豬O型口蹄疫疫苗免疫抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)研究

項(xiàng)朝榮，王儒磊，趙建東，衛(wèi)陸梅，衛(wèi)一新，惠永華

(1.濟(jì)源市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南濟(jì)源 459000；2.濟(jì)源市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南濟(jì)源 459000)

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豬O型口蹄疫疫苗免疫抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)研究

項(xiàng)朝榮1，王儒磊2，趙建東1，衛(wèi)陸梅1，衛(wèi)一新1，惠永華2

(1.濟(jì)源市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南濟(jì)源 459000；2.濟(jì)源市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南濟(jì)源 459000)

[目的] 掌握豬O型口蹄疫疫苗免疫后的抗體消長(zhǎng)規(guī)律。[方法] 應(yīng)用豬O型口蹄疫滅活疫苗1、滅活疫苗2和合成肽疫苗對(duì)198頭試驗(yàn)豬進(jìn)行至少2次免疫，定期采血后用液相阻斷ELISA檢測(cè)方法測(cè)定免疫前后抗體效價(jià)。[結(jié)果] 在首次免疫時(shí)，疫苗免疫效果受母源抗體的干擾較大；仔豬首免后抗體很難達(dá)到完全保護(hù)(大于6log2)水平，應(yīng)適當(dāng)縮短首免與二免的間隔時(shí)間，盡量減少免疫空白期；合成肽疫苗的首免效果較滅活疫苗好，首次免疫推薦使用合成肽疫苗；如果生豬飼養(yǎng)周期過長(zhǎng)，免疫2次的生豬出欄時(shí)抗體不能達(dá)到完全保護(hù)水平；規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬的母源抗體水平低于散養(yǎng)戶，隨著試驗(yàn)豬日齡的增加和免疫的加強(qiáng)，規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬的免疫抗體滴度逐漸高于散養(yǎng)戶。[結(jié)論] 該研究可為研究豬O型口蹄疫抗體變化和制定豬O型口蹄疫疫苗的免疫程序提供參考和借鑒。

豬O型口蹄疫；疫苗免疫；抗體檢測(cè)；抗體消長(zhǎng)；分析

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒引起偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病傳播速度快，感染率高，對(duì)社會(huì)及國(guó)際貿(mào)易危害嚴(yán)重，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為A類動(dòng)物傳染病之首。我國(guó)是受口蹄疫危害的國(guó)家之一，也是世界上最大的豬肉生產(chǎn)國(guó)和消費(fèi)國(guó)。豬口蹄疫防控是我國(guó)動(dòng)物疫病防控的重中之重。為了制定科學(xué)免疫程序，有效防控該病，筆者對(duì)豬O型口蹄疫疫苗的免疫抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)進(jìn)行了檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)豬為母豬免疫背景基本一致的仔豬198頭，選自河南省濟(jì)源市6個(gè)生豬規(guī)模場(chǎng)和9個(gè)散養(yǎng)戶。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1疫苗。疫苗購(gòu)自河南省政府招標(biāo)的3個(gè)疫苗廠家，疫苗批號(hào)分別為：2136002、2136012、2136034；H120742J、H120743J；20120501、20120611、20120705。所用疫苗均由濟(jì)源市畜牧局提供。

1.2.2檢測(cè)試劑?？谔阋咭合嘧钄郋LISA檢測(cè)試劑，批號(hào)為2012102901，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3 試驗(yàn)場(chǎng)地動(dòng)物免疫接種試驗(yàn)在各養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)完成，血清學(xué)試驗(yàn)在濟(jì)源市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室完成。

1.4 試驗(yàn)方法198頭試驗(yàn)豬分為3大組、9小組，第1大組的72頭規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬分別用豬O型口蹄疫滅活疫苗1、滅活疫苗2和合成肽疫苗進(jìn)行2次免疫，第2大組的72頭規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬分別用豬O型口蹄疫滅活疫苗1、滅活疫苗2和合成肽疫苗進(jìn)行3次免疫，第3大組的54頭散養(yǎng)戶試驗(yàn)豬分別用豬O型口蹄疫滅活疫苗1、滅活疫苗2和合成肽疫苗進(jìn)行3次免疫，免疫方法與免疫劑量按照疫苗說明書進(jìn)行。試驗(yàn)豬從10日齡開始每月開展1次抗體檢測(cè)，跟蹤抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。

1.5 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定FMD抗體效價(jià)與保護(hù)性關(guān)系通常以3個(gè)區(qū)帶來表述[1]，小于3log2時(shí)為敏感帶(易受感染)，3log2～6log2時(shí)為灰色帶(不完全保護(hù)或部分保護(hù))，大于6log2時(shí)為保護(hù)帶(完全保護(hù))。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)豬疫苗免疫前后抗體消長(zhǎng)變化從表1可以看出，10日齡9個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度全部處于保護(hù)帶；37日齡(首免)，8個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度仍處于保護(hù)帶；68日齡(首免后31 d，二免)，只有1個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度處于保護(hù)帶，甚至有1個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度處于敏感帶；99日齡(二免后31 d)時(shí)，7個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度處于保護(hù)帶，2個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度處于灰色帶；125日齡(二免后57 d，部分組三免)時(shí)，9個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度全部處于保護(hù)帶；150日齡(部分組二免后82 d，部分組三免后25 d)時(shí)，9個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度全部處于保護(hù)帶。

表1 不同日齡試驗(yàn)豬抗體的平均滴度變化

2.2 不同疫苗廠家抗體消長(zhǎng)的比較從圖1可以看出，10日齡和37日齡未免疫疫苗時(shí)，3組試驗(yàn)豬平均抗體滴度基本一致；首免后31 d，3組試驗(yàn)豬平均抗體滴度均有所下降，但下降幅度差異較大，其中合成肽疫苗免疫豬抗體滴度下降幅度最小，不到1個(gè)滴度，滅活疫苗1免疫豬抗體滴度下降幅度最大，約4個(gè)滴度；此后幾次檢測(cè)，合成肽疫苗免疫豬抗體滴度一直高于滅活疫苗免疫豬。

圖1 不同廠家疫苗免疫試驗(yàn)豬的抗體滴度變化

2.3 不同免疫次數(shù)的抗體消長(zhǎng)比較從圖2可以看出，10日齡、37日齡、68日齡、99日齡和125日齡，2組試驗(yàn)豬平均抗體滴度基本一致；150日齡，免疫3次試驗(yàn)豬抗體滴度較25 d前略有上升，免疫2次試驗(yàn)豬抗體滴度較25 d前明顯下降。

圖2 不同免疫次數(shù)試驗(yàn)豬的抗體滴度變化

2.4 不同養(yǎng)殖類型抗體消長(zhǎng)的比較從圖3可以看出，10日齡、37日齡未免疫疫苗和68日齡首免后31 d，散養(yǎng)戶平均抗體滴度略高于規(guī)模場(chǎng)；99日齡、125日齡和150日齡，隨著試驗(yàn)豬的生長(zhǎng)和免疫次數(shù)增多，規(guī)模場(chǎng)平均抗體滴度略高于散養(yǎng)戶。

圖3 不同養(yǎng)殖類型試驗(yàn)豬的抗體滴度變化

3 討論

(1)該試驗(yàn)結(jié)果表明，仔豬首免后抗體下降明顯，說明在首次免疫時(shí)疫苗免疫效果受母源抗體干擾較大。據(jù)報(bào)道，母源抗體可從細(xì)胞免疫和體液免疫2個(gè)方面對(duì)疫苗免疫產(chǎn)生干擾[1]，其作用機(jī)理主要是加速抗原物質(zhì)的清除、對(duì)弱毒疫苗起中和作用、母源抗體對(duì)特異性抗原位點(diǎn)的“封閉”而阻止抗原位點(diǎn)與機(jī)體免疫相關(guān)細(xì)胞上的抗原受體結(jié)合等，從而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不能對(duì)抗原物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)。因此，在豬O型口蹄疫免疫中應(yīng)重視母源抗體對(duì)疫苗的干擾作用，選擇合適的時(shí)機(jī)進(jìn)行疫苗免疫。在實(shí)際生產(chǎn)中，當(dāng)母源抗體降至不完全保護(hù)水平時(shí)，對(duì)疫苗免疫效果的干擾較小，此時(shí)是接種疫苗的最佳時(shí)機(jī)。該試驗(yàn)結(jié)果表明，仔豬經(jīng)過1次免疫抗體很難達(dá)到完全保護(hù)水平，二免后抗體能達(dá)到完全保護(hù)水平且有效抗體持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。魏孔福等[2]2007年報(bào)道的O型口蹄疫疫苗免疫牛抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)的LPB-ELISA檢測(cè)結(jié)果也表明，畜群經(jīng)過1次免疫不能獲得良好的保護(hù)率，只有在一免后進(jìn)行加強(qiáng)免疫，才能達(dá)到預(yù)期目的。首免后至二免有效抗體產(chǎn)生以前仔豬處于免疫空白期，因此在生產(chǎn)中要適當(dāng)縮短首免與二免間隔時(shí)間，盡量減少免疫空白期。

(2)該試驗(yàn)結(jié)果表明合成肽疫苗免疫效果受母源抗體的干擾較滅活疫苗小，這與王文娟等[3]報(bào)道的豬O型口蹄疫滅活疫苗與合成肽疫苗免疫抗體水平的比較結(jié)果一致。豬O型口蹄疫合成肽疫苗是僅含免疫決定簇組分的小肽，由于不是全病毒，母源抗體對(duì)其干擾作用相對(duì)較小，首免后抗體滴度明顯高于滅活疫苗。由于首免基礎(chǔ)好，加強(qiáng)免疫后抗體滴度仍高于滅活疫苗。因此，仔豬首免使用合成肽疫苗可以達(dá)到較好的免疫效果，首次免疫推薦使用合成肽疫苗。

(3)該試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)豬二免后82 d抗體仍處于保護(hù)帶，但滅活疫苗組的抗體已接近保護(hù)帶與灰色帶的臨界線，與及時(shí)進(jìn)行三免的試驗(yàn)豬相比，平均抗體低將近2個(gè)滴度。在實(shí)際生產(chǎn)中，如果生豬飼養(yǎng)周期過長(zhǎng)，免疫2次的生豬出欄時(shí)抗體不能達(dá)到完全保護(hù)水平。因此，飼養(yǎng)周期超過180 d的生豬，應(yīng)在二免后60 d再免疫1次豬O型口蹄疫疫苗。

(4)不同養(yǎng)殖類型的比較結(jié)果表明，規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬母源抗體水平低于散養(yǎng)戶，仔豬母源抗體水平與母體特異抗體水平呈正相關(guān)[1]，此次選取的試驗(yàn)豬母豬免疫背景基本一致，規(guī)模場(chǎng)可能因?yàn)槟肛i批量免疫，免疫效果不如散養(yǎng)戶。在試驗(yàn)過程中規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶試驗(yàn)豬的疫苗免疫全部由試驗(yàn)人員親自完成，免疫日齡和免疫劑量一致，隨著試驗(yàn)豬日齡的增加和免疫的加強(qiáng)，規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬免疫抗體滴度逐漸高于散養(yǎng)戶，這可能與規(guī)模場(chǎng)的飼養(yǎng)管理水平較高有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

(5)由于受條件限制，此次試驗(yàn)采樣檢測(cè)間隔時(shí)間較長(zhǎng)，只能粗略掌握試驗(yàn)豬疫苗免疫前后抗體消長(zhǎng)規(guī)律，下一步將不斷完善研究數(shù)據(jù)，探索更詳細(xì)的抗體變化規(guī)律，更好為養(yǎng)殖場(chǎng)戶的豬O型口蹄疫免疫提供參考和指導(dǎo)。

[1] 高世杰，竇永喜，程愛華，等.母源抗體對(duì)豬口蹄疫疫苗免疫應(yīng)答的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，31(1)：45-48.

[2] 魏孔福，祁淑蕓，林密，等.O型口蹄疫疫苗免疫牛抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)的LPB-ELISA檢測(cè)[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2007，37(9)：787-790.

[3] 王文娟，鄧紅江，王群英，等.豬O型口蹄疫滅活疫苗與合成肽疫苗免疫抗體水平檢測(cè)[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2013，49(11)：41-42.

Dynamic Analysis of Immune Antibodies of Type O of Porcine Foot-and-mouth Disease Vaccine

XIANG Chao-rong1，WANG Ru-lei2，ZHAO Jian-dong1et al

(1.Jiyuan Animal Disease Control and Prevention Center, Jiyuan, Henan 459000；2.Jiyuan Animal Health Supervision Institute, Jiyuan, Henan 459000)

[Objective] The research aimed to grasp the dynamic change laws of antibody after the vaccine immunization of porcine type O foot-and-mouth disease.[Method] 198 test pigs were immunized for at least twice with inactivated vaccine, inactivated vaccine 2 and synthetic peptide vaccine of porcine type O FMD vaccine.After routine sampling, the immune antibody titer was determined by using liquid-phase blocking ELISA.[Result] In the first immunization, the interference of maternal antibody on the immune effect of the vaccine was larger.The antibody of piglets after the first immunization was difficult to achieve complete protection (more than 6log2).So the interval time between the first immunization and the second immunization should be reduced and the immune blank period should be reduced as possible.The first immunization effect of the synthetic peptide vaccine was better than that of inactivated vaccines.So the synthetic peptide vaccine was recommended to be used in the first immunization.If the breeding period of pigs was too long, the antibody level of marketing pigs immunized for twice couldn’t reach the complete protection level.The maternal antibody level of test pigs in large-scale pig farm was lower than that in scatter-raised farm.With the increasing age and immunization procedure of pigs, the immune antibody titer of test pigs in large-scale pig farm was gradually higher than that in scatter-raised farm.[Conclusion] The research could provide references for studying the antibody changes of porcine type O FMD and establishing the vaccine immunization program of porcine type O FMD.

Porcine type O foot-and-mouth disease; Vaccine immunization; Detection of antibody; Dynamic changes of antibody

項(xiàng)朝榮(1982-)，女，河南南陽人，獸醫(yī)師，碩士，從事動(dòng)物疫病防治。

2015-01-31

S 855

A

0517-6611(2015)08-109-03