枸地氯雷他定注射液對(duì)大鼠過(guò)敏性鼻炎的影響

揭 瓊，袁 馨，陳美靈，吳玉林

中國(guó)藥科大學(xué)生理教研室，南京 210009

枸地氯雷他定注射液對(duì)大鼠過(guò)敏性鼻炎的影響

揭 瓊，袁 馨，陳美靈，吳玉林*

中國(guó)藥科大學(xué)生理教研室，南京 210009

目的：研究枸地氯雷他定注射液對(duì)卵白蛋白（OVA）致大鼠過(guò)敏性鼻炎的鼻部癥狀及鼻腔灌洗液PGD2、LTC4含量和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的影響。方法：采用OVA建立大鼠過(guò)敏性鼻炎模型，將造模成功的SD雄性大鼠隨機(jī)分成5組：模型組、枸地氯雷他定注射液（簡(jiǎn)稱(chēng)枸地）低、中、高劑量組，陽(yáng)性藥馬來(lái)酸氯苯那敏注射液（撲爾敏）組。另隨機(jī)取正常大鼠設(shè)正常組。造模第22天，模型組和正常組靜注生理鹽水；枸地低、中、高劑量組分別靜注0.3、0.6、1.2 mg·kg-1；撲爾敏組靜注0.6 mg·kg-1。各組每天一次用藥，連續(xù)5天，同時(shí)隔天以O(shè)VA滴鼻以維持過(guò)敏狀態(tài)。于最后一次給藥半小時(shí)后OVA滴鼻激發(fā)觀察30 min內(nèi)大鼠抓鼻、噴嚏及流涕情況，采取積分法記錄上述癥狀程度；2 h后收集大鼠鼻腔灌洗液（NLF）測(cè)定PGD2、LTC4含量及炎癥細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果與結(jié)論：枸地組可顯著改善過(guò)敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀，且能減少NLF中炎癥介質(zhì)PGD2、LTC4含量及炎癥細(xì)胞數(shù)量，改善過(guò)敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀，同時(shí)也能抑制白細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕晚期慢性炎癥反應(yīng)。

大鼠過(guò)敏性鼻炎；枸地氯雷他定注射液；鼻腔灌洗液；炎癥介質(zhì)；炎癥細(xì)胞

近年來(lái)，過(guò)敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）的發(fā)病人數(shù)急劇上升。輕癥患者可口服第二代或第三代H1抗組胺藥物如氯雷他定、阿伐斯汀或地氯雷他定等；急重癥或不宜口服的患者可使用馬來(lái)酸氯苯那敏注射液、鹽酸異丙嗪注射液或鹽酸苯海拉明等注射液，但以上3種注射液均屬于第一代抗組胺藥物，具有明顯的中樞和膽堿能神經(jīng)抑制作用，不良反應(yīng)較多[1]。枸地氯雷他定是新一代非鎮(zhèn)靜性長(zhǎng)效組胺拮抗劑，不良反應(yīng)少，由第三代抗組胺藥地氯雷他定改造而成，用于快速緩解過(guò)敏性鼻炎的相關(guān)癥狀，如鼻癢、打噴嚏、流涕和咳嗽等，該藥現(xiàn)有片劑和膠囊劑?，F(xiàn)探討新開(kāi)發(fā)的枸地氯雷他定注射液對(duì)過(guò)敏性鼻炎大鼠的癥狀改善和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的影響。

1 材 料

1.1 藥物

枸地氯雷他定注射液（簡(jiǎn)稱(chēng)枸地，合肥醫(yī)工醫(yī)藥有限公司，批號(hào)201205，規(guī)格50 mL∶2.5 g）；馬來(lái)酸氯苯那敏注射液（撲爾敏，上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)1212018）。

1.2 儀器與試劑

JA3003電子天平（上海精科天平儀器廠）；Infi-nite M200 PRO全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Tecan公司）。

卵白蛋白（Ovalbumin，簡(jiǎn)稱(chēng)OVA，Sigma公司，批號(hào)SLBD2312V）；Al（OH）3凝膠（Thermo公司，批號(hào)OG189802）；大鼠前列腺素D2（PGD2）ELISA試劑盒（批號(hào)20140706）、大鼠白三烯C4（LTC4）ELISA試劑盒（批號(hào)20140710）均為上海翼飛生物科技有限公司產(chǎn)品；快速瑞氏-姬姆薩復(fù)合染液（南京建成科技有限公司，批號(hào)20140509）；水合氯醛（分析純）。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠80只，體重150～180 g，由上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（滬）2013-0006。

2 方 法

2.1 大鼠過(guò)敏性鼻炎造模方法

2.1.1 全身致敏及局部抗原激發(fā) SD雄性大鼠65只，腹腔注射1 mL含有0.6 mg OVA和10 mg Al（OH）3凝膠的生理鹽水進(jìn)行全身致敏，隔天重復(fù)操作，共行7次。第15天進(jìn)行滴鼻，每側(cè)鼻孔各滴入50 μL的2%OVA進(jìn)行局部抗原攻擊，連續(xù)7 d[2]。

2.1.2 癥狀積分評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) 于最后一次滴鼻激發(fā)后觀察30 min內(nèi)大鼠抓鼻、噴嚏及流涕情況，采取積分法記錄上述癥狀程度，評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)為：①抓鼻：1分，1～5次；2分，6～15次；3分，＞15次。②噴嚏：1分，1～3次；2分，4～10次；3分，＞10次。③流涕：1分，流涕至鼻前孔；2分，流涕出鼻前孔；3分，涕流滿(mǎn)面。對(duì)上述癥狀評(píng)分累積超過(guò)5分的表示造模成功[3]。

2.2 分組給藥

取造模成功的大鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為：①模型組：等體積生理鹽水；②枸地低、中、高劑量組：0．3、0．6、1．2 mg·kg-1；③撲爾敏組：0．6 mg·kg-1；④正常對(duì)照組（隨機(jī)取10只同一批正常大鼠）：等體積生理鹽水。造模第22天各組按劑量靜注給藥，每天一次，連續(xù)5 d，同時(shí)隔天以O(shè)VA滴鼻以維持過(guò)敏狀態(tài)。于最后一次給藥0．5 h后OVA滴鼻激發(fā)觀察30 min內(nèi)大鼠抓鼻、噴嚏及流涕情況并進(jìn)行評(píng)分。

激發(fā)2 h后，用3%水合氯醛麻醉大鼠并固定，切開(kāi)頸前皮下組織，暴露頸部氣管，在第3～4氣管環(huán)之間行氣管切開(kāi)，自氣管切開(kāi)處分別向上、向下插入直徑約2 mm的頭皮針?biāo)芰掀す芨饕桓?，在?氣管環(huán)和第5～6氣管環(huán)處分別細(xì)線結(jié)扎固定皮管，上方皮管供大鼠鼻腔灌洗用，下方皮管供大鼠呼吸用。用BT100-2J恒流泵經(jīng)上方皮管行鼻腔灌洗（灌洗液為HBSS緩沖液：8 g·L-1NaCl，0．4 g·L-1KCl，1 g·L-1葡萄糖，60 mg·L-1KH2PO4，47．5 mg·L-1Na2HPO4，調(diào)pH至7．2），恒流泵速度為0．25 mL· min-1，于大鼠鼻孔處收集鼻腔灌洗液（NLF）1 mL[4]。

2.3 指標(biāo)測(cè)定

2.3.1 鼻部癥狀 于最后一次OVA滴鼻激發(fā)后觀察30 min內(nèi)大鼠抓鼻、噴嚏及流涕情況，并對(duì)上述癥狀進(jìn)行評(píng)分，與給藥前的癥狀積分比較。

2.3.2 NLF中PGD2和LTC4含量測(cè)定 ELISA法測(cè)定NLF中PGD2和LTC4的含量。

2.3.3 NLF中炎癥細(xì)胞數(shù)量 NLF處理后采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)算白細(xì)胞總數(shù)；另取部分懸浮液采用Wright’s-Giemsa法染色進(jìn)行白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析LSD檢驗(yàn)法，P＜0．05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 枸地注射液對(duì)過(guò)敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀的影響

如表1所示，造模后，各組造模大鼠鼻部癥狀均加重，與正常組比較具有極顯著性差異 （##P＜0．01）。經(jīng)枸地治療后，各治療組大鼠鼻部癥狀均減輕，枸地氯雷他定注射液組與模型組比較均具有極顯著性差異（**P＜0．01）。

表1 枸地氯雷他定注射液對(duì)過(guò)敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀的影響（±s，n=10）

表1 枸地氯雷他定注射液對(duì)過(guò)敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，#P＜0．05，##P＜0．01；與模型組比較，*P＜0．05，**P＜0．01。

組別劑量/mg·kg-1給藥前積分給藥后積分正常組-4．1±0．6 4．0±0．3模型組-7．9±0．7##7．6±0．6##枸地 高1．2 7．9±0．7##4．3±0．5**枸地 中0．6 7．7±0．8##4．6±0．6**枸地 低0．3 7．7±0．6##4．9±0．6**撲爾敏0．6 8．0±0．5##4．8±0．7**

3.2 枸地注射液對(duì)NLF中PGD2、LTC4含量的影響

如表2所示，模型組NLF中PGD2和LTC4含量較正常組顯著性增加（#P＜0．05）。與模型組相比，枸地組NLF中PGD2和LTC4含量均顯著性減少。

3.3 枸地注射液對(duì)NLF中炎癥細(xì)胞的影響

如表2所示，模型組NLF中白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)較正常組均極顯著性增加（##P＜0．01）。各治療組NLF中嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)較模型組均顯著減少。

4 討 論

AR是機(jī)體對(duì)某些過(guò)敏原敏感性增高且發(fā)生在鼻黏膜的一種I型過(guò)敏反應(yīng)性疾病，其發(fā)病機(jī)制[5]為過(guò)敏原刺激機(jī)體產(chǎn)生IgE，進(jìn)而與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的FCεRI受體結(jié)合使機(jī)體致敏，當(dāng)過(guò)敏原再次進(jìn)入機(jī)體后，肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)（組胺、PGD2和LTC4等）導(dǎo)致鼻黏膜血管反應(yīng)、鼻黏膜分泌過(guò)多及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等一系列的病理生理反應(yīng)，使AR患者出現(xiàn)反復(fù)打噴嚏、鼻癢、流涕和鼻塞等過(guò)敏反應(yīng)癥狀。研究表明[6]過(guò)敏反應(yīng)有兩個(gè)明顯的階段：早期反應(yīng)（EPR）和晚期反應(yīng)（LPR）。早期反應(yīng)在機(jī)體再次接觸過(guò)敏原后數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)，肥大細(xì)胞釋放的炎性介質(zhì)包括組胺、類(lèi)胰蛋白酶、PGD2和LTC4等導(dǎo)致AR患者出現(xiàn)鼻癢、噴嚏和流涕等癥狀。晚期反應(yīng)在接觸過(guò)敏原后2～8 h癥狀與早期反應(yīng)類(lèi)似，但相比更強(qiáng)烈、更持久，病理生理反應(yīng)主要包括大量細(xì)胞因子釋放、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn) （嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等），組織炎癥加劇，導(dǎo)致AR患者持久鼻塞、精神萎靡和嗜睡等癥狀[7]。

本試驗(yàn)研究表明，枸地氯雷他定注射液組和陽(yáng)性藥撲爾敏組均能顯著性改善過(guò)敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀（鼻癢、噴嚏和流涕），且枸地組優(yōu)于陽(yáng)性藥撲爾敏組。在測(cè)定過(guò)敏性鼻炎大鼠鼻腔灌洗液PGD2、LTC4含量及炎癥細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，枸地組NLF中PGD2和LTC4含量也均顯著性減少，嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量也均顯著性降低，故本品不僅可減少早期炎性介質(zhì)PGD2和LTC4的釋放，而且也能減弱晚期階段炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。

表2 枸地氯雷他定注射液對(duì)NLF中PGD2、LTC4含量及炎癥細(xì)胞的影響（±s，n=10）

表2 枸地氯雷他定注射液對(duì)NLF中PGD2、LTC4含量及炎癥細(xì)胞的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，#P＜0．05，##P＜0．01；與模型組比較，*P＜0．05，**P＜0．01。

組別劑量/ mg·kg-1PGD2/ ng·L-1LTC4/ ng·L-1白細(xì)胞數(shù)總數(shù)/ ×106mL-1嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)/ ×106mL-1淋巴細(xì)胞數(shù)/ ×106mL-1中性粒細(xì)胞數(shù)/ ×106mL-1正常組---127．21±9．44 7．20±0．65 4．3±0．25 1．7±0．11 0．9±0．06 0．6±0．07模型組---488．64±15．85#66．32±1．49#47．5±1．29##25．5±0．97##12．1±0．55##9．5±0．39##枸地 高1．2 167．69±8．61#10．09±0．81*11．9±0．82**5．0±0．34**2．4±0．22**2．0±0．25**枸地 中0．6 208．03±11．97#15．73±0．75*17．2±1．25**7．8±0．65**3．7±0．32**3．3±0．23**枸地 低0．3 255．08±9．08#19．57±0．76*29．8±1．50**15．0±0．97**6．6±0．42**6．5±0．48**撲爾敏0．6 257．08±12．87#18．71±1．06*17．8±1．07**8．2±0．73**3．8±0．30**3．5±0．43**

綜上所述，可初步得出結(jié)論：枸地氯雷他定注射液可改善過(guò)敏性鼻炎大鼠早期癥狀；同時(shí)也能通過(guò)抑制炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、減輕晚期的慢性炎癥反應(yīng)。

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Effect of Desloratadine Citrate Disodium Injections on Ovalbumin-induced Allergic Rhinitis in Rats

JIE Qiong,YUAN Xin,CHEN Mei-lin,WU Yu-lin*
Department of Physiology,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009

Objective:To study the effect of desloratadine citrate disodium injections (DLC)on ovalbumin-induced allergic rhinitis in rats,including the rhinitis symptoms,PGD2and LTC4levels and inflammatory cell infiltration in nasal lavage fluid (NLF)．Methods:Ovalbumin-induced allergic rhinitis male SD rats were randomly divided in five groups:model group,DLC low,medium and high dose groups, and chlorphenamine maleate injectlon(CHM)group as positive group．In addition,the normal rats were also recorded．From the 22nd day of being modeled,rats of the model and normal groups were given iv saline, the DLC low,medium and high dose groups were given DLC at 0．3,0．6 and 1．2 mg·kg-1,CHM group were given CHM at 0．6 mg·kg-1,all the iv treatments were once a day for five days．Rats were topically sensitized by instilling ovalbumin solution into the bilateral nasal cavities on alternate days．Symptoms of rhinitis were observed continuously for 30 min at the last time for administration and topically sensitization, taking the scoring method to record the symptoms of rhinitis．Two hours after the intranasal challenge,NLF was collected,PGD2and LTC4levels and inflammatory cellular infiltration were evaluated,respectively．Results and Conclusion:DLC significantly attenuated ovalbumin-induced rhinitis symptoms and caused a significant reduction in PGD2and LTC4levels and inflammatory cellular infiltration．

Allergic rhinitis in rats;Desloratadine citrate disodium injection(DLC);Nasal lavage fluid; Inflammatory mediators;Inflammatory cells

R965.1

A

1673-7806（2015）03-235-03

揭瓊，女，碩士 E-mail:jieqiongcpu312@163.com

*通訊作者吳玉林，男，副教授 E-mail:wylcpu625@163.com

2014-12-04

2015-01-08