復(fù)方苦參酊劑急性毒性試驗(yàn)研究*

劉玉明，劉慧民，沈先榮，李珂嫻，羅 群，蔣定文，劉 瓊，侯登勇，何 穎，陳 偉，王慶蓉

(1.中國(guó)人民解放軍海軍醫(yī)學(xué)研究所，上海 200433；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350122)

復(fù)方苦參酊劑急性毒性試驗(yàn)研究*

劉玉明1，劉慧民2，沈先榮1，李珂嫻1，羅 群1，蔣定文1，劉 瓊1，侯登勇1，何 穎1，陳 偉1，王慶蓉1

(1.中國(guó)人民解放軍海軍醫(yī)學(xué)研究所，上海 200433；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350122)

目的觀察復(fù)方苦參酊劑對(duì)大鼠皮膚的急性毒性反應(yīng)。方法取60只大鼠，按體重隨機(jī)分為6組，將受試藥物涂于各組動(dòng)物完整皮膚和破損創(chuàng)面皮膚，觀察各組大鼠急性毒性反應(yīng)。結(jié)果與對(duì)照組相比，用藥后各組大鼠的正常皮膚和破損皮膚均未產(chǎn)生急性毒性反應(yīng)。結(jié)論復(fù)方苦參酊劑對(duì)大鼠無(wú)急性毒性反應(yīng)，是一種安全性較好的外用制劑。

急性毒性；大鼠；毒理學(xué)；酊劑

復(fù)方苦參酊劑是海軍醫(yī)學(xué)研究所研制的純中藥外用制劑，具有殺菌消炎、清熱利濕、消炎止癢、去濕消滯的功效，主要用于治療手癬、足癬、股癬、脂溢性皮炎、皮膚瘙癢等常見(jiàn)皮膚疾患，組方為苦參、苦瓜、辣椒、延胡索等。在該藥物的前期研究中，已對(duì)其處方篩選、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、制備工藝、藥效學(xué)等內(nèi)容進(jìn)行了研究。為了評(píng)價(jià)其臨床應(yīng)用的安全性，并申請(qǐng)中藥保護(hù)，根據(jù)衛(wèi)生部《新藥審批辦法》中有關(guān)中藥毒理學(xué)研究的技術(shù)要求，現(xiàn)對(duì)其急性毒性反應(yīng)進(jìn)行了研究，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動(dòng)物

體重計(jì)（上海天平廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申勝生物技術(shù)有限公司）；85-2型恒溫磁力攪拌器（上海司樂(lè)儀器廠）；SJ3200型超聲波清洗機(jī)（上海潔凈超聲波設(shè)備廠）；電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）；GL-21M型離心機(jī)（上海市離心機(jī)械研究所）。復(fù)方苦參酊劑(自制)；苦味酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)制劑）；70%乙醇溶液（國(guó)藥集團(tuán)，分析純）。SD大鼠60只，體重180～200 g，普通級(jí)，雌雄各半（均由中國(guó)第二軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)2008001632526，實(shí)施單位許可證號(hào)SYXK-＜軍＞2012-0051）。試驗(yàn)環(huán)境為第二軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，大鼠環(huán)境溫度控制在 20～25℃，相對(duì)濕度為 40% ～70%；換氣次數(shù)為 10～20次/分；12 h明暗交替光照；試驗(yàn)期間動(dòng)物單獨(dú)分籠飼養(yǎng)；自由飲用清潔自來(lái)水。

1.2 試驗(yàn)方法[1]

將60只SD大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只（雌雄各半），分別為完整皮膚空白對(duì)照組(A1組)、完整皮膚低劑量組(B1組)、完整皮膚高劑量組(C1組)、破損皮膚空白對(duì)照組(A2組)、破損皮膚低劑量組(B2組)、破損皮膚高劑量組(C2組)。給藥前24 h將大鼠背部脊柱兩側(cè)去毛而不損傷皮膚，去毛面積共約為9 cm2（約為體表面積的10%），破損皮膚組在去毛后用砂紙磨損皮膚，面積約3 cm×3 cm，以滲血為度，左右兩側(cè)皮膚的破損程度應(yīng)基本一致。給藥方法為在脫毛區(qū)外用給藥，每只1 mL。高劑量組(C組)予以預(yù)先濃縮好的高濃度酊劑1 mL（相當(dāng)于低劑量的15倍），低劑量組(B組)予以低濃度酊劑1 mL，對(duì)照組(A組)給予70%乙醇1 mL。給藥結(jié)束24 h后用溫水紗布洗去藥物，并于1，24，48，72 h至第7日，連續(xù)觀察給藥部位出現(xiàn)的紅斑、水腫情況，記錄動(dòng)物體重[2-5]。觀察大鼠神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、腸胃系統(tǒng)、皮膚、毛發(fā)等中毒表現(xiàn)和死亡情況，如果有死亡動(dòng)物應(yīng)進(jìn)行尸檢和肉眼觀察，當(dāng)有肉眼可見(jiàn)病變時(shí)，應(yīng)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

2 結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表1至表4。

表1 各組完整皮膚和損傷皮膚大鼠體重變化比較（g，n=10）

表1 各組完整皮膚和損傷皮膚大鼠體重變化比較（g，n=10）

注：與給藥前相比，βP＜0.01。

完整皮膚 破損皮膚組別A組B組C組給藥前190.49±15.84 191.03±12.31 192.46±11.9給藥7 d 218.98±19.14β215.14±21.23β216.04±21.96β給藥前193.21±12.78 190.55±14.33 190.29±10.50給藥7 d 219.45±19.37β217.16±25.41β218.30±28.40β

表2 各組受試藥物對(duì)局部皮膚紅斑水腫的平均反應(yīng)值、積分總和（分，n=10）

表3 急性毒性試驗(yàn)中檢查方法及癥狀指標(biāo)

表4 各組大鼠急性毒性觀察結(jié)果（n=10）

3 討論

在破損皮膚制作時(shí)，以大鼠皮膚輕度滲血為度。目前制作破損皮膚的方法多以細(xì)針頭在皮膚上劃出“#”形傷口的方法，也有以細(xì)砂紙磨損皮膚來(lái)制作破損皮膚。在采用細(xì)砂紙磨損皮膚時(shí)，使用力度應(yīng)盡量一致，否則出現(xiàn)滲血時(shí)間的快慢和深淺不同，會(huì)給實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定帶來(lái)誤差。

受試藥物為酊劑，故應(yīng)選擇采用移液器予藥物涂抹。由于脫毛區(qū)皮膚吸收藥液速度及能力有限，給藥過(guò)程中，可能會(huì)出現(xiàn)藥液殘留而后粘連他處或者直接流失其他部位。為避免藥物的流失，在每次給藥時(shí)盡量慢慢涂抹，且涂抹后將大鼠單獨(dú)留置并待藥液基本吸收后，放回籠子。

部分大鼠脫毛區(qū)毛發(fā)增長(zhǎng)迅速，在1周的觀察期內(nèi)應(yīng)予以再次剃毛，每日予拍照、記錄、觀察。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，使用復(fù)方苦參酊劑未出現(xiàn)任何急性毒性反應(yīng)，具有很好的研究?jī)r(jià)值。

致謝:本文得到了第二軍醫(yī)大學(xué)生藥學(xué)教研室黃寶康教授的悉心指導(dǎo)。

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Study on Actue Toxicity of Compound Kushen Tincture

Liu Yuming1,Liu Huimin2,Shen Xianrong1,Li Kexian1,Luo Qun1,Jiang Dingwen1,Liu Qiong1,Hou Dengyong1,He Ying1,Chen Wei1,Wang Qingrong1
(1.Naval Medical Research Institute,Shanghai,China 200433; 2.Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou,China 350122)

Objective To observe the acute toxicity of the compound Kushen Tincture to rats,which might provide scientific foundation for its clinical use.M ethods 60 Rats were randomized into 6 groups according to the body weight.Integrated and disrepaired skins in the rats were smeared with compound Kushen Tincture and the acute toxic reaction of the animals were observed and recorded continuously from the beginningof using the drug.Results Theresultsindicated thatthistincturecauseno skin acutetoxicity.Conclusion The tincture had no acute toxic reaction to rats′skin and the results suggest that this tincture is relatively safe in clinical application.

acute toxicity;rats;toxicology;tincture

R285.5；R286

A

1006-4931(2015)19-0005-02

劉玉明（1974-），男，漢族，山西和順人，博士研究生，副研究員，主要從事藥物核輻射防護(hù)及中藥現(xiàn)代化研究，（電子信箱）liuyuming888627＠sohu.com；沈先榮（1965-），男，漢族，福建永定人，博士研究生，研究員，研究室主任，博士研究生導(dǎo)師，主要從事海洋藥物在核輻射損傷和核事故應(yīng)急中的防護(hù)研究，本文通訊作者，（電子信箱）xianrong-sh＠yahoo.com。

2015-01-27)

β總后衛(wèi)生部中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：10A207。