潮風(fēng)草中非C21甾體類化學(xué)成分研究*

劉秀芬，丁美玲，張朝鳳，張 勉，許翔鴻

中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院生藥學(xué)研究室，南京 211198

潮風(fēng)草中非C21甾體類化學(xué)成分研究*

劉秀芬，丁美玲，張朝鳳**，張 勉，許翔鴻

中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院生藥學(xué)研究室，南京 211198

目的：研究民間藥用植物潮風(fēng)草Cynanchum ascyrifolium中非C21甾體類化學(xué)成分，闡明其抗炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。方法：采用多種柱色譜技術(shù)進(jìn)行化學(xué)成分的分離純化，并根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從本種植物的干燥根莖中分離鑒定了11個(gè)化合物，分別鑒定如下：五環(huán)三萜類的華北白前醇（1）；苯乙酮類的對羥基苯乙酮（2），2，4-二羥基苯乙酮（3）和 4-羥基-3-甲氧基苯乙酮（4）；植物甾醇類的6β-羥基-4-烯-3-豆甾烷酮（5），3β，5α，6β-三羥基豆甾烷（6），β-谷甾醇（7）和β-胡蘿卜苷（8）；苯甲酸類的對羥基苯甲酸（9）和3，4-二羥基苯甲酸甲酯（10）；以及神經(jīng)鞘脂苷元（2S，3S，4R，10E）-2-[（2′R）-2'-hydroxytetracosanoyl amino]-10-octadecene-1，3，4-triol（11）。結(jié)論：潮風(fēng)草的根莖中五環(huán)三萜和苯乙酮類成分含量較高，可能為潮風(fēng)草發(fā)揮抗炎作用的主要成分類型之一；以上化合物均首次從本種植物中分離得到。

蘿藦科；潮風(fēng)草；苯乙酮類；植物甾醇類

潮風(fēng)草Cynanchum ascyrifolium系蘿藦科鵝絨藤屬植物，生于山坡、林緣、雜木林下及稍濕草地。產(chǎn)于吉林、遼寧、山東、河北，朝鮮、日本也有分布。根可藥用，在東北也作“白薇”收購[1]。本品味苦、咸，性寒，具有清熱涼血、利尿通淋、解毒療瘡等功效。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，潮風(fēng)草的根莖乙醇提取物具有較好的抗炎作用，無顯著細(xì)胞毒性。C21甾類為蘿藦科特征性化學(xué)成分，具有較好的抗炎活性及免疫抑制作用[2]。

Yeo H等[3-4]從潮風(fēng)草的根中分離得到5個(gè)C21甾體苷（cynascyroside A-E），而潮風(fēng)草中C21甾體之外的化學(xué)成分未見報(bào)道。為了進(jìn)一步探索潮風(fēng)草中C21甾體以外的活性物質(zhì)，對其根莖的乙醇提取物進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。在此，本文報(bào)道所分離鑒定的11個(gè)非C21甾體類化合物，分別屬于苯乙酮類、植物甾醇類、簡單有機(jī)酸類、五環(huán)三萜及神經(jīng)鞘脂類等。以上所有化合物均為首次從潮風(fēng)草中分得（結(jié)構(gòu)見圖1）。

圖1 潮風(fēng)草根莖中分離鑒定的化合物結(jié)構(gòu)

1 儀器與材料

Brucker ACF-300、500型核磁共振儀；Agilent 1100LC-ESI/MS型液-質(zhì)聯(lián)用儀；薄層層析硅膠GF254和柱層析硅膠100～200目和200～300目均為青島海洋化工集團(tuán)公司生產(chǎn)；羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20，Pharmacia公司）；MCIgel-CHP-20P分離填料（日本三菱化工）；所用試劑均為分析純。

潮風(fēng)草的根莖于2012年8月采自吉林省長白山地區(qū)，經(jīng)本文通訊作者張朝鳳鑒定原植物為蘿藦科潮風(fēng)草Cynanchum ascyrifolium，憑證標(biāo)本（CFC-201208）存放于中國藥科大學(xué)生藥學(xué)研究室。

2 提取分離

潮風(fēng)草干燥根莖（7.2 kg）粉碎，以80%乙醇加熱回流提取3次，每次2 h，回收乙醇溶劑，濃縮得到總浸膏1.67 kg。將總浸膏混懸在水里，用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，減壓回收溶劑后得到浸膏285.8 g。取乙酸乙酯萃取物250 g用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離，用二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶1）梯度洗脫收集得到6個(gè)流分（Fr.）A～F和化合物1的粗品，粗品經(jīng)重結(jié)晶純化得到化合物1（1.035 g）；Fr.B經(jīng)硅膠柱色譜，采用石油醚-乙酸乙酯（5∶1～3∶1）梯度洗脫得到化合物2（698 mg）、3（604 mg）、7（94 mg），石油醚-丙酮（3∶1）洗脫得到化合物4（25 mg）、5（5 mg）；Fr.C經(jīng)MCI-gel（80%甲醇-水）色譜柱后，石油醚-乙酸乙酯（3∶1～1∶1）梯度洗脫得到化合物10（77 mg）；用二氯甲烷-甲醇（20∶1～5∶1）洗脫，得到化合物6（14 mg）和8（189 mg）；二氯甲烷-甲醇（20∶1～8∶1）梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫得化合物9（13 mg）和11（22 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1無色針晶 （石油醚-乙酸乙酯）；mp：222℃～225℃。1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：3.48（1H，brd，J=6.0 Hz，H-3），5.55（1H，brd，J=6.0 Hz，H-6），1.04（3H，s，H-23），1.13（3H，s，H-24），0.89（3H，s，H-25），0.81（3H，s，H-26），1.25（3H，s，H-27），0.94（3H，s，H-28），0.88（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.91（3H，d，J=6.0 Hz，H-30）；13C-NMR（CDCl3，125 MHz）δ：20.8（C-1），28.8（C-2），76.5（C-3），41.3（C-4），140.7（C-5），121.4（C-6），22.6（C-7），44.6（C-8），34.5（C-9），37.2（C-10），30.6（C-11），30.7（C-12），39.3（C-13），39.6（C-14），29.4（C-15），32.7（C-16），39.9（C-17），54.5（C-18），48.2（C-19），35.9（C-20），27.8（C-21），42.5（C-22），27.2（C-23），25.4（C-24），28.8（C-25），15.4（C-26），16.8（C-27），33.3（C-28），21.2（C-29），23.4（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]基本一致，故鑒定化合物1為華北白前醇。

化合物2白色片狀結(jié)晶（石油醚-乙酸乙酯）；mp：109℃～110℃。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.88（2H，d，J=8.0 Hz），6.84（2H，d，J=9.0 Hz），2.51（3H，s）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]基本一致，故鑒定為對羥基苯乙酮。

化合物3白色片狀結(jié)晶（石油醚-乙酸乙酯）；mp：142℃～143℃。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.24（1H，d，J=2.0 Hz），6.35（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz），7.70（1H，d，J=8.5 Hz），2.51（3H，s）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]基本一致，故鑒定為2，4-二羥基苯乙酮。

化合物4無色針晶（石油醚-丙酮）；mp：113℃～115℃。1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：7.53～7.54（2H，m），6.95（1H，d，J=8.5 Hz），6.15（1H，s），3.95（3H，s），2.55（3H，s）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]基本一致，故鑒定為4-羥基-3-甲氧基苯乙酮。

化合物5無色鱗片狀晶體 （石油醚-丙酮）；ESI-MS m/z 429.5[M+H]+，ESI-MS m/z 463.5[M+Cl]-。1HNMR（CDCl3，300 MHz）δ：0.74（3H，s，H-18），0.80（3H，s，H-26），0.82（3H，s，H-27），0.84（3H，s，H-29），0.92（3H，d，J=6.3 Hz，H-21），1.37（3H，s，H-19），4.34（1H，brs，H-6）and 5.81（1H，s，H-4）；13C-NMR（CDCl3，75 MHz）δ：37.1（C-1），34.2（C-2），200.2（C-3），126.2（C-4），168.3（C-5），73.2（C-6），38.6（C-7），29.7（C-8），53.6（C-9），38.6（C-10），20.9（C-11），39.6（C-12），42.5（C-13），55.9（C-14），24.1（C-15），28.1（C-16），56.0（C-17），12.0（C-18），19.4（C-19），36.1（C-20），18.7（C-21），33.9（C-22），26.1（C-23），45.8（C-24），29.2（C-25），19.7（C-26），19.0（C-27），23.1（C-28），11.9（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]基本一致，故鑒定為6β-羥基-4-烯-3-豆甾烷酮。

化合物6無色針晶（二氯甲烷-甲醇）；mp：248℃～252℃。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：5.15（1H，s，H-3），4.15（1H，s，H-6），2.95（1H，t，J=12.5 Hz，H-4a），2.08（1H，m，overlap，H-4b），0.75（3H，s，H-18），0.82（3H，t，J=7.5 Hz，H-29），0.87（6H，d，J=7.0 Hz，H-26，27），0.99（3H，m，H-21），1.65（3H，s，H-19）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：32.5（C-1），33.3（C-2），67.4（C-3），42.9（C-4），75.9（C-5），76.3（C-6），35.7（C-7），31.2（C-8），45.9（C-9），39.1（C-10），21.8（C-11），40.7（C-12），43.1（C-13），56.6（C-14），24.6（C-15），28.6（C-16），56.6（C-17），12.1（C-18），17.2（C-19），36.5（C-20），19.0（C-21），34.3（C-22），26.5（C-23），46.1（C-24），29.5（C-25），19.2（C-26），19.9（C-27），23.4（C-28），12.4（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]基本一致，故鑒定為3β，5α，6β-三羥基豆甾烷。

化合物7無色針狀結(jié)晶 （丙酮）；mp：138℃～140℃。紫外燈下無熒光無暗斑，5%香草醛-濃硫酸加熱顯紫紅色，與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，三個(gè)溶劑系統(tǒng)，Rf值及斑點(diǎn)顏色均一致。故確定該化合物為β-谷甾醇。

化合物8白色粉末（甲醇）；mp：296℃～298℃。5%香草醛-濃硫酸加熱顯紫紅色，與β-胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品共薄層，三個(gè)溶劑系統(tǒng)，Rf值及斑點(diǎn)顏色均一致。故確定該化合物為β-胡蘿卜苷。

化合物9無色針晶 （石油醚-乙酸乙酯）；mp：214℃～216℃。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.87（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），6.81（2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5）；13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.5（C=O），163.8（C-4），133.4（C-2，6），123.2（C-1），116.5（C-3，5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本一致，故鑒定為對羥基苯甲酸。

化合物10白色粉末 （二氯甲烷-甲醇）；ESIMS m/z 166.8[M-H]+。1H-NMR（C5D5N，300 MHz）δ：8.17（1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6），8.08（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），7.30（1H，d，J=8.1 Hz，H-5），3.74（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（C5D5N，75 MHz）δ：169.1（C=O），123.1（C-1），115.8（C-2），149.0（C-3），152.4（C-4），113.6（C-5），124.6（C-6），55.6（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]基本一致，故鑒定為3，4-二羥基苯甲酸甲酯。

化合物11白色粉末 （二氯甲烷-丙酮）；mp：138℃～139℃。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：8.60（1H，m，N-H），5.52（lH，m，H-2），4.63（1H，m，H-3），4.52（1H，m，H-4），4.44（1H，m，H-2′），4.37（1H，m，H-la），4.30（1H，m，H-lb），0.86（6H，m，H-18 and 24′），1.25-1.30（48H，m，H-13～17 and H-5′～23′）；13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：62.0（C-1），52.9（C-2），76.7（C-3），72.9（C-4），34.1（C-5），26.6（C-6），32.1（C-7），26.7（C-8），32.9（C-9），130.6（C-10），130.8（C-11），33.3（C-12），29.5～30.3（C-13～16），22.9（C-17），14.2（C-18），175.1（C-1′），72.4（C-2′），35.7（C-3′），25.8（C-4′），29.5～30.3（C-5′～22′），22.9（C-23′），14.2（C-24′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致，故鑒定為 （2S，3S，4R，10E）-2-[（2′R）-2′-hy-droxytetracosanoyl amino]-10-octadecene-1，3，4-triol。

4 討 論

潮風(fēng)草為民間藥用植物，功效與傳統(tǒng)中藥白薇類似。C21甾體類化合物為白薇的主要活性成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、退熱和抗腫瘤等藥理活性[12]。已有文獻(xiàn)報(bào)道，潮風(fēng)草含有C21甾體類化合物，但未見到相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道其他類化學(xué)成分。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)潮風(fēng)草的根莖乙醇提取物具有較好的抗炎作用，為了闡明其抗炎作用的基礎(chǔ)，本課題對潮風(fēng)草的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的研究，從其乙酸乙酯部位分離得到植物甾醇類、苯乙酮類、簡單有機(jī)酸類、五環(huán)三萜及神經(jīng)鞘脂類等各種不同類型的化合物。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，植物甾醇作為一種藥食同源的甾體類化合物具有明顯的免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用[13-14]，能夠調(diào)節(jié)輔助T細(xì)胞的免疫應(yīng)答[15]；與華北白前醇相同結(jié)構(gòu)類型的羽扇豆醇型三萜能夠明顯的抑制前列腺炎癥[16]；苯乙酮類及簡單有機(jī)酸類化合物能夠抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中TNF-α因子的表達(dá)，并呈現(xiàn)出較好的劑量依賴性[17-18]；表明潮風(fēng)草抗炎活性可能與其所含以上多種成分有關(guān)。本研究對潮風(fēng)草發(fā)揮抗炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了探討，為其合理的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

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Non-C21Steroidal Constituents from the Roots of Cynanchum ascyrifolium*

LIU Xiu-fen,DING Mei-ling,ZHANG Chao-feng**,ZHANG Mian,XU Xiang-hong
Research Department of Pharmacognosy,China Pharmaceutical University,Nanjing 211198

Objective:To study the non-C21steroidal constituents of Cynanchum ascyrifolium(Asclepi-adaceae)and clarify the material basis of anti-inflammatory effects.Methods:Various column chromato-graphic techniques were used to isolate and purify the chemical constituents,their physico-chemical prop-erties and spectral data were employed to elucidate their structures.Results:Eleven known compounds were isolated from the roots of C.ascyrifolium and identified as:hancockinol (1),4-hydroxyacetophenone (2),2,4-dihydroxyacetophenone(3),4-hydroxy-3-methoxy acetophenone(4),stigmast-4-en-6β-ol-3-one(5), 3β,5α,6β-trihydroxylated sterols(6),β-sitosterol (7),β-daucosterin(8),4-hydroxybenzoic acid(9)methyl 3,4-dihydroxy benzoate(10)and(2S,3S,4R,10E)-2-[(2′R)-2′-hydroxytetracosanoyl amino)-10-octadecene-1,3,4-triol(11).Conclusion:The contents of pentacyclic triterpenes and acetophenons are higher,they may be the anti-inflammatory constituents,and all these substance are isolated firstly from this species.

Asclepiadaceae;Cynanchum ascyrifolium;Acetophenones;Phytosterols

R284.2

A

1673-7806（2015）02-123-04

國家新藥創(chuàng)新重大項(xiàng)目中藥化學(xué)成分庫建設(shè)（No.2011ZX09307-002-02）

劉秀芬，女，碩士 E-mail:lxf3897@126.com

* *通訊作者張朝鳳，女，副研究員 E-mail:njchaofeng@126.com

2015-01-14

2015-01-28?