探診深度、齦溝液、SBI差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；A組探診深度、齦溝液、SBI均高于B組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；但B組和對(duì)照組探診深度、齦溝液、SBI比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　三組探診深度、齦溝液、SBI比較　　(±s)

SBI：齦溝出血指數(shù)； A組：種植體周圍炎患者；B組：健康種植體患者；對(duì)照組：健康人群；與B組比較，aP<0.01；與對(duì)照組比較，bP<0.01

2.2三組患者齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35水平比較三組間IL-2、IL-17、IL-35水平差異比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組IL-17水平高于B組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，B組IL-17水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組IL-2、IL-35水平低于B組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，B組IL-2、IL-35水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3不同性別種植體周圍炎患者齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35水平比較不同性別種植體周圍炎患者齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表2　三組齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35水平比較 　(±s，ng/L)

A組：種植體周圍炎患者；B組：健康種植體患者；對(duì)照組：健康人群； 與B組比較，aP<0.05；與對(duì)照組比較，bP<0.05；IL：白細(xì)胞介素

表3　不同性別種植體周圍炎患者齦溝液中IL-2、IL-17、

IL：白細(xì)胞介素

2.4不同年齡段種植體周圍炎患者齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35 水平比較不同年齡段種植體周圍炎患者齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，≥60歲組IL-17 水平高于<60歲組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；≥60歲組IL-2、IL-35水平低于<60歲組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表4。

表4　不同年齡段種植體周圍炎患者齦溝液中IL-2、

IL：白細(xì)胞介素

2.5齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35與性別、年齡、探診深度、SBI的相關(guān)性分析 IL-17與年齡、探診深度、SBI呈正相關(guān)(P<0.05)，IL-2、IL-35與年齡、探診深度、SBI呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表5。

表5　齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35與性別、年齡、

IL：白細(xì)胞介素；SBI：齦溝出血指數(shù)

3討論

IL-17為目前研究較多的細(xì)胞因子之一，在炎癥反應(yīng)過程中扮演著重要角色[4]。IL-17具有很強(qiáng)的生物學(xué)作用，在促進(jìn)炎癥的發(fā)生和進(jìn)展中起重要作用[5]。IL-17作為促進(jìn)炎癥進(jìn)展的重要細(xì)胞因子，與口腔炎性疾病的發(fā)病密切相關(guān)，在口腔炎性疾病的發(fā)病過程中亦起重要作用[5]。本研究檢測(cè)種植體周圍炎患者齦溝液中IL-17水平，結(jié)果顯示，種植體周圍炎患者齦溝液中IL-17的檢測(cè)水平明顯高于健康種植體者和健康人群，與Costa等[4]的文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。健康人群齦溝液中無明顯炎癥反應(yīng)，因此齦溝液中IL-17可正常表達(dá)；本研究中健康種植體患者IL-17檢測(cè)水平高于健康人群，表明其亦存在一定的炎癥反應(yīng)，但相較種植體周圍炎患者，健康種植體患者炎癥反應(yīng)較弱，因此其齦溝液中IL-17質(zhì)量濃度檢測(cè)結(jié)果介于健康人群與種植體周圍炎患者之間[4]，表明IL-17與種植體周圍炎的發(fā)生密切相關(guān)。

IL-2是一種T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，具有免疫調(diào)節(jié)功能，主要由CD4+T細(xì)胞分泌，IL-2在免疫調(diào)節(jié)過程中可通過誘導(dǎo)B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的表達(dá)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[6-7]。本研究結(jié)果顯示，種植體周圍炎患者齦溝液中IL-2水平低于健康種植體患者和健康者，表明IL-2參與了種植體周圍炎的發(fā)病。本研究中種植體周圍炎患者齦溝液中IL-2呈現(xiàn)低表達(dá)，可能與下述因素有關(guān)：種植體周圍炎患者Th淋巴細(xì)胞功能受損，IL-2表達(dá)受到抑制，免疫調(diào)節(jié)功能減弱，機(jī)體免疫水平下降[7]，因此IL-2在種植體周圍炎患者齦溝液中其表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

IL-35為IL家族新成員之一，自2007年被證實(shí)在免疫、炎癥性疾病病情的調(diào)控中起重要作用后，一直為學(xué)術(shù)界研究熱點(diǎn)[8]。IL-35具有很強(qiáng)的生物學(xué)作用，在抑制炎癥的發(fā)生和進(jìn)展中具有重要作用[8]。本研究檢測(cè)種植體周圍炎患者齦溝液 IL-35水平，結(jié)果顯示，種植體周圍炎患者齦溝液中IL-35 檢測(cè)水平明顯低于健康種植體患者和健康人群。健康人群和健康種植體患者齦溝液中無炎癥反應(yīng)或炎癥水平較弱，因此齦溝液中IL-35可正常表達(dá)或表達(dá)水平介于健康人群與種植體周圍炎之間；而種植體周圍炎患者存在免疫紊亂和炎癥反應(yīng)，機(jī)體免疫功能受損，因此IL-35可出現(xiàn)低表達(dá)[9-14]；表明IL-35與種植體周圍炎的發(fā)生同樣密切相關(guān)。

本研究中不同性別的種植體周圍炎患者之間齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35的檢測(cè)水平差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但不同年齡段的種植體周圍炎患者齦溝液中上述指標(biāo)檢測(cè)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，相關(guān)性結(jié)果表明種植體周圍炎中IL-2、IL-17、IL-35等指標(biāo)的表達(dá)與性別無相關(guān)性，但與年齡有關(guān)。60歲以上的種植體周圍炎患者齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35的表達(dá)存在異常，分析可能與下述因素有關(guān)：老年人群本身免疫功能已經(jīng)開始減退，相較60歲以下人群，發(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí)老年患者免疫紊亂和炎癥程度較重，因此齦溝液中上述指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果存在明顯異常[15]。本研究相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IL-17與探診深度、SBI呈正相關(guān)，IL-2、IL-35與探診深度、SBI呈負(fù)相關(guān)，表明上述指標(biāo)之間存在較為復(fù)雜的相關(guān)性，在種植體周圍炎中IL-2、IL-17、IL-35等指標(biāo)可能并不單獨(dú)起作用[15]。種植體周圍炎患者齦溝液中IL-17檢測(cè)水平越高，IL-2、IL-35檢測(cè)水平越低，即IL-17呈高表達(dá)，IL-2、IL-35低表達(dá)，表明機(jī)體所產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)越劇烈，免疫紊亂越嚴(yán)重，表現(xiàn)為種植體周的探診深度和SBI越顯著[15]。

國內(nèi)有關(guān)齦溝液中IL-2、IL-35的表達(dá)與種植體周圍炎之間的研究較少。IL-17在種植體周圍炎患者齦溝液中呈高表達(dá)， IL-2、IL-35在種植體周圍炎患者齦溝液中呈低表達(dá)；齦溝液中IL-2、IL-17、IL-35的特異性表達(dá)與種植體周圍炎密切相關(guān)。

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IL-2,IL-17,IL-35 Expression in Peri-implant Gingival Crevicular Fluid and the Clinical SignificanceYINGuang-shan1,WANGMing-de2. (1.DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery,LinquPeople′sHospital,Linqu262600,China; 2.DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery,WeifangPeople′sHospital,Weifang261041,China)

Abstract:ObjectiveTo study interleukin(IL) 2,IL-17,IL-35 expression in peri-implantitis gingival crevicular fluid (GCF) and the clinical significance.MethodsA total of 40 patients with implant surrounding inflammation (group A) from Linqu People′s Hospital were chosen as the research objects between Jan.2011 and Dec.2013,while another 40 patients with healthy implant were chosen as group B,and 50 healthy people were chosen as healthy control group.The probing depth(PD),gingival sulcus bleeding index (SBI),the IL-2,IL-17,IL-35 mass concentration in the GCF of the three groups were recorded,and the correlation between IL-2,IL-17 in GCF,IL-35 mass concentration with gender,age,PD and SBI was analyzed.ResultsThe PD,SBI,GCF of group A were significantly higher than group B and control group[(4.49±0.71) mm vs (2.59±0.62) mm，(2.54±0.59) mm；(3.45±0.89) vs (0.69±0.22)，(0.64±0.27)；(1.96±0.82) μL vs (0.89±0.25) μL，(0.69±0.21) μL](P<0.01);there were no statistically significant differences between group B and control group (P>0.05).IL-7 of group A was higher than group B[(10.61±1.02) ng/L vs (7.58±0.98) ng/L,(5.49±0.91) ng/L](P<0.05),group B higher than the control group(P<0.05); IL-2,IL-35 level of group A were lower than group B and control group[(3.19±0.49) ng/L vs (3.69±0.68) ng/L，(3.91±0.72) ng/L；(62.78±4.29) ng/L vs (75.82±4.63) ng/L，(82.49±4.81) ng/L](P<0.01),group B lower than the control group (P<0.05).IL-17 was positively correlated with age,PD and SBI(r=0.710,0.629,0.749,P<0.05),and IL-2,IL-35 were negatively correlated with the age,DP,SBI (r=-0.698，-0.381，-0.761；r=-0.715，-0.387，-0.752,P<0.05).ConclusionIL-17 shows high expression in GCF in peri-implantitis,IL-2,IL-35 show low expression in GCF in peri-implantitis;the specific expressions of IL-35,IL-2,IL-17 in GCF are closely related to peri-implantitis.

Key words:Peri-implantitis; Gingival crevicular fluid; Cytokines; Inflammatory reaction; Immune

收稿日期：2015-01-04修回日期：2015-07-28編輯：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.21.054

中圖分類號(hào)：R780.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)21-3993-03