調節(jié)性T細胞檢測在漿細胞性乳腺炎患者篩查中的臨床價值

高雙英,吳　靜

(1.武漢科技大學校醫(yī)院檢驗科,武漢 430081; 2.華潤武鋼總醫(yī)院檢驗科,武漢 430081)

調節(jié)性T細胞檢測在漿細胞性乳腺炎患者篩查中的臨床價值

高雙英1,吳靜2※

(1.武漢科技大學校醫(yī)院檢驗科,武漢 430081; 2.華潤武鋼總醫(yī)院檢驗科,武漢 430081)

漿細胞性乳腺炎(plasm cell mastitis,PCM)是指乳腺組織發(fā)生炎性病變[1]，其中炎性滲出以漿細胞為主；好發(fā)于非哺乳期或妊娠期，大多伴有乳頭內陷、乳暈部有乳房腫塊。該病易反復發(fā)作，并可能形成瘺管。關于PCM發(fā)病機制目前尚不完全清楚，大量研究顯示[2-3]，PCM病灶部位存在有大量淋巴細胞、漿細胞以及吞噬細胞等，提示機體免疫系統(tǒng)在本病的發(fā)病中起重要作用。本研究通過對PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-調節(jié)性T細胞變化水平，探討其在PCM診斷中的作用，以期為臨床治療提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2008年5月至2013年5月華潤武鋼總醫(yī)院收治的62例PCM患者(PCM組)，年齡23～62歲，平均(38±6)歲；患者均為非哺乳期的經產婦，并經細胞學或切片檢查確診為PCM。根據(jù)病程將PCM分為3期。①急性期18例，臨床表現(xiàn)：病程約2周，乳房腫塊伴有疼痛，腫脹、皮膚發(fā)紅等急性乳腺炎的表現(xiàn)，但全身反應輕，無明顯發(fā)熱。②亞急性期31例，患者臨床表現(xiàn)為：病程3周，炎樣癥狀消失，出現(xiàn)乳房腫塊，并與皮膚粘連。③慢性期13例，臨床表現(xiàn)：經過反復發(fā)作后，乳房腫塊可縮小成硬結狀，出現(xiàn)1個或數(shù)個邊界不清的硬結。選擇本院收治的30例乳腺癌患者作為乳腺癌組，年齡24～67歲，平均(36±7)歲。另選擇同期在本院體檢的30例健康女性作為健康對照組，年齡18～73歲，平均(38±9)歲；3組研究對象在年齡等一般資料上差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑FITC標記的鼠抗人CD4單克隆抗體、PE標記的鼠抗人CD25單克隆抗體、PE標記的鼠抗人CD127單克隆抗體均購自美國Becton Dickinson公司；調節(jié)性T細胞標志性分子FoxP3檢測試劑盒由美國 eBioscience 公司提供。儀器為BD FACSCalibur流式細胞儀；溶血劑購自杭州康樹生物技術有限公司。

1.2.2方法患者均于清晨空腹肘靜脈取血3 mL，置于抗凝管中，立即送檢。檢測時取100 μL全血，加入10 μL CD4抗體、10 μL CD25抗體、2 μL CD127抗體，室溫避光混勻 15 min，再加入2 mL溶血劑，37 ℃溶解10 min后立即上機檢測；圈定淋巴細胞為門內細胞，要求每次獲取10 000以上門內細胞，并將數(shù)據(jù)保存。FoxP3檢測按照試劑盒說明書進行。采用酶偶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血漿轉化生長因子β(transforming growth factor β,TGF-β)水平，相關試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供，按照試劑盒說明書進行。

1.2.3血清指標檢測對3組血清學指標進行檢測，包括紅細胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反應蛋白、補體C3、C4。免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)、血小板計數(shù)以及血紅蛋白；其中C反應蛋白、C3、C4、Ig采用散射免疫比濁法檢測，ESR采用魏氏法檢測，血小板計數(shù)、血紅蛋白采用血細胞分析儀法檢測。

2結果

2.1各組外周血CD4+CD25+CD127-T細胞、CD4+CD25+FoxP3+T細胞百分率、TGF-β水平比較與對照組比較，PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細胞、CD4+CD25+FoxP3+T細胞百分率、TGF-β顯著降低(P<0.05)；而乳腺癌組患者各指標顯著高于對照組(P<0.05)，其中PCM組中急性期CD4+CD25+FoxP3+T細胞百分率、TGF-β顯著低于亞急性期和慢性期，亞急性期低于慢性期(P<0.05)，見表1，2。

組別例數(shù)CD4+CD25+CD127-T細胞(%)CD4+CD25+FoxP3+T細胞(%)TGF-β(mg/L)健康對照組304.0±1.84.4±1.487±16乳腺癌組305.8±2.2a5.5±1.0a385±37aPCM組3.0±0.5ab2.4±1.1ab53±19abF12.6156.798103.437P0.0000.0020.000

PCM：漿細胞性乳腺炎；TGF-β：轉化生長因子β；a與對照組比較，P<0.05；b與乳腺癌組比較，P<0.05

組別例數(shù)CD4+CD25+CD127-T細胞(%)CD4+CD25+FoxP3+T細胞(%)TGF-β(mg/L)急性期182.8±1.21.6±0.735±11亞急性期313.1±1.2a2.4±1.0a56±14a慢性期133.5±1.2ab3.3±1.3ab70±22abF0.6394.71420.700P0.5310.0130.000

PCM：漿細胞性乳腺炎；TGF-β：轉化生長因子β；a與急性期比較，P<0.05；b與亞急性期比較，P<0.05

2.2CD4+CD25+CD127-T細胞與CD4+CD25+FoxP3+T細胞、TGF-β相關性分析CD4+CD25+CD127-T細胞與CD4+CD25+FoxP3+T細胞、TGF-β呈正相關(r=0.589，P=0.021；r=0.724，P=0.000)。

2.3CD4+CD25+CD127-T細胞與血清學指標相關性分析 PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細胞與C反應蛋白、ESR、IgA、IgG、IgM、C3、C4、血小板計數(shù)、血紅蛋白無明顯相關性(r=-0.251，P=0.384；r=0.024，P=0.954；r=-0.181，0.537；r=0.095，P=0.743；r=0.453，P=0.094；r=-0.149，P=0.669；r=-0.581，P=0.074；r=0.095，P=0.757；r=-0.339，P=0.243)。

3討論

PCM是一種炎癥樣的乳腺良性疾病，該病主要表現(xiàn)為乳房膿腫、乳頭凹陷、非周期性乳房疼痛等；該病占乳房良性病變的4%～8%，且發(fā)病率呈上升趨勢[4]。PCM臨床表現(xiàn)多樣，因此命名也各異，如乳管導管擴張癥、導管炎等。有學者提出可以按照病程分為急性期、亞急性期和慢性期；分期不同，炎癥反應也各不相同[5]。大量研究證實PCM伴有大量漿細胞、淋巴細胞浸潤，其中漿細胞浸潤最為明顯。隆仙琴等[6]將PCM患者術后病灶組織的勻漿接種于小鼠，獲得PCM小鼠模型，這提示PCM是一種自身免疫系統(tǒng)疾病。

調節(jié)性T細胞主要在CD4+CD25+胸腺中分化、成熟，并在CD4+T細胞選擇過程中得到CD4+CD25+FoxP3+表型[7]。曾美等[8]研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+調節(jié)性T細胞主要功能是維持機體正常的免疫反應，如自身耐受、移植排斥、急性感染和超敏反應，預防機體內自身免疫性疾病的發(fā)生。施宇衡等[9]研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+調節(jié)性T細胞占人外周血CD4+T細胞的7.8%，在維持CD4+CD25+調節(jié)性T細胞的發(fā)育和功能有重要作用。最近國外一項研究發(fā)現(xiàn)[10]，人類CD127表達與T細胞活化無明顯關系，作為調節(jié)性T細胞一個重要標志物，CD127常用于區(qū)別CD25和調節(jié)性T細胞，且其活性不依賴于CD25的表達，這說明CD127表達可以評價調節(jié)性T細胞的功能和數(shù)量，有利于分析自身免疫性疾病的異常免疫調節(jié)。

目前臨床上對PCM診斷方法主要是超聲或CT，但是由于PCM臨床表現(xiàn)無特異性，常常造成誤診；據(jù)杜莉等[11]報道，在收治的1039例PCM患者中，約有30%被誤診為乳腺癌；因此篩查PCM時，準確排查乳腺癌非常重要。研究顯示[12]，CD4+CD25+調節(jié)性T細胞主要參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，因此乳腺癌患者CD4+CD25+調節(jié)性T細胞數(shù)量會顯著升高。在本研究中我們采用流式細胞儀對不同分期的PCM患者、乳腺癌患者以及健康人群外周血CD4+CD25+CD127-調節(jié)性T細胞進行檢查，結果顯示，PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細胞、CD4+CD25+FoxP3+T細胞百分率、TGF-β顯著低于對照組，其中急性期降低最為明顯(P<0.05)；而乳腺癌組患者各指標則顯著高于對照組；這提示我們通過檢測外周血CD4+CD25+CD127-T細胞百分率可以有效鑒別PCM和乳腺癌，這為提高臨床診斷率提供了一個理想的指標。相關性分析顯示，CD4+CD25+CD127-T細胞與CD4+CD25+FoxP3+T細胞呈正相關，這提示CD127代替FoxP3存在理論上的可能；但這仍需要進一步功能試驗證實。本研究對PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細胞與血清學指標相關性進行分析，結果顯示，CD4+CD25+CD127-T細胞與C反應蛋白、ESR、IgA、IgG、IgM、C3、C4、血小板計數(shù)、血紅蛋白無明顯相關性；這與魏明等[13]報道不一致，我們分析可能與本研究病例數(shù)較少有關。

綜上所述，CD4+CD25+CD127-T細胞PCM發(fā)病中起重要作用，可以作為篩查PCM的輔助方法；另外CD4+CD25+CD127-T細胞檢測還有助于診斷乳腺癌，因此有著顯著的臨床價值。

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摘要：目的探討調節(jié)性T細胞檢測在漿細胞性乳腺炎(PCM)診斷中的臨床價值。方法將2008年5月至2013年5月華潤武鋼總醫(yī)院收治的62例PCM患者按照病程分為急性期(18例)、亞急性期(31例)和慢性期(13例)；另選擇30例乳腺癌患者和30例健康女性作為乳腺癌組和健康對照組；比較各組外周血CD4+CD25+CD127-調節(jié)性T細胞水平變化。結果健康對照組、乳腺癌組、PCM組外周血CD4+CD25+CD127-T細胞、CD4+CD25+FoxP3+T細胞百分率、轉化生長因子β(TGF-β)分別為(4.0±1.8)%、(4.4±1.4)%、(87±16) mg/L; (3.0±0.5)%、(2.4±1.1)%、(53±19) mg/L; (5.8±2.2)%、(5.5±1.0)%、(385±37) mg/L。PCM組顯著低于健康對照組(P<0.05)；乳腺癌組患者各指標顯著高于對照組(P<0.05)。急性期PCM組CD4+CD25+CD127-T細胞、CD4+CD25+FoxP3+T細胞、TGF-β為(2.8±1.2)%、(1.6±0.7)%、(35±11) mg/L，亞急性期分別為(3.1±1.2)%、(2.4±1.0)%、(56±14) mg/L，慢性期為(3.5±1.2)%、(3.3±1.3)%、(70±22) mg/L，急性期顯著低于亞急性期和慢性期，亞急性期顯著低于慢性期(P<0.05)。相關性分析顯示，CD4+CD25+CD127-T細胞與CD4+CD25+FoxP3+T細胞、TGF-β呈正相關(r=0.589，0.724，P<0.05)，與C反應蛋白、紅細胞沉降率、IgA、IgG、IgM、C3、C4、血小板計數(shù)、血紅蛋白無明顯相關性(P>0.05)。結論PCM患者外周血CD4+CD25+CD127-T細胞顯著降低，可以作為篩查PCM的指標之一。

關鍵詞：漿細胞性乳腺炎；調節(jié)性T細胞； FoxP3；相關性

Clinical Value of Regulatory T Cell Detection in Diagnosis of Patients with Plasma Cell MastitisGAOShuang-ying1,WUJing2.(1.DepartmentofLaboratoryMedicine,UniversityHospitalofWuhanUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430081,China; 2.DepartmentofLaboratoryMedicine,HuarunGroupWuhanSteelGeneralHospital,Wuhan430081,China)

Abstract：ObjectiveTo explore the clinical value of regulatory T cell detection diagnosis in patients with plasma cell mastitis(PCM).MethodsA total of 62 cases of PCM treated in Huarun Group Wuhan Steel General Hospital during May 2008 and May 2013 according to the disease course were divided into 18 cases of acute phase,31 cases of subacute phase and 13 cases of chronic phase;another 30 cases of breast cancer patients and 30 healthy women were selected as breast cancer group and healthy control group;the peripheral blood levels of CD4+CD25+CD127-regulatory T cells of each group were compared.ResultsThe peripheral blood level of CD4+CD25+CD127T cells,the percentage of CD4+CD25+FoxP3+T cells,transforming growth factor β(TGF-β) in the healthy control group,breast cancer group,PCM group were (4.0±1.8)%,(4.4±1.4)%,(87±16) mg/L; (3.0 + 0.5)%,(2.4±1.1)%,(53±19) mg/L;(5.8±2.2)%,(5.5±1.0)%,(385±37) mg/L.The PCM group′s indexes were significantly lower than the healthy control group(P<0.05);and the breast cancer group′s indexes were significantly higher than the healthy control group(P<0.05).Peripheral blood CD4+CD25+CD127-T cells,the percentage of CD4+CD25+FoxP3+T cells,TGF-β in the acute phase of PCM group were (2.8±1.2)%,(1.6±0.7)%,(35±11) mg/L，were significantly lower than that of the subacute phase(3.1±1.2)%,(2.4±1.0)%,(56±14) mg/L and chronic phase(3.5±1.2)%,(3.3±1.3)%,(70±22) mg/L,the acute phase were significantly lower than those of the subacute phase and chronic phase,the subacute phase were significantly lower than the chronic phase(P<0.05).Correlation analysis showed that the relationship between CD4+CD25+CD127-T cells and CD4+CD25+FoxP3+T cells,TGF-β were positively correlated(r=0.589，0.724，P<0.05),but had no obvious correction with C-reactive protein,erythrocyte sedimentation rate,IgA,IgG,IgM,C3,C4,platelet count,and hemoglobin(P>0.05).ConclusionCD4+CD25+CD127-T cells of peripheral blood in patients with PCM is significantly lower,thus can be used as one of the screening indexes of PCM.

Key words：Plasma cell mastitis; Regulatory T cells; FoxP3; Correlation

收稿日期：2014-12-08修回日期：2015-04-29編輯：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.16.068

中圖分類號：R655.8

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)16-3060-03