艾灸對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠Th1/Th2漂移特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3的干預(yù)作用*

艾灸對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠Th1/Th2漂移特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3的干預(yù)作用*

★周志剛1顏春明2張學(xué)強3覃肯3郭業(yè)頻1*通信作者：郭業(yè)頻，男，副教授。(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院南昌 330004；2.葡萄牙傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)學(xué)院中醫(yī)系里斯本；3.江西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院南昌 330004)

摘要：目的：觀察艾灸對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠Th1/Th2漂移特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3的干預(yù)作用。方法：30只大鼠用弗氏佐劑進行造模，隨機分成模型組、艾灸組，西藥組三組，10只正常大鼠作為空白對照組，經(jīng)處理后，觀察T-bet和GATA-3的表達。結(jié)果：模型組大鼠的脾臟細胞中T-bet表達較正常組明顯增高，差異存在著顯著性意義(P<0.01)，艾灸組和西藥組T-bet表達升高，但差異無顯著性意義(P>0.05)；模型組大鼠的脾臟細胞中GATA-3表達較正常組降低，差異存在著顯著性意義(P<0.05)；艾灸和西藥組中脾臟細胞中GATA-3表達較正常組降低，但差異無顯著性意義(P>0.05)。結(jié)論：艾灸可能通過抑制RA大鼠T細胞向Th1細胞分化，降低T-bet轉(zhuǎn)錄，促進GATA3轉(zhuǎn)錄，調(diào)整Thl/Th2功能失衡達到治療目的。

關(guān)鍵詞：艾灸；T-bet；GATA-3；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎為主的慢性全身性自身免疫性疾病，其臨床表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹和疼痛、晨僵、畸形和功能損害，病理特征是關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥、血管翳形成，關(guān)節(jié)軟骨和骨組織的破壞[1]，我國RA患病率大約為0.33%，大多為女性，本病致殘率高，因RA的病因和發(fā)病機制尚不明確，目前對RA尚無特效治療治法。但大多學(xué)者認(rèn)為是遺傳因素、環(huán)境因素和免疫功能失調(diào)等各種因素綜合作用的結(jié)果?，F(xiàn)代研究已證明正常生理狀態(tài)下Th1與Th2細胞分化存在著一種動態(tài)平衡與交互抑制，Th1/Th2細胞分化的動態(tài)平衡一旦被打破，T細胞就會朝著Th1細胞分化占優(yōu)勢或Th2細胞分化占優(yōu)勢的“漂移狀態(tài)”發(fā)展，機體因此而發(fā)病。因此T細胞亞群Th1、Th2分化失衡被認(rèn)為是誘導(dǎo)RA發(fā)病的中心環(huán)節(jié)[2]。

研究已經(jīng)證明針灸具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛和免疫調(diào)節(jié)等作用，腧穴大多為足三里、脾俞、腎俞、大椎、命門等[3]。但艾灸法對RATh1/Th2漂移的干預(yù)實驗還鮮有報道。本課題是以Th1、Th2的兩個特異性指標(biāo)T-bet和GATA-3來觀察RA大鼠的Th1/Th2細胞分化及艾灸干預(yù)后表達趨勢，以期深入揭示艾灸治療RA的作用機理。

1材料和方法

1.1材料健康SD雄性成年大鼠，體重在200~300g之間，清潔級(動物由江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物科技中心提供)。

1.2方法40只SD健康大鼠購回后經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)7d，隨機抽取10只，納入空白對照組，于大鼠右側(cè)后肢足墊皮內(nèi)注射0.1mL生理鹽水，30只大鼠作為納入模型組中，于足跖底部注射0.1mL完全弗氏佐劑進行造模[4]造模，造模成功的模型組大鼠隨機分成模型組、艾灸組，西藥組各10只，右側(cè)后肢足墊皮內(nèi)注射0.1mL生理鹽水的10只大鼠做為空白對照組?？瞻讓φ战M和模型組不做任何治療，只做與艾敏灸組相同的固定。艾灸組將大鼠固定，大鼠大椎、脾俞、腎俞、命門、足三里參照《實驗針灸學(xué)》動物穴位圖譜定位。每天一次，連續(xù)6天為一療程，連續(xù)3個療程；西藥組予甲氨蝶呤水溶液(3.8mg/kg)每周1次灌胃。

1.3標(biāo)本采集大鼠脾組織的采集可參照前期實驗方法采集[5]。

1.4T-bet mRNA和GATA-3 mRNA的擴增及檢測將采集后的脾細胞懸液按照參考文獻進行擴增并檢測[5]，表達量按參考文獻進行計算，引物序列見表1。

表1　T-bet、GATA-3和β-actin序列

2結(jié)果

結(jié)果顯示：與正常組比，模型組大鼠的脾臟細胞中T-bet表達明顯增高，差異存在著顯著性意義(P<0.01)，艾灸組和西藥組的T-bet表達升高，差異無顯著性差異(均P>0.05)，與模型組比較，艾灸組和西藥組的T-bet表達明顯降低，差異存在著顯著性意義(P<0.01，P<0.05)；與正常組比較，模型組大鼠的脾臟細胞中GATA-3表達量降低，差異存在著顯著性意義(P<0.05)；與模型組相比，艾灸組和西藥組中GATA-3表達明顯升高，差異無著顯著性意義(P>0.05)，與模型組比較，艾灸組和西藥組的GATA-3表達明顯降低，差異存在著顯著性意義(P<0.01，P<0.05)。

表2　大鼠脾組織的T-bet和GATA-3表達

注：與正常組比較，△P<0.01，▽P>0.05；與模型組比較，▲P<0.01，▼P>0.05。

3討論

RA是一種以對稱性、侵蝕性滑膜炎為病理特征，反復(fù)發(fā)作多發(fā)性小關(guān)節(jié)腫痛，晚期出現(xiàn)關(guān)節(jié)僵硬、畸形為主要臨床表現(xiàn)的自身免疫性疾病。屬于中醫(yī)痹證范疇，與中醫(yī)古籍記載的“頑痹”、“骨痹”、“歷節(jié)”、“鶴膝風(fēng)”等病證相類似[6]。痹證的發(fā)生是由正氣不足為內(nèi)因，風(fēng)、寒、濕六淫邪氣感染為外因，內(nèi)因、外因共同作用的結(jié)果[7]。灸法主要是借助艾炷燃燒發(fā)出的熱量給人體組織以溫?zé)嵝源碳ぃㄟ^經(jīng)絡(luò)腧穴的“小刺激大反應(yīng)”作用，并將刺激轉(zhuǎn)換成良性生物信息，從而達到防治疾病目的的一種方法[8-9]。艾灸對RA有良好的治療效果，且無副使用[10-11]?！白闳铩毖▽傥附?jīng)，是治療下肢痿痹之要穴。脾經(jīng)與胃經(jīng)相表里，且脾胃被乃后天之本，具有運化水谷，化生氣血之功，故合取“脾俞”調(diào)理脾胃二經(jīng)，有補養(yǎng)全身氣血之功效?！澳I俞”屬足太陽膀胱經(jīng)，具有補虛培元之功，對臟腑、經(jīng)絡(luò)、氣血津液的失調(diào)都有很好的調(diào)整作用。

研究表明：Th1、Th2細胞及其分泌的細胞因子平衡狀態(tài)的紊亂是造成RA的主要原因，Th1細胞在RA中占主導(dǎo)地位，如IFN-γ,IIL-2，IL-6，L-4，IL-10等細胞因子分泌異常，這些細胞因子共同參與病理過程如滑膜增生、血管翳形成和軟骨破壞等[12-15]。以往動物實驗研究曾表明：艾灸足三里、腎俞、脾俞等穴能明顯減輕RA大鼠局部原發(fā)性和繼發(fā)性腫脹，提高實驗RA大鼠痛閾，調(diào)節(jié)細胞免疫因子，具有抗炎、鎮(zhèn)痛和免疫調(diào)節(jié)等作用[16]，但細胞因子分泌Th1/Th2細胞調(diào)控。Th細胞分化為Th1細胞過程中受到轉(zhuǎn)錄因子T-bet的調(diào)控，主要介導(dǎo)細胞免疫反應(yīng)，分泌促炎細胞因子，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)[17]，是Th1細胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子[18-19]。所有的Th2細胞因子的轉(zhuǎn)錄都需要GATA-3的參與，主要介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，分泌抗炎因子，提高黏膜耐受性[18]。GATA-3特異性表達于Th2細胞，是Th2細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子[20]。

本實驗結(jié)果顯示：模型組大鼠的脾臟細胞中T-bet表達明顯增高，GATA-3表達顯著降低，差異存在著顯著性意義(均P<0.01)，說明在RA期間，大鼠T細胞分化向著Th1分化，同時抑制向Th2細胞分化，總的趨勢向Th1漂移，Th1/Th2功能失衡；經(jīng)艾灸治療后，脾臟細胞中T-bet表達明顯降低，GATA-3表達顯著升高，說明艾灸干預(yù)后大鼠T細胞分化向著Th2分化，同時抑制向Th1細胞分化，Th1/Th2功能基本恢復(fù)正常。

由此可見，艾灸足三里、脾俞、腎俞、命門、大椎等腧穴可以抑制RA大鼠T細胞向Th1細胞分化，降低T-bet轉(zhuǎn)錄，抑制促炎因子分泌，減輕炎性反應(yīng)，阻止滑膜下層內(nèi)皮細胞腫脹、內(nèi)皮小靜脈形成等病變；促進RA大鼠T細胞向Th2細胞分化，促進GATA3轉(zhuǎn)錄，加快抗炎因子分泌，上調(diào)T細胞耐受性，抑制RA發(fā)生發(fā)展，恢復(fù)RAThl/Th2功能失衡。

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(收稿日期：2015-03-03)編輯：王河寶

*基金項目：江西省衛(wèi)生和計劃生育委員會(原江西省衛(wèi)生廳)資助(2009A055)。

中圖分類號：R245.81

文獻標(biāo)識碼：B