DC-CIK聯(lián)合化療在晚期腎癌患者中的綜合應(yīng)用價(jià)值

蔡艷榮

作者單位:610066 四川省成都新華醫(yī)院

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DC-CIK聯(lián)合化療在晚期腎癌患者中的綜合應(yīng)用價(jià)值

蔡艷榮

作者單位:610066 四川省成都新華醫(yī)院

【摘要】目的探討DC-CIK聯(lián)合化療在治療晚期腎癌患者中的綜合應(yīng)用價(jià)值。方法回顧性分析接受化療的46例晚期腎癌病例，其中21例聯(lián)合DC-CIK治療(DC-CIK組)，25例僅接受化療(化療組)。比較2組間腫瘤生長(zhǎng)情況、患者長(zhǎng)期生存情況、不良反應(yīng)發(fā)生情況等差異；并對(duì)外周血淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平進(jìn)行檢測(cè)，比較組間差異。結(jié)果DC-CIK組實(shí)體瘤近期緩解情況顯著優(yōu)于化療組；DC-CIK組中位總生存時(shí)間為20個(gè)月、1年生存率為90.48%，顯著高于化療組的17個(gè)月、84.00%，P<0.05。治療1、3個(gè)療程后DC-CIK組CD3+、CD4+、CD8+比例顯著高于化療組，IL-2、IL-12、IFN-γ含量顯著高于化療組，P<0.05。結(jié)論DC-CIK聯(lián)合化療能有效提高晚期腎癌患者的免疫能力，促進(jìn)IL-2、IL-12、IFN-γ等細(xì)胞因子的表達(dá)，從而發(fā)揮殺死腫瘤細(xì)胞、緩解實(shí)體瘤、延長(zhǎng)患者生存期的功效。

【關(guān)鍵詞】晚期腎癌；DC-CIK；化療；淋巴細(xì)胞亞群；細(xì)胞因子

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:559～562)

腎癌在泌尿系統(tǒng)腫瘤中的發(fā)病率僅次于膀胱癌，占全身惡性腫瘤的3%。局限性腎癌患者可以通過(guò)手術(shù)治療獲得痊愈，但是約有30%的腎癌患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)處于晚期。由于腎癌對(duì)放化療均不敏感，因此目前尚無(wú)有效的方法治療晚期腎癌[1]。近年來(lái)酪氨酸激酶抑制劑在晚期腎癌的治療中被逐漸推廣，其雖然能有效提高患者的生存率，但是效果仍不理想。最新研究表明細(xì)胞免疫CD8+T細(xì)胞(CTLs)在抑制腫瘤生長(zhǎng)中具有重要作用，樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)則對(duì)CTLs的激活至關(guān)重要；細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokineinduced kill cell，CIK)在腎癌的治療中也表現(xiàn)出了很好的療效[2-3]。這幾年，不斷有研究發(fā)現(xiàn)DC-CIK能改善腎癌患者的免疫水平，延緩腫瘤的進(jìn)展，但是也有人持懷疑態(tài)度。為了證實(shí)DC-CIK在晚期腎癌治療中的綜合應(yīng)用價(jià)值，我們開(kāi)展了以下研究。

1資料與方法

1.1臨床資料

回顧性分析2007年6月至2013年3月期間在我院接受化療的晚期腎癌病例46例，所有患者均經(jīng)組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查確診為腎細(xì)胞癌，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期，KPS 評(píng)分>60分，預(yù)計(jì)生存期大于6個(gè)月；排除非原發(fā)性腎癌患者，排除接受腎切除后復(fù)發(fā)的病例，排除合并有傳染性疾病或者近3個(gè)月接受大手術(shù)的病例。根據(jù)是否接受DC-CIK治療，分為2組，其中DC-CIK組21例，化療組25例。DC-CIK組，男性16例，女性5例；年齡34～69歲，中位年齡52歲；TNM分期為Ⅲ期9例，Ⅳ期12例?；熃M，男性18例，女性7例；年齡32～67歲，中位年齡53歲；TNM分期為Ⅲ期12例，Ⅳ期13例。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，2組患者間性別、年齡及腫瘤分期等基線資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

1.2治療方法

1.2.1DC-CIK制備方法CIK細(xì)胞制備：①采用血細(xì)胞分離機(jī)采集患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，PBS洗滌3次，用RPMI1640培養(yǎng)基調(diào)節(jié)細(xì)胞密度至3×106個(gè)/ml，接種于6孔板，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。②收集非貼壁細(xì)胞，加入IFN-γ(1 000 U/ml)，再次置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。③移入經(jīng)CD3MeAb包被過(guò)的25 ml培養(yǎng)瓶中，加入CIK培養(yǎng)液(RPMI1640培養(yǎng)基加入10%的人血清，IL-1β、IL-2，終濃度為100 U/ml、300 U/ml)繼續(xù)培養(yǎng)48 h；④每3天更換新鮮CIK培養(yǎng)液，誘導(dǎo)產(chǎn)生CIK細(xì)胞。

DC體外培養(yǎng)：①同CIK制備①；②收集貼壁細(xì)胞，加入DC培養(yǎng)液(RPMI1640培養(yǎng)基加入10%的人血清，rhGM-CSF、rhIL-5，終濃度為100 ng/ml、50 ng/ml)置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，于第3天更換新鮮DC培養(yǎng)液，第5天加入IL-1β、PGE2、TNF-α，終濃度分別為20 ng/ml、5 μg/ml、20 ng/ml，第7天即可收獲成熟的DC。

DC-CIK制備：收集培養(yǎng)成熟的DC以及CIK細(xì)胞，去培養(yǎng)液，加入CIK培養(yǎng)液，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。以DC∶CIK=1∶4的比例進(jìn)行混合，繼續(xù)用CIK培養(yǎng)液培養(yǎng)，即得DC-CIK。

1.2.2化療方案所有患者均接受舒尼替尼口服治療，50 mg/次，頓服。每服藥4周后停藥2周。持續(xù)用藥至腫瘤進(jìn)展或者出現(xiàn)不可耐受的不良反應(yīng)。

1.2.3DC-CIK治療方案收集培養(yǎng)成功的且經(jīng)檢測(cè)細(xì)胞存活率大于90%、無(wú)污染的DC-CIK細(xì)胞，5×108個(gè)左右，離心，生理鹽水洗滌3次后，加入含有10%患者自體血漿的生理鹽水重懸，經(jīng)靜脈回輸給患者，5次1個(gè)療程。

1.3觀察指標(biāo)

患者每8～12周接受CT檢查，由固定的影像診斷小組按照實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST1.1)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩(wěn)定(SD)和疾病進(jìn)展(PD)4個(gè)等級(jí)[4]，客觀反應(yīng)率(ORR)=CR+PR。根據(jù)用藥時(shí)間，記錄患者的總生存時(shí)間。

于治療前及治療1、3個(gè)療程后，收集患者靜脈血，采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)治療前后2組患者間外周血中淋巴細(xì)胞亞群百分比(CD3+、CD4+、CD8+、HLA-DR+T淋巴細(xì)胞)。采用ELISA試劑盒檢測(cè)血清中IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α的水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.12組臨床療效比較

DC-CIK組CR、PR、ORR分別為9.52%、38.10%和47.62%，顯著高于化療組的0.00%、16.00%和16.00%，P<0.05(見(jiàn)表1)。采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，DC-CIK組中位總生存時(shí)間為20個(gè)月，1年生存率為90.48%；化療組中位總生存時(shí)間為17個(gè)月，1年生存率為84.00%。DC-CIK組總生存時(shí)間及1年生存率均顯著優(yōu)于化療組，P<0.05。

表1　2組間臨床療效比較(例，%)

注：*為與化療組比較，P<0.05。

2.2治療前后2組外周血中淋巴細(xì)胞亞群百分比比較

研究結(jié)果顯示治療前2組患者外周血中各項(xiàng)淋巴細(xì)胞亞群百分比無(wú)顯著差異，P>0.05。治療1、3個(gè)療程后DC-CIK組CD3+、CD4+、CD8+比例顯著高于化療組(P<0.05)。治療1、3個(gè)療程后，DC-CIK組CD3+、CD4+、CD8+比例較治療前顯著提高，化療組較化療前顯著降低，P<0.05。見(jiàn)表2。

±s，%)

注：*為與化療組同期比較，P<0.05；△為與治療前比較，P<0.05。

2.3治療前后2組間血清中炎癥因子水平比較

研究結(jié)果顯示治療前2組患者血清中炎癥因子水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05。治療1、3個(gè)療程后DC-CIK組IL-2、IL-12、IFN-γ比例顯著高于化療組(P<0.05)。治療1、3個(gè)療程后，DC-CIK組IL-2、IL-12、IFN-γ比例較治療前顯著提高(P<0.05)；化療組與治療前相比，無(wú)明顯變化(P>0.05)。見(jiàn)表3。

±s，pg/ml)

注：*為與化療組同期比較，P<0.05；△為與治療前比較，P<0.05。

3討論

目前手術(shù)是治療原發(fā)性腎癌的首選有效方法，但其僅對(duì)局限性腎癌具有較好的作用。已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的腎癌由于對(duì)放、化療均不敏感，因此臨床上缺乏有效的治療和預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)的治療方案[5]。腫瘤免疫學(xué)說(shuō)認(rèn)為腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移極有可能與腫瘤本身逃避免疫監(jiān)視的機(jī)能有關(guān)，腫瘤患者體內(nèi)缺少足夠的抗原提呈細(xì)胞來(lái)激發(fā)腫瘤免疫反應(yīng)是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要原因[6]。因此醫(yī)學(xué)界一直在尋找通過(guò)提高機(jī)體對(duì)腎癌細(xì)胞的免疫應(yīng)答能力來(lái)抑制或殺死腎癌細(xì)胞的方法，免疫治療也被普遍接受為治療腎癌的有效方法[7-8]，DC-CIK治療腎癌的療效也被越來(lái)越多的學(xué)者所關(guān)注[9-10]。

已有研究證實(shí)DC的數(shù)量與腫瘤的臨床分期、周圍浸潤(rùn)程度以及腫瘤轉(zhuǎn)移、患者預(yù)后等息息相關(guān)[11]，腫瘤細(xì)胞接觸DC細(xì)胞后會(huì)抑制DC細(xì)胞成熟，導(dǎo)致抗原無(wú)法呈遞給T細(xì)胞，最終導(dǎo)致免疫耐受和腫瘤的免疫逃逸。CIK則是一群異質(zhì)細(xì)胞，同時(shí)具備NK細(xì)胞的MHC限制性殺瘤功能和T細(xì)胞的強(qiáng)大抗瘤活性?；A(chǔ)研究證實(shí)DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)能起到協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。本研究采用自體DC-CIK細(xì)胞回輸聯(lián)合化療的方法治療晚期腎癌，結(jié)果顯示DC-CIK治療組患者實(shí)體瘤緩解情況顯著優(yōu)于單純化療組，該組患者的中位總生存時(shí)間也有了明顯延長(zhǎng)，證實(shí)DC-CIK治療在晚期腎癌中具有積極作用。

另外我們關(guān)注了DC-CIK對(duì)外周血中淋巴細(xì)胞亞群的影響。外周血CD3+、CD4+、CD8+水平是反映機(jī)體免疫狀況的重要指標(biāo)。我們研究結(jié)果顯示化療組患者在接受化療后外周血CD3+、CD4+、CD8+百分比明顯下降；而DC-CIK組患者CD3+、CD4+、CD8+百分比則與治療前相比顯著提高，顯著高于同時(shí)期的化療組(P<0.05)。說(shuō)明DC-CIK治療能改善晚期腎癌患者的免疫功能，與張亮等的研究報(bào)道一致[12]。我們還觀察了DC-CIK對(duì)血清中炎癥因子水平的影響，結(jié)果顯示治療1、3個(gè)療程后DC-CIK組IL-2、IL-12、IFN-γ比例顯著高于化療組(P<0.05)，與治療前相比也有顯著提高。DC的高表達(dá)能刺激細(xì)胞分泌IL-2、IL-12等Th1類細(xì)胞因子，Th1類細(xì)胞因子在機(jī)體的抗腫瘤免疫中具有重要作用，其通過(guò)誘導(dǎo)T 細(xì)胞和NK 細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，激活NK 細(xì)胞的殺瘤活性來(lái)干擾腫瘤的正常生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[13-14]。已經(jīng)有研究證實(shí)腫瘤患者體內(nèi)IFN-γ與患者腫瘤進(jìn)展時(shí)間和總生存時(shí)間呈正相關(guān)[15]。本研究結(jié)果可以推測(cè)DC-CIK治療晚期腎癌的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)Th1類細(xì)胞因子的生成與分泌有關(guān)。

綜上所述，DC-CIK聯(lián)合化療能有效提高晚期腎癌患者的免疫能力，促進(jìn)IL-2、IL-12、IFN-γ等細(xì)胞因子的表達(dá)，從而發(fā)揮殺死腫瘤細(xì)胞、緩解實(shí)體瘤、延長(zhǎng)患者生存期的功效，DC-CIK聯(lián)合化療是治療晚期腎癌較為理想的方案。

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(編輯：甘艷)

Comprehensive Application Value of DC-CIK Combined with Chemotherapy for

Advanced Renal Cell Carcinoma

CAIYanrong.ChengduXinhuaHospital,Chengdu,610066

【Abstract】ObjectiveTo study the comprehensive application value of DC-CIK combined with chemotherapy for advanced renal cell carcinoma.MethodsRetrospective analysis of 46 cases of patients with advanced renal cell carcinoma was conducted,21 cases received DC-CIK therapy (DC-CIK group),25 cases received chemotherapy (chemotherapy group).Tumor growth,long-term survival and adverse reactions of the 2 groups were compared;and the levels of peripheral blood lymphocyte subsets and cytokine of the 2 groups were detected and compared.ResultsThe solid tumor remission in the DC-CIK group was better than that of the chemotherapy group,and the median overall survival time and the 1-year survival rate of the DC-CIK group were respectively 20 months and 90.48%,which were higher than those of the chemotherapy group 17 months,84.00%,P<0.05.After 1,3 courses of treatment,the percentages of CD3+,CD4+,CD8+ of the DC-CIK group were higher than that of the chemotherapy group;and the serum levels of IL-2,IL-12,IFN-γ of the DC-CIK group were higher than that of the chemotherapy group,allP<0.05.ConclusionDC-CIK combined with chemotherapy can effectively improve the immunity of patients with advanced renal cell carcinoma,promote the expression of cytokines such as IL-2,IL-12,IFN-γ and so on,so as to kill tumor cells,relieve solid tumor and improve survival of patients.

【Key words】Advanced renal cell carcinoma；DC-CIK；Chemotherapy；Lymphocyte subsets；Cytokines

(收稿日期2014-12-09修回日期 2015-03-10)

中圖分類號(hào)：R737.11

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2015)04-0559-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.04.028