Galectin-3、Cytokeratin-19在甲狀腺良、惡性腫瘤中的表達(dá)

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Galectin-3、Cytokeratin-19在甲狀腺良、惡性腫瘤中的表達(dá)

王一鳳鄧蒞霏廖兵

作者單位：330029 江西省腫瘤醫(yī)院

關(guān)鍵詞：甲狀腺腫瘤；半乳糖苷結(jié)合蛋白-3；低分子量角蛋白-19

甲狀腺腫瘤是作為常見的內(nèi)分泌腺腫瘤，在總?cè)巳褐械陌l(fā)病率為6%～9%，大部分為良性，只有約7%為惡性。甲狀腺癌的術(shù)前診斷現(xiàn)在主要有病史和體格檢查，還有頸部B超、頸部CT平掃和I131同位素檢查，但這些診斷手段對(duì)甲狀腺良、惡性腫瘤的確診特異性均不高。本文對(duì)甲狀腺腫瘤進(jìn)行術(shù)前細(xì)胞學(xué)檢查(fine needle aspiration，F(xiàn)NA),并采用免疫組化的方法，聯(lián)合檢測(cè)甲狀腺腫瘤標(biāo)志物細(xì)胞角蛋白19(Cytokeratin19)和β半乳糖苷結(jié)合蛋白(Galectin-3)，從而鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)的良、惡性，為臨床的進(jìn)一步治療提供有力的依據(jù)。

1材料和方法

1.1臨床資料

選取2008年7月-2012年6月在江西省腫瘤醫(yī)院頭頸外科住院擬行甲狀腺腫瘤手術(shù)切除的患者88例(男性26例，女性62例)。術(shù)前均對(duì)這些患者進(jìn)行甲狀腺細(xì)胞學(xué)檢查，CK-19、Gal-3免疫組化染色，細(xì)胞涂片巴氏染色。術(shù)后均對(duì)甲狀腺腫瘤行常規(guī)病理檢查。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞涂片制備和免疫組化染色患者取坐位，上身垂直頸部放松，由于甲狀腺易出血，用6號(hào)針頭進(jìn)針后保持1 ml左右的負(fù)壓來(lái)回提插3～4次。保證常規(guī)涂片有2張，一張行快速染色，另一張立即用95%的酒精濕固定行巴氏染色。我們根據(jù)細(xì)胞核異形性將細(xì)胞分為7級(jí)，級(jí)別越高，惡性程度越高。另取細(xì)胞涂片鼠抗CK-19、Gal-3(1∶50，美國(guó)Antibody diagnostic公司)孵育后，加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG(1∶50，美國(guó)Antibody diagnostic公司)，DNA顯色。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)立不加一抗的陰性對(duì)照組。結(jié)果判斷：2種染色均以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色細(xì)胞顆粒為陽(yáng)性，CK-19可有明顯細(xì)胞膜著色，Gal-3部分有細(xì)胞核著色；按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比并參考著色強(qiáng)度確定分級(jí)：無(wú)明顯陽(yáng)性細(xì)胞為陰性(-)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%為弱陽(yáng)性(+)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%～50%為中度陽(yáng)性(2+)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥50為強(qiáng)陽(yáng)性(3+)。

1.2.2靈敏度和特異度的計(jì)算我們將切除標(biāo)本以10%甲醛溶液固定，常規(guī)組織處理，包埋切片，HE染色，形態(tài)學(xué)觀察。參照WHO分類標(biāo)準(zhǔn)及《腫瘤組織病理診斷》，由我院病理科醫(yī)師完成。以甲狀腺腫瘤術(shù)后病理為診斷腫瘤良、惡性的金標(biāo)準(zhǔn)，比較CK-19、Gal-3在良惡性腫瘤表達(dá)中的不同，并計(jì)算普通細(xì)胞涂片、普通細(xì)胞涂片結(jié)合CK-19、Gal-3免疫組化染色診斷良惡性腫瘤的敏感度和特異度。靈敏度=真陽(yáng)性數(shù)/(真陽(yáng)性數(shù)+假陰性數(shù))×100%。特異度=真陰性數(shù)/(真陰性數(shù)+假陽(yáng)性數(shù))×100%。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用成組的Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)分析不同組間蛋白表達(dá)差異。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1常規(guī)甲狀腺細(xì)胞病理診斷與術(shù)后病理診斷結(jié)果比較

88例患者術(shù)后病理顯示：65例良性甲狀腺腫瘤(結(jié)節(jié)性甲狀腺腫伴囊性變36例，腺瘤18例，橋本氏病11例)、23例甲狀腺乳頭狀癌。甲狀腺細(xì)胞學(xué)標(biāo)本在鑒別結(jié)節(jié)良性腫瘤的靈敏度為74%(17/23)，特異度為94%(61/65)，見表1。

表1　細(xì)胞病理診斷結(jié)果與組織病理診斷結(jié)果比較/例

2.2Gal-3 在甲狀腺良、惡性病變中的表達(dá)

Gal-3 在甲狀腺良性病變中多數(shù)表達(dá)為弱陽(yáng)性或陰性，僅2例為中度陽(yáng)性表達(dá)；乳頭狀癌病例22例為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。在甲狀腺乳頭狀癌和良性病變中陽(yáng)性率分別為96%和3%；輕、中度表達(dá)陽(yáng)性率在上述良、惡性病變分別為6%和4%。兩者在陽(yáng)性強(qiáng)度上和陽(yáng)性率的差異上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。見表2。

2.3CK-19在甲狀腺良、惡性病變中的表達(dá)

CK-19 在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤及橋本氏甲狀腺炎組織中大多數(shù)為陰性或者弱陽(yáng)性表達(dá)，而乳頭狀癌病例則均為強(qiáng)陽(yáng)性或中等表達(dá)，尤其是微小浸潤(rùn)性乳頭狀癌也表現(xiàn)為明顯陽(yáng)性，染色清晰。CK-19在良性甲狀腺病變(結(jié)甲+橋本氏病+腺瘤)中的陽(yáng)性率，中、強(qiáng)度表達(dá)率分別為15%和6%，乳頭狀癌則分別為30%和70%,陽(yáng)性率和陽(yáng)性強(qiáng)度上兩者差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

表2　甲狀腺不同病變CK-19、Gal-3表達(dá)/例

3討論

在過(guò)去20年中，甲狀腺腫瘤細(xì)胞學(xué)檢查已成為甲狀腺腫瘤診斷的常規(guī)檢查。我們可以制作細(xì)胞涂片標(biāo)本，通過(guò)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞學(xué)的物異性，以明確腫瘤性質(zhì)。FNA的敏感性和特異性分別為 47%～96%、74%～99%，穿刺醫(yī)生的技術(shù)和細(xì)胞室醫(yī)師制片、讀片水平等均會(huì)影響其變異度。而且，細(xì)胞學(xué)對(duì)甲狀腺濾泡樣增生的診斷仍較為模糊，從而導(dǎo)致了部分不必手術(shù)的患者接受手術(shù)治療。近年來(lái)，分子生物學(xué)技術(shù)和免疫組化技術(shù)被人們廣泛運(yùn)用到FNA，通過(guò)對(duì)細(xì)胞涂片腫瘤標(biāo)志物 (如Galectin-3、CK-19、CD44v6、CK-19和RET等)的檢測(cè)，達(dá)到鑒別腫瘤良惡性的目的，從而提高診斷效率。

在我們以往的研究中，Galectin-3在甲狀腺惡性腫瘤中的表達(dá)顯著高于甲狀腺正常組織和良性病變[1]。Galectin-3即半乳糖苷結(jié)合蛋白，是植物凝素中的一組。它能夠參與細(xì)胞與間質(zhì)之間的炎癥反應(yīng)、黏附、免疫調(diào)節(jié)和細(xì)胞生長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡以及腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)和mRNA 前體的剪切等，且Galectin-3能夠參與多種細(xì)胞功能，在上皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞中表達(dá)，特別是在mRNA剪接過(guò)程中發(fā)揮重要作用。有研究證明，無(wú)論是在mRNA或者是蛋白水平，Galectin-3在濾泡起源的甲狀腺乳頭狀癌均特征性的表達(dá)。Saggiorato等[2]分析了23例甲狀腺乳頭狀癌和54例濾泡性腺瘤的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本和術(shù)后病理標(biāo)本，免疫組化結(jié)果均顯示Gal-3免疫反應(yīng)在所有乳頭狀癌術(shù)后病理標(biāo)本中均為陽(yáng)性，在對(duì)照的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中陽(yáng)性則為16/17。所以認(rèn)為術(shù)前診斷甲狀腺乳頭狀癌Gal-3是一種可靠的分子標(biāo)記物，能提高細(xì)胞學(xué)診斷的準(zhǔn)確性。

CK-19是一種低分子量角蛋白，可用于甲狀腺良惡性腫瘤的鑒別診斷。Baloch等[3]認(rèn)為CK-19對(duì)鑒別其他濾泡良性病變和濾泡型乳頭狀癌有明顯的區(qū)別作用。我們的研究提示CK-19在甲狀腺良性病變中多為陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)(92%)，而在乳頭狀癌中則都是中、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(94%)，由此可以說(shuō)明CK-19陽(yáng)性表達(dá)是濾泡細(xì)胞增生惡變的重要標(biāo)志，可以作為鑒別甲狀腺良、惡性病變的主要指標(biāo)，尤其是對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的診斷具有重要參考價(jià)值。

我們將免疫組化技術(shù)運(yùn)用于甲狀腺腫瘤細(xì)胞學(xué)穿刺標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)甲狀腺惡性腫瘤有腫瘤標(biāo)志物Galectin-3、CK-19表達(dá)，其表達(dá)要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于良性病變。與普通的細(xì)胞涂片相比，獨(dú)立檢測(cè)Galectin-3、CK-19可以大大提高診斷甲狀腺良惡性病變的準(zhǔn)確率，其中Galectin-3的敏感性佳。

我們的研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)外的一些研究相近。王麗華等在甲狀腺新鮮標(biāo)本中行細(xì)胞學(xué)檢查，他們檢測(cè)Galectin-3和CD44v6在甲狀腺新鮮標(biāo)本中的表達(dá)，比較其與普通細(xì)胞涂片在診斷甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性的敏感性和特異性，揭示腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性表達(dá)可提高診斷的準(zhǔn)確性[4]。有學(xué)者也發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測(cè)Galectin-3、CK-19能夠有效地提高疑難FNA診斷水平，能夠有效鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性[5]。

綜上所述，術(shù)前行甲狀腺細(xì)胞學(xué)穿刺普通細(xì)胞涂片結(jié)合Galectin-3、CK-19免疫組化檢查，能夠顯著提高甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性診斷的敏感度和特異度。

參考文獻(xiàn)

[1]杜馥曼，楊玉芝，馮琨，等.Galectin-3 和 CD44v6 在甲狀腺癌中的表達(dá)及臨床價(jià)值〔J〕.標(biāo)記免疫分析與臨床，2010，17(2):86-88.

[2]Saggiorato E,Cappia S,De GillIi P,et al.Galectin-3 as a presurgical immunocytodiagnostic marker of minimally invasive follicular thyroid carcinoma〔J〕.J Clin Endocrinol Metab,2001,86(11):5152-5158.

[3]Baloch ZW,Abraham S,Roberts S,et al.Differential expression of cytokeratins infollicular variant of papillary carcinoma:an immunohistochemical study and its diagnosticutility 〔J〕.Hum Pathol,1999,30 (10):1166-1171.

[4]王麗華，趙永桔，王曉穎，等.Galectin-3 和 CD44v6 在甲狀腺細(xì)針穿刺標(biāo)本上的表達(dá)及意義〔J〕.上海醫(yī)學(xué)，2006，29(11):785-788.

[5]Rossi ED，Raffaelli M，Minimo C，et al.Immunocytochemical evaluation of thyroid neoplasms on thin-layer smears from fine-needle aspiration biopsies〔J〕.Cancer，2005，105(2):87-95.

(編輯：甘艷)

(收稿日期2014-11-17修回日期 2015-01-10)

文章編號(hào)：1001-5930(2015)04-0623-02

中圖分類號(hào)：R736.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.04.048

通訊作者：廖兵