• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    耐貯型番茄子葉再生體系建立及優(yōu)化

    2014-01-14 02:38:04李文楓李景富許向陽(yáng)張賀
    關(guān)鍵詞:子葉品系番茄

    李文楓,李景富,許向陽(yáng),張賀

    (東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,哈爾濱 150030)

    耐貯型番茄子葉再生體系建立及優(yōu)化

    李文楓,李景富*,許向陽(yáng),張賀

    (東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,哈爾濱 150030)

    以耐貯型番茄08076和09836為試驗(yàn)材料,利用葉盤(pán)法以子葉為外植體,對(duì)不同濃度激素組合和基因型影響再生體系不定芽分化和再分化因素進(jìn)行探討,優(yōu)化激素組合濃度并建立耐貯型番茄高效再生體系。結(jié)果表明,最佳分化培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1,最佳再分化培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg·L-1+IAA 0.75·L-1;不同基因型番茄的再生體系性狀表現(xiàn)差異,其中平均出芽數(shù)差異顯著。

    耐貯型番茄;子葉;再生體系

    番茄(Lycopersicuf esculentumMill)是世界上重要的蔬菜作物之一。含有rin或nor基因的番茄品系具有耐貯藏、適合運(yùn)輸和延長(zhǎng)貨架期特點(diǎn),但這一特性常與果實(shí)品質(zhì)下降相關(guān)聯(lián),其中最主要的番茄紅素含量降低[1-2]。

    本文提出以含rin、nor基因耐貯型番茄為受體材料,通過(guò)基因工程手段,將番茄高色素hp2基因轉(zhuǎn)化到受體材料中,以有效提高番茄紅素含量,選育既耐貯藏又具有優(yōu)良商品性的番茄品種。但含rin、nor基因番茄材料為受體材料的再生體系尚未見(jiàn)報(bào)道,建立完善高效的耐貯型番茄再生體系尤為重要。

    番茄屬于雙子葉植物,近年來(lái),研究者多以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,以子葉或下胚軸為外植體[3-5],采用生長(zhǎng)素6-BA和細(xì)胞分裂素IAA或激動(dòng)素ZT組合對(duì)番茄再生體系進(jìn)行研究[6-8]。本研究以6-BA和IAA為主要研究因子,獲得適合耐貯型番茄子葉再生體系的最佳濃度激素組合,為耐貯型番茄基因工程育種提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 植物材料

    供試番茄材料08076和09836由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)番茄研究所提供。材料是該研究所通過(guò)傳統(tǒng)育種方式,利用rin、nor基因分別改善優(yōu)良品種獲得的新耐貯型番茄材料。其中番茄品系08076含有遲熟rin基因,番茄品系09836含有成熟抑制nor基因。

    1.1.2 試驗(yàn)試劑

    MS(Murashige and Skoog)粉購(gòu)自荷蘭Duchefa公司;6-BA、IAA購(gòu)自Sigma公司;蔗糖、瓊脂為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

    1.2 方法

    1.2.1 番茄種子表面消毒和無(wú)菌苗的培養(yǎng)

    取籽粒飽滿的番茄種子,用20%NaClO消毒15 min,無(wú)菌水洗3次,在滅菌的干燥濾紙上吸干殘液,種子間隔5 mm均勻接種到無(wú)菌苗培養(yǎng)基(1/2MS基本培養(yǎng)基,pH 5.8,瓊脂0.7%)上;在28℃黑暗條件下培養(yǎng)3~5 d,以胚根露出2~3 mm時(shí)移至人工培養(yǎng)箱光下繼續(xù)培養(yǎng),光照條件每天16 h,光照強(qiáng)度1 600~1 800 lx,培養(yǎng)溫度為(26±1)℃,至無(wú)菌苗子葉展開(kāi)真葉分化一心時(shí),備用。

    1.2.2 愈傷組織的誘導(dǎo)及不定芽分化

    采用葉盤(pán)法以MS為基本培養(yǎng)基(pH 5.8,瓊脂0.7%),附加不同濃度的細(xì)胞分裂素(6-BA)和生長(zhǎng)素(IAA)。將6-BA濃度(1.0 mg·L-1,1.5 mg·L-1,2.0 mg·L-1)與IAA濃度(0.2 mg·L-1,0.5 mg·L-1,0.75 mg·L-1)設(shè)置9個(gè)組合(見(jiàn)表1)。每處理組合使用20個(gè)葉塊,設(shè)置3次重復(fù)。

    表1 不同濃度激素組合Table 1 Different concentrations of the hormone combination

    具體操作為切除子葉葉尖和葉柄后,在最寬處縱切一刀,切成5 mm×5 mm的葉塊,間隔1 cm均勻地接種到培養(yǎng)基上,每周繼代一次;將其放到光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng),溫度(26±1)℃,光照每天16 h,光照強(qiáng)度1 600~1 800 lx;接種21 d后統(tǒng)計(jì)愈傷數(shù),接種40 d后統(tǒng)計(jì)出芽數(shù)和出芽總數(shù),計(jì)算愈傷率、分化率和平均出芽數(shù)。

    愈傷率(%)=有愈傷組織形成的外植體數(shù)/接種外植體數(shù)×100%;分化率(%)=有芽形成的外植體數(shù)/有愈傷的外植體數(shù)×100%;平均出芽數(shù)=總出芽數(shù)/有芽形成的外植體數(shù)。

    1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    采用Excel 2007對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和作圖,DPS 7.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同濃度激素組合對(duì)不定芽分化的影響

    方差和多重比較分析表明,不同濃度的6-BA和IAA激素組合分別對(duì)番茄品系08076和09836不定芽愈傷率性狀存在極顯著差異(見(jiàn)表2,圖1)。

    番茄品系08076在6-BA 1.5 mg·L-1+IAA 0.5 mg·L-1、6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.5 mg·L-1和6-BA 1.5 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1激素組合水平下愈傷率較低(≤90%),其中6-BA 1.5 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1激素組合水平下番茄品系08076愈傷率最低為88.33%。其他激素組合水平對(duì)番茄品系08076愈傷率均較高(95%~100%),在愈傷率性狀上差異不顯著;番茄品系09836在6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.5mg·L-1和6-BA 1.5 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1激素組合水平下愈傷率較低(≤90%),其中6-BA 1.5 mg·L-1+ IAA 0.2 mg·L-1激素組合水平下番茄品系09836愈傷率最低為88.33%。其他激素組合水平愈傷率均較高(95%~100%),除6-BA 1.5 mg·L-1+IAA 0.5 mg·L-1外在愈傷率性狀上差異不顯著。同時(shí)表明,6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1激素組合水平下番茄品系08076和09836愈傷率均最高達(dá)100%。

    表2 不同濃度激素組合對(duì)番茄品系08076和09836出愈率和分化率的影響Table 2 Effect of different concentration medium of 6-BA and IAA on frequency of callus and buds formation in tomato 08076 and 09836

    圖1 不同濃度激素組合對(duì)番茄品系08076和09836愈傷率的影響Fig.1 Effect of different hormone combinations on calli frequency from 08076 and 09836

    2.2 不同濃度激素組合對(duì)不定芽再分化的影響

    通過(guò)方差和多重比較分別分析不定芽再分化的兩個(gè)指標(biāo),不定芽分化率和平均出芽數(shù)。

    不同濃度的6-BA和IAA激素組合分別對(duì)番茄品系08076和09836不定芽分化率性狀均存在顯著差異(見(jiàn)表2,圖2)。番茄品系08076在6-BA 2.0 mg·L-1+IAA 0.75 mg·L-1、6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1和6-BA 2.0 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1激素組合水平上不定芽分化率較低(≤89.74%),其中6-BA 2.0 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1激素組合水平下番茄品系08076分化率最低為86.3%。其他激素組合水平分化率均較高(92.59%~98.25%),在不定芽分化率性狀上差異不顯著;番茄品系09836在6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1、6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.5 mg·L-1、6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.75 mg·L-1和6-BA 2.0 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1激素組合水平上不定芽分化率偏低(≤89.65%),其中6-BA 1.0 mg·L-1+ IAA 0.2 mg·L-1分化率最低為83.33%。其他激素組合水平分化率均較高(92.88%~100%),在不定芽分化率性狀上差異不顯著。同時(shí)表明,6-BA 1.5 mg·L-1+ IAA 0.75 mg·L-1激素組合水平下番茄品系08076和09836分化率最高,分別為98.25%和100%。

    圖2 不同濃度激素組合分別對(duì)番茄品系08076和09836分化率的影響Fig.2 Effect of different hormone combinations on differentiation frequency from 08076 and 09836

    不同濃度的6-BA和IAA激素組合對(duì)番茄品系08076和09836平均出芽數(shù)性狀均存在極顯著差異(見(jiàn)表2,圖3)。

    品系08076平均出芽數(shù)大于5的激素組合處理1個(gè),平均出芽數(shù)介于4~5的激素組合處理2個(gè),平均出芽數(shù)介于3~4的激素組合處理3個(gè),平均出芽數(shù)介于2~3的激素組合處理3個(gè);品系09836平均出芽數(shù)大于6的激素組合處理1個(gè),平均出芽數(shù)介于4~5的激素組合處理2個(gè),平均出芽數(shù)介于3~4的激素組合處理5個(gè),平均出芽數(shù)介于2~3的激素組合處理1個(gè)。同時(shí)表明,在對(duì)番茄品系08076和09836平均出芽數(shù)最高的3個(gè)激素組合水平中,IAA濃度均為0.75 mg·L-1,并以6-BA 1.5 mg·L-1+ IAA 0.75 mg·L-1平均出芽數(shù)最高。

    圖3 不同濃度激素組合對(duì)番茄品系08076和09836平均出芽數(shù)的影響Fig.3 Effect of different hormone combinations on average number of buds from 08076 and 09836

    2.3 不同基因型對(duì)番茄再生體系性狀的影響

    在相同培養(yǎng)條件下,對(duì)08076和09836兩個(gè)基因型再生體系性狀愈傷率、分化率和平均出芽數(shù)的數(shù)據(jù)進(jìn)行整體方差分析。由表3可知,6-BA和IAA濃度對(duì)08076和09836在愈傷率、分化率和平均出芽數(shù)性狀上F值存在差異,前兩者未達(dá)顯著水平,但平均出芽數(shù)性狀表現(xiàn)顯著性差異。進(jìn)而對(duì)平均出芽數(shù)采用新復(fù)極差法分析,表明09836平均出芽數(shù)(3.81±1.14aA)顯著高于08076平均出芽數(shù)(3.58±1.12bA)??膳卸ɑ蛐褪菦Q定不定芽再分化階段的因素之一。

    表3 不同處理間08076和09836再生體系性狀的方差分析Table 3 Analysis variance of 08076 and 09836 regeneration with different treatments

    3 討論與結(jié)論

    番茄不同基因型間不定芽的愈傷率和分化率有所不同[4,8-9]。本研究通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在相同培養(yǎng)條件下番茄品系08076和09836不定芽分化和再分化各性狀數(shù)值不同且獲得高頻再生體系,本試驗(yàn)中,兩品系的不定芽分化率最低值為86%,從栽培角度分析分化率較高的原因可能與其分杈能力強(qiáng)有關(guān)系,可進(jìn)一步從基因角度研究其不定芽分化率和平均出芽數(shù)較高的原因。

    平均出芽數(shù)性狀作為再生體系優(yōu)化的重要指標(biāo)之一,多數(shù)研究者在考查再生體系指標(biāo)中明確了平均出芽數(shù)的重要性[9-10],以平均出芽數(shù)多的材料為優(yōu),但是針對(duì)不同基因型在數(shù)據(jù)處理上未進(jìn)行方差分析。利用品種間差異針對(duì)不同激素濃度組合,發(fā)現(xiàn)08076和09836處理間對(duì)平均出芽數(shù)產(chǎn)生顯著差異,說(shuō)明不同基因型番茄可能對(duì)再生體系中再分化階段具有顯著影響。針對(duì)不同基因型番茄品種的再生體系進(jìn)行研究,再分化階段應(yīng)是研究重點(diǎn),尤其平均出芽數(shù)指標(biāo)不可或缺。利用方差分析同樣驗(yàn)證09836的再生體系性狀均高于或顯著高于08076,番茄品系09836更適于作為遺傳轉(zhuǎn)化及相關(guān)研究的材料。

    優(yōu)化再生體系可構(gòu)建更適合工業(yè)生產(chǎn)的激素濃度組合。通過(guò)優(yōu)化激素濃度最終確定番茄品系08076和09836的高頻再生體系以MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1為不定芽分化培養(yǎng)基,MS+ 6-BA 1.5 mg·L-1+IAA 0.75 mg·L-1為不定芽再分化培養(yǎng)基,為小濃度變化的激素水平組合篩選提供有力保障,達(dá)到預(yù)期試驗(yàn)結(jié)果起到優(yōu)化作用。同時(shí)發(fā)現(xiàn)針對(duì)番茄品系08076和09836在分化和再分化過(guò)程中可考慮使用同一激素水平(6-BA 1.5 mg·L-1+ IAA 0.75 mg·L-1),均產(chǎn)生較高的愈傷率、分化率和平均出芽數(shù),可再進(jìn)一步細(xì)化激素濃度得到更適合工業(yè)化生產(chǎn)組培苗的再生體系培養(yǎng)基。

    [1]薛玉梅,穆欣,許明,等.含遲熟基因rin的番茄果實(shí)貨架壽命相關(guān)性狀的研究[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào),2007,22(4):104-107.

    [2]陸春貴,徐鶴林,楊榮昌,等.含耐貯基因蕃茄的貯藏生理特性及在育種上的應(yīng)用[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),1994,10(3):5-10.

    [3]Poonam B,Nanjappa A,Senaratna T.Tissue culture studies of to?mato(Lycopersicon esculentum)[J].Plant Cell,Tissue and Organ Culture,2004,78:1-21.

    [4]張麗華,程智慧,李海燕,等.加工番茄子葉和下胚軸離體植株再生的研究[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2006,34 (7):106-110.

    [5]葉志彪,李漢霞,周?chē)?guó)林.番茄子葉離體培養(yǎng)與再生成株[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1994,13(3):291-295.

    [6]趙歌,王謹(jǐn),儲(chǔ)榮華,等.番茄子葉不定芽分化的初探[J].北方園藝,2010(4):150-153.

    [7]Charjee.B,Mohanand M,Nair S.Transformation of chickpea:Ef?fect of genotype,explant,Agrobacterium-strain and composition of culture medium[J].Biologia Plantarum,2010,54(1):21-32.

    [8]王傲雪,趙越,陳秀玲,等.不同激素組合對(duì)番茄芽分化率的影響[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2013,44(7):85-90.

    [9]王金杰,王志英,徐香玲.影響番茄離體培養(yǎng)再生的主要因素探討[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2009,40(11):28-32.

    [10]楊學(xué)習(xí),張振臣,蔣士君.番茄子葉再生系統(tǒng)的初步研究[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2003(3):26-28.

    Establish and optimize of plant regeneration system of long storage tomato cotyledon explants

    LI Wenfeng,LI Jingfu,XU xiangyang,ZHANG He(School of Horticulture,NortheastAgricultural University,Harbin 150030,China)

    In this research,we used long storage tomato genotype 08076 and 09836 as experiment materials,and leaf disc method to analyze different hormone concentrations,genotype affected to plant regeneration and redifferentiation,and optimize the combination of different hormone concentrations.The results showed that the best medium for regeneration was MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1,and the best medium for redifferentiation was MS+6-BA 1.5 mg·L-1+IAA 0.75 mg·L-1;the average budding number performance significant different from genotype on regeneration system.

    long storage tomato;cotyledons;regeneration system

    X836

    A

    1005-9369(2014)02-0024-05

    時(shí)間2014-1-17 16:41:47[URL]http://www.cnki.net/kcms/detail/23.1391.S.20140117.1641.016.html

    李文楓,李景富,許向陽(yáng),等.耐貯型番茄子葉再生體系建立及優(yōu)化[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2014,45(2):24-28.

    Li Wenfeng,Li Jingfu,Xu Xiangyang,et al.Establish and optimize of plant regeneration system of long storage tomato cotyledon explants[J].Journal of Northeast Agricultural University,2014,45(2):24-28.(in Chinese with English abstract)

    2012-10-12

    國(guó)家十二五科技支撐計(jì)劃(2012BAD02B02)

    李文楓(1982-),女,博士,研究方向?yàn)槭卟朔N質(zhì)資源創(chuàng)新及生物工程。E-mail:lwfangel@163.com

    李景富,教授,博士生導(dǎo)師,研究方向?yàn)槭卟俗魑镞z傳育種及生物技術(shù)。E-mail:Ljf-2005@126.com

    猜你喜歡
    子葉品系番茄
    貴州黑山羊新品系選育
    10個(gè)團(tuán)豆新品系在綏陽(yáng)縣的田間性狀及產(chǎn)量表現(xiàn)
    番茄炒蛋
    秋茬番茄“疑難雜癥”如何挽救
    懸鈴木幼苗的初生維管系統(tǒng)演化結(jié)構(gòu)研究
    黑山羊胎盤(pán)子葉性狀結(jié)構(gòu)與繁殖性能的相關(guān)性
    番茄果實(shí)“起棱”怎么辦
    4個(gè)地被菊新品系對(duì)濕熱脅迫的耐受性研究
    園林科技(2020年2期)2020-01-18 03:28:18
    投籃高手
    湖北省白肋煙新品系比較研究
    作物研究(2014年6期)2014-03-01 03:39:03
    最新中文字幕久久久久| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲在久久综合| 国产精品熟女久久久久浪| 五月天丁香电影| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产日韩欧美在线精品| 黄片无遮挡物在线观看| 久久久久国产网址| 永久免费av网站大全| 日日撸夜夜添| 久久久久九九精品影院| av在线老鸭窝| 边亲边吃奶的免费视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 成人综合一区亚洲| 九九在线视频观看精品| 国产精品av视频在线免费观看| 午夜亚洲福利在线播放| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 网址你懂的国产日韩在线| 女人久久www免费人成看片| 身体一侧抽搐| 日韩精品有码人妻一区| 少妇的逼好多水| 亚洲av一区综合| 日韩欧美精品免费久久| 国产中年淑女户外野战色| 99热这里只有精品一区| 国产在线男女| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲国产高清在线一区二区三| av在线亚洲专区| tube8黄色片| 国产亚洲精品久久久com| 午夜免费鲁丝| 欧美精品国产亚洲| 亚洲天堂av无毛| 午夜日本视频在线| 在线观看一区二区三区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 中文欧美无线码| 我的老师免费观看完整版| 亚洲成人av在线免费| 久久鲁丝午夜福利片| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久久久久国产电影| 久久99热6这里只有精品| 在线 av 中文字幕| 嫩草影院入口| 少妇被粗大猛烈的视频| 黄片无遮挡物在线观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 午夜老司机福利剧场| 日本与韩国留学比较| 在线免费观看不下载黄p国产| 午夜日本视频在线| 亚洲综合精品二区| 日韩欧美精品v在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产成人精品一,二区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 2022亚洲国产成人精品| 国产成人a区在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 99热这里只有精品一区| av一本久久久久| av福利片在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 丰满乱子伦码专区| 中文天堂在线官网| 色视频在线一区二区三区| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲四区av| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 黄色一级大片看看| 简卡轻食公司| 精品久久久久久久久av| 国产成人精品久久久久久| 欧美高清性xxxxhd video| 国产免费视频播放在线视频| 99热网站在线观看| 精品酒店卫生间| 99热这里只有精品一区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 黄色一级大片看看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 一级片'在线观看视频| 各种免费的搞黄视频| 亚洲成人一二三区av| 免费看a级黄色片| 久久久久精品性色| 日本午夜av视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 各种免费的搞黄视频| 成人亚洲精品一区在线观看 | 美女被艹到高潮喷水动态| 久久精品久久久久久久性| 毛片女人毛片| 亚洲精品国产成人久久av| 日本wwww免费看| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 少妇裸体淫交视频免费看高清| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 日本av手机在线免费观看| 99热国产这里只有精品6| 久久99精品国语久久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 99热这里只有精品一区| 春色校园在线视频观看| 视频中文字幕在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产免费一级a男人的天堂| 国产黄片美女视频| www.av在线官网国产| 亚洲av不卡在线观看| 91精品国产九色| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 91精品国产九色| 极品教师在线视频| 免费看av在线观看网站| 99热这里只有是精品在线观看| 午夜激情福利司机影院| 色视频www国产| 国产精品蜜桃在线观看| 干丝袜人妻中文字幕| 特大巨黑吊av在线直播| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲av成人精品一区久久| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 真实男女啪啪啪动态图| 精品一区二区三卡| 国产欧美日韩精品一区二区| 日本熟妇午夜| 国产有黄有色有爽视频| 成人毛片a级毛片在线播放| av网站免费在线观看视频| 91久久精品电影网| 欧美精品一区二区大全| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 99热国产这里只有精品6| 国产成人91sexporn| 九色成人免费人妻av| 色哟哟·www| 男女边吃奶边做爰视频| 激情五月婷婷亚洲| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美成人一区二区免费高清观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 精品人妻熟女av久视频| 最近的中文字幕免费完整| 国产成人a区在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 亚洲,一卡二卡三卡| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品久久久久久av不卡| 国产精品精品国产色婷婷| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久久久久久午夜电影| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲国产精品专区欧美| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产黄a三级三级三级人| 我要看日韩黄色一级片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 免费大片18禁| 69av精品久久久久久| 插阴视频在线观看视频| 99久国产av精品国产电影| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品99久久99久久久不卡 | 网址你懂的国产日韩在线| 免费av不卡在线播放| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产精品人妻久久久影院| 观看美女的网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 青春草亚洲视频在线观看| 综合色丁香网| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲精品一二三| 全区人妻精品视频| 午夜福利在线在线| 99热国产这里只有精品6| 久久久国产一区二区| av在线播放精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 又爽又黄a免费视频| 成人欧美大片| 久久久久国产网址| 国产精品一区二区性色av| 久久久亚洲精品成人影院| 99久久精品热视频| 色哟哟·www| 国产免费视频播放在线视频| 国产美女午夜福利| 国产爽快片一区二区三区| 乱码一卡2卡4卡精品| 欧美+日韩+精品| 免费观看av网站的网址| 久久热精品热| 日韩人妻高清精品专区| 国产精品无大码| 精品久久久久久久久亚洲| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 亚洲人成网站在线播| 国产久久久一区二区三区| 黄色欧美视频在线观看| 看免费成人av毛片| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 成人国产麻豆网| av一本久久久久| 嫩草影院入口| 99热全是精品| 伊人久久国产一区二区| 国产精品人妻久久久久久| 免费av观看视频| 大香蕉久久网| 亚洲国产日韩一区二区| 国产有黄有色有爽视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产视频首页在线观看| 能在线免费看毛片的网站| a级毛色黄片| 国产一区有黄有色的免费视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 看免费成人av毛片| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 黄片wwwwww| 国产男人的电影天堂91| 在线观看免费高清a一片| 日韩 亚洲 欧美在线| 新久久久久国产一级毛片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 在线看a的网站| 五月伊人婷婷丁香| 五月玫瑰六月丁香| 久久韩国三级中文字幕| 免费看av在线观看网站| 国产日韩欧美在线精品| 日本免费在线观看一区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产v大片淫在线免费观看| 青春草视频在线免费观看| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品日韩av片在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产淫片久久久久久久久| 免费黄频网站在线观看国产| 黄色欧美视频在线观看| av.在线天堂| 日日撸夜夜添| 亚洲精品久久午夜乱码| 秋霞在线观看毛片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| h日本视频在线播放| 美女主播在线视频| 久久久久久国产a免费观看| 一级毛片我不卡| 高清在线视频一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品福利在线免费观看| 一级二级三级毛片免费看| 成年免费大片在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 夫妻午夜视频| 亚洲人与动物交配视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 精品视频人人做人人爽| 亚洲在久久综合| 高清午夜精品一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 卡戴珊不雅视频在线播放| 成人二区视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产精品三级大全| 免费黄色在线免费观看| 欧美潮喷喷水| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产男人的电影天堂91| 男人爽女人下面视频在线观看| 免费人成在线观看视频色| 国产爱豆传媒在线观看| 综合色av麻豆| 国产乱来视频区| 熟女av电影| 亚洲av中文av极速乱| 国产亚洲最大av| 99热6这里只有精品| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲欧洲日产国产| 欧美xxxx性猛交bbbb| 中文资源天堂在线| 欧美三级亚洲精品| 亚洲av免费在线观看| 亚洲四区av| videos熟女内射| 成人亚洲欧美一区二区av| 99久久精品热视频| av卡一久久| 久久精品国产a三级三级三级| 成年版毛片免费区| av在线观看视频网站免费| 国产黄色免费在线视频| 精品一区在线观看国产| 久久99热6这里只有精品| 内射极品少妇av片p| 99热国产这里只有精品6| 一级毛片我不卡| 一级毛片aaaaaa免费看小| 男女边摸边吃奶| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 亚洲成人av在线免费| 久久久久久久久大av| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 国产黄色免费在线视频| 黄色怎么调成土黄色| 香蕉精品网在线| 十八禁网站网址无遮挡 | 少妇的逼水好多| 亚洲成人精品中文字幕电影| 嫩草影院入口| 亚洲三级黄色毛片| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产一区亚洲一区在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久久精品免费免费高清| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日本爱情动作片www.在线观看| 97在线人人人人妻| 国内精品美女久久久久久| 日韩三级伦理在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 在线观看人妻少妇| 日韩欧美 国产精品| 中国国产av一级| 成人亚洲精品av一区二区| 免费观看在线日韩| 激情五月婷婷亚洲| 久久久久久久大尺度免费视频| 老司机影院毛片| 欧美国产精品一级二级三级 | 亚洲国产高清在线一区二区三| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲精品第二区| 天天一区二区日本电影三级| 高清日韩中文字幕在线| 97精品久久久久久久久久精品| 色综合色国产| 黑人高潮一二区| 成年免费大片在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 国产一区二区在线观看日韩| 日韩强制内射视频| 日本wwww免费看| 色网站视频免费| 一级av片app| 欧美 日韩 精品 国产| 国产精品一及| 精品久久国产蜜桃| 日韩制服骚丝袜av| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 哪个播放器可以免费观看大片| 美女内射精品一级片tv| 精品久久久噜噜| av在线观看视频网站免费| 一区二区三区免费毛片| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲精品,欧美精品| 日韩欧美精品免费久久| 午夜免费观看性视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 精品久久久久久久末码| 日韩欧美一区视频在线观看 | 亚洲精品国产av蜜桃| 九九在线视频观看精品| 欧美另类一区| 亚洲不卡免费看| av网站免费在线观看视频| 国产av国产精品国产| 国产高清三级在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久久精品欧美日韩精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产精品99久久99久久久不卡 | 激情五月婷婷亚洲| 国产一级毛片在线| h日本视频在线播放| 高清日韩中文字幕在线| 午夜爱爱视频在线播放| 岛国毛片在线播放| av免费在线看不卡| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久久久国产网址| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 少妇 在线观看| 国产黄片美女视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 久久99热6这里只有精品| 老司机影院毛片| 久久影院123| 久久久久久久亚洲中文字幕| 一区二区三区精品91| 最近手机中文字幕大全| 特级一级黄色大片| 在线观看三级黄色| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产成人精品久久久久久| 青青草视频在线视频观看| 国产色爽女视频免费观看| 午夜福利在线在线| 婷婷色综合www| 久久久欧美国产精品| 免费av毛片视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 精品熟女少妇av免费看| 国产高清有码在线观看视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 少妇丰满av| 国产视频内射| 成年女人看的毛片在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲色图综合在线观看| a级毛色黄片| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久久久精品精品| av专区在线播放| 久久久成人免费电影| 国产精品一区www在线观看| 国产av码专区亚洲av| 久久99热这里只频精品6学生| a级一级毛片免费在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久99蜜桃精品久久| 乱系列少妇在线播放| av.在线天堂| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲,欧美,日韩| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 中文在线观看免费www的网站| 街头女战士在线观看网站| 国产中年淑女户外野战色| 日本-黄色视频高清免费观看| 精品久久久久久久末码| 国产成人一区二区在线| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 精华霜和精华液先用哪个| 最近2019中文字幕mv第一页| 最近中文字幕2019免费版| 大片免费播放器 马上看| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美一区二区亚洲| 黄色欧美视频在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产一区二区三区av在线| a级毛色黄片| 中文天堂在线官网| 国产在视频线精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 最近中文字幕高清免费大全6| 青春草视频在线免费观看| 99热全是精品| 丰满少妇做爰视频| 久久99热这里只频精品6学生| 黄色欧美视频在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产成人freesex在线| 国产成人免费观看mmmm| 尾随美女入室| 亚洲精品乱久久久久久| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久热精品热| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产伦在线观看视频一区| 嫩草影院精品99| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 黄片wwwwww| 国产人妻一区二区三区在| 成年女人看的毛片在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 免费看a级黄色片| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 看免费成人av毛片| 国产亚洲91精品色在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 97超视频在线观看视频| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲精品日韩av片在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 插逼视频在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 免费黄网站久久成人精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产免费视频播放在线视频| 不卡视频在线观看欧美| 各种免费的搞黄视频| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品一及| 又爽又黄无遮挡网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 免费大片18禁| av在线亚洲专区| 免费av毛片视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| www.色视频.com| 美女视频免费永久观看网站| 日韩欧美精品v在线| 久久国内精品自在自线图片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲国产色片| 黄色日韩在线| 精品久久久精品久久久| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 天天躁日日操中文字幕| 91精品一卡2卡3卡4卡| 偷拍熟女少妇极品色| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 成人国产av品久久久| av在线亚洲专区| 日韩制服骚丝袜av| 直男gayav资源| 国产高潮美女av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| www.av在线官网国产| 美女内射精品一级片tv| 成人免费观看视频高清| av又黄又爽大尺度在线免费看| 免费黄频网站在线观看国产| 看非洲黑人一级黄片| 欧美成人午夜免费资源| 中文欧美无线码| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产免费一级a男人的天堂| 国产 精品1| av天堂中文字幕网| 最后的刺客免费高清国语| 赤兔流量卡办理| 亚洲av一区综合| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产爱豆传媒在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 嫩草影院新地址| kizo精华| 免费大片18禁| 秋霞伦理黄片| 日韩强制内射视频| 在线免费观看不下载黄p国产| av播播在线观看一区| 嘟嘟电影网在线观看| 熟女电影av网| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 听说在线观看完整版免费高清| 国产精品国产av在线观看| 综合色丁香网| 亚洲在久久综合| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 免费大片黄手机在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| av在线观看视频网站免费| 国产淫片久久久久久久久| 国产黄频视频在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产精品福利在线免费观看| 中文在线观看免费www的网站|