米泔水炮制后射干藥材中6種異黃酮類含量的變化

李 鎖，王光函，單國順，鄒桂欣，李國信

（1．遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽 110032； 2．遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽 110034）

米泔水炮制后射干藥材中6種異黃酮類含量的變化

李 鎖1，王光函2，單國順2，鄒桂欣2，李國信2

（1．遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽 110032； 2．遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽 110034）

目的考察米泔水炮制前后射干藥材中6種異黃酮類成分的含量變化。方法采用高效液相色譜(HPLC)法測定射干生品及米泔水炮制品中射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素A、鳶尾甲黃素B、野鳶尾黃素的含量，流動相為乙腈-0．1磷酸水（每100 mL含甲基- -環(huán)糊精和2-羥丙基- -環(huán)糊精各0．375 g），梯度洗脫。結(jié)果射干藥材經(jīng)米泔水炮制后，射干苷及野鳶尾苷等苷類成分含量降低，而鳶尾黃素、鳶尾甲黃素A、鳶尾甲黃素B、野鳶尾黃素等苷元含量有所增加。結(jié)論米泔水炮制后射干中6種異黃酮類成分的含量均發(fā)生了變化，可促使異黃酮苷類成分向異黃酮苷元類成分轉(zhuǎn)化。

射干；米泔水；射干苷；野鳶尾苷；鳶尾黃素；鳶尾甲黃素A；鳶尾甲黃素B；野鳶尾黃素

射干為鳶尾科植物射干 Belamcanda Chinensis（L）DC．的干燥根莖，主要有清熱解毒、利咽消痰、散血消腫等功效，為治療喉痹咽痛之要藥[1]。其臨床主要用于治療上呼吸道感染、慢性咽炎、扁桃體炎、慢性鼻竇炎、支氣管炎、哮喘、肺氣腫、肺心病、咽喉腫痛和痰盛咳喘等[2]。射干根莖中主要含有異黃酮類化合物[3-4]，包括射干苷及其苷元、鳶尾黃素、野鳶尾苷及其苷元、野鳶尾黃素、次野鳶尾黃素，鳶尾甲黃素 B、鳶尾甲黃素A、白射干素等成分[5-8]，射干苷及野鳶尾苷口服后，在體內(nèi)腸道菌群作用下轉(zhuǎn)變?yōu)槠湎鄳?yīng)苷元而發(fā)揮療效。臨床常用品種是生射干，傳統(tǒng)理論認(rèn)為，米泔水炮制方法能進(jìn)一步增強(qiáng)其清熱解毒的功效，并能去除藥材中所含過多油脂，減少藥物的辛燥氣味，有調(diào)理脾胃、增進(jìn)食欲的作用?！侗静莘纸?jīng)》載，米泔水性味甘、涼，無毒，有清熱涼血、止煩渴、利小便、解毒等功效；《雷公炮炙論》載：“射干，凡使，先以米泔水浸一宿。漉出，用堇竹葉煮，從午至亥，漉出，日干用之。”[9]但關(guān)于米泔水炮制法中異黃酮類成分含量變化尚未見詳細(xì)報(bào)道。本試驗(yàn)中采用高效液相色譜（HPLC）法考察了米泔水炮制前后射干藥材中6種異黃酮類成分的含量變化，旨在從化學(xué)成分的角度解析射干米泔水炮制方法的原理，為米泔水制射干藥材提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（Chemstation色譜工作站，美國Agilent公司）；KQ250DB型超聲波發(fā)生器（昆山市超聲儀器有限公司）；FA1004型萬分之一電子天平（上海上天精密儀器有限公司）；CSIO型電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶試驗(yàn)設(shè)備廠）。對照品射干苷（中國食品藥品檢定研究院，批號為111607-200402）；野鳶尾苷、野鳶尾黃素（成都普瑞法科技公司，批號分別為13030803，13051402）；鳶尾甲黃素 A、鳶尾甲黃素B（江蘇永健醫(yī)藥科技有限公司，批號分別為20140724，20140616）；鳶尾黃素（成都生物科技有限公司，批號為12081808）；乙腈、磷酸均為色譜純，水為娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)公司），其余試劑為分析純；所購藥材經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)李峰教授鑒定為射干 Belamcanda Chinensis（L．）DC．的根及根莖。

2 方法與結(jié)果

2．1 樣品制備

射干藥材準(zhǔn)備：取同一批射干藥材，用四分法取樣，分為6等份，每份100 g，分別作為試驗(yàn)用生品及米泔水炮制品，各平行3份。

米泔水制射干：取江米100 g，加水1 200 mL，第1次淘米水棄去；再加水1 200 mL，充分?jǐn)嚢?，漉出，即得米泔水。取射干藥?份，每份加入上述制得的米泔水100 mL，25℃室溫浸泡過夜，取出藥材，并于65℃干燥至干。

2．2 水分測定

取干燥后射干生品及炮制品粉碎，過65目篩。用烘干法[10]測定2種樣品的含水量。結(jié)果生品含水量為4．64%、米泔水炮制含水量為5．17%。

2．3 含量測定

2．3．1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex C18柱（250 mm×4．6 mm，4 μm）；流動相：乙腈-0．1%磷酸溶液（每100 mL含有甲基-β環(huán)糊精和2-羥-丙基-β環(huán)糊精各0．375 g），梯度洗脫見表 1；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1．0 mL／min；檢測波長：265 nm；柱溫：30℃。典型高效液相色譜圖見圖1。

表1 梯度洗脫時(shí)間表

圖1 射干藥材米泔水炮制前后典型高效液相色譜圖

2．3．2 溶液制備

取射干生品粉末1 g（n=3），精密稱定，置100 mL具塞三角燒瓶中，分別精密加入 70%乙醇 25 mL，密塞，稱定質(zhì)量。超聲（250 W，50 kHz）提取30 min，冷卻，稱重，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，用0．22 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素A、鳶尾甲黃素B、野鳶尾黃素對照品適量，用甲醇制成混合對照品貯備溶液，質(zhì)量濃度分別為 0．595 7，0．434 7，0．540 5，0．095 4，0．316 3，0．325 3 g／L；精密吸取混合對照品貯備液1 mL，置10 mL容量癬中，用 70%乙醇稀釋至刻度，搖勻（質(zhì)量濃度分別為 59．57，43．47，54．05，9．54，31．63，32．53 μg／mL），即得混合對照品溶液。2．3．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取混合對照貯備液1，2，4，6，8，10，12 μL進(jìn)樣，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、溶液進(jìn)樣質(zhì)量（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表2。

表2 線性關(guān)系考察結(jié)果（n=6）

精密度試驗(yàn)：精密吸取混合對照品溶液20 μL，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素 A、鳶尾甲黃素 B、野鳶尾黃素的 RSD分別為1．18%，1．03%，0．94%，1．08%，1．88%，1．29%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10 μL，按擬訂色譜條件，分別于0，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測定。結(jié)果射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素 A、鳶尾甲黃素 B、野鳶尾黃素峰面積的 RSD分別為1．31%，1．76%，1．63%，2．01%，1．98%，1．47%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取射干藥材粉末1 g，精密稱定，平行6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定。結(jié)果樣品中射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素B、鳶尾甲黃素A、野鳶尾黃素的含量分別為15．500，6．654，8．650，2．123，3．278，5．085 mg／g，RSD分別為1．52%，1．18%，1．33%，1．89%，2．04%，1．58%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已測知含量的射干藥材粉末（1號）9份，每份約0．5 g，精密稱定，分別精密加入含6種對照品的混合溶液1．2，1．0，0．8 mL（射干苷7．802 g／L、野鳶尾苷3．412 g／L、鳶尾黃素 4．398 g／L、鳶尾甲黃素 B 1．085 g／L、鳶尾甲黃素 A 1．718 g／L、野鳶尾黃素2．635 g／L，所有溶液均用DMSO溶解），每種質(zhì)量濃度制備3份。依法制備所需溶液，分別進(jìn)樣并加樣測定含量。結(jié)果見表3。

表3 射干中6種活性成分加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2．3．4 樣品含量測定

分別取射干生品及米泔水炮制品各1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定并計(jì)算。結(jié)果見表4。

表4 射干米泔水炮制前后6種成分含量測定結(jié)果（mg／g，n=3）

3 討論

曾采用乙腈-0．1%磷酸水為流動相進(jìn)行分離，但由于射干藥材中異黃酮類成分較復(fù)雜，鳶尾甲黃素A與藥材中的另一異黃酮成分野鳶尾黃素結(jié)構(gòu)相近，只差1個(gè)甲氧基，在0．1%磷酸水為水相的峰上，兩者無法分開。Hirlekar等[11]報(bào)道，加入β-環(huán)糊精大環(huán)類物質(zhì)可使異黃酮類成分的性質(zhì)發(fā)生變化，β-環(huán)糊精甲基化后破壞了其分子內(nèi)氫鍵，且甲基無立體阻礙，擴(kuò)大了其疏水空腔，使其具有更強(qiáng)的包合特性，環(huán)糊精引入甲基和2-羥丙基等功能基團(tuán)后，不但改變了其部分物理性質(zhì)，還改變了其化學(xué)結(jié)構(gòu)，從而使結(jié)構(gòu)相近的鳶尾甲黃素A和野鳶尾黃素得到較好的分離，故擇乙腈-0．1%磷酸水（每100 mL含有甲基-β環(huán)糊精和2-羥-丙基-β環(huán)糊精各0．375 g）作為流動相。

射干藥材經(jīng)米泔水炮制后，6種異黃酮類成分均發(fā)生了一定的變化。射干苷及野鳶尾苷等苷類成分含量降低，而鳶尾黃素、鳶尾甲黃素 A、鳶尾甲黃素 B、野鳶尾黃素等苷元含量有所增加?？梢?，米泔水炮制法對射干的化學(xué)成分含量影響較大，本試驗(yàn)結(jié)果對進(jìn)一步研究射干化學(xué)成分含量的影響因素提供了參考依據(jù)。

[1]秦民堅(jiān)，吉文亮，王崢濤．中藥射干的化學(xué)與藥理研究進(jìn)展[J]．國外醫(yī)藥·植物藥分冊，2000，15（2）：57．

[2]鐘 鳴，關(guān)旭俊，黃柄生，等．中藥射干研究進(jìn)展[J]．中藥材，2001，24（12）：904-906．

[3]劉聲音，王 靜．射干中多種異黃酮類化合物HPLC檢測含量研究方法的建立[J]．遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012：6（14）：217-219．

[4]劉合剛．野生射干與栽培射干化學(xué)成分的定性比較[J]．時(shí)珍國醫(yī)國藥，2001，12（8）：685-686．

[5]張曉瑞，張婧涵，李國信，等．主成分分析法用于射干藥材評價(jià)研究[J]．中國藥業(yè)，2014，23（14）：37-38．

[6]邱鷹昆，高玉白，徐碧霞，等．射干異黃酮類化合物的分離與結(jié)構(gòu)鑒定[J]．中國藥物化學(xué)雜志，2006，16（3）：175-177．

[7]秦民堅(jiān)，吉文亮，王崢濤．射干的化學(xué)成分研究（Ⅱ）[J]．中草藥，2004，35（5）：487-489．

[8]劉健英，金 麗．射干化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J]．藥學(xué)服務(wù)與研究，2008，8（5）：358-361．

[9]南北朝·劉 宋，雷 學(xué)．雷公炮炙論[M]．南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，1985：33．

[10]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄52，283-285．

[11]Hirlekar R，Kadam V．Preparation and characterization of inclusion complexes of carvedilol with methyl-P-cyclodextrin[J]．Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry，2010，63（3-4）：219-224．

Changes of 6 Isoflavone Contents In Rice Water after Processing of Belamcanda Chinensis

Li Suo1,Wang Guanghan2,Shan Guoshun2,Zou Guixin2,Li Guoxin2
(1．Liaoning University of TraditionalChinese Medicine,Shenyang,Liaoning,China 110032; 2．Liaoning Research Institute of Chinese Medicine, Shenyanng,Liaoning,China 110034)

Objective To determine the changes of 6 isoflavone contents in Belamcanda Chinensis by using rice water before and after processing．M ethods HPLC was used to determine the changes of tectoridin iridin,tectorigenin,iristectorigenin A,iristectorigenin B and irigenin contents Belamcanda Chinensis and rice water before and after processing．The mobile phase was acetonitrile-0．1% phosphoric acid(each 100 mL contains 0．375 g methyl-βcyclodextrin and 2-hydroxypropyl-βcyclodextrin)gradient elution．Results After rice water processing,the contents of aglycone,such as tectoridin and iridin etc．in Belamcanda Chinensis decreased and the contents of tectorigenin,iristectorigenin A,iristectorigenin B and irigenin ect．a(chǎn)glycone increased．Conclusion After using rice water processing,the contents of isoflavone contents in Belamcanda Chinensis were changed and prompt isoflavone glycosides composition to composition of isoflavone glycosides metaclass．

Belamcanda Chinensis;rice water;tectoridin;iridin;tectoridin;iristectorigenin A;inistectorigenin B；irigenin

R282.71；R284.1

A

1006-4931(2015)21-0010-04

李鎖，在讀碩士研究生，主要從事中藥分析研究工作，（電話）024-86803182（電子信箱）973007794＠qq．com；李國信，博士研究生，研究員，博士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥新藥開發(fā)研究工作，本文通訊作者，（電話）024-86803184（電子信箱）yying_65＠126．com。

2015-06-17)

國家“十二五”重大新藥創(chuàng)制項(xiàng)目“中藥新藥臨床技術(shù)平臺評價(jià)研究技術(shù)平臺”，項(xiàng)目編號：2012zx09303-017；國家自然基金資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號：81273927。