牛布氏桿菌病血清學和變態(tài)反應診斷

馬建山

（遼寧省動物疫病預防與控制中心，遼寧沈陽 110000）

牛布氏桿菌病血清學和變態(tài)反應診斷

馬建山

（遼寧省動物疫病預防與控制中心，遼寧沈陽 110000）

?；疾际蠗U菌病后，其凝集反應通常出現(xiàn)較早，其次是補體結合反應，變態(tài)反應出現(xiàn)較晚，但保持的時間最長，有些牛在病愈之后幾年仍有變態(tài)反應。若在牛群剛暴發(fā)本病時進行檢疫，凝集反應陽性率常比補體結合反應陽性率高，比變態(tài)反應陽性牛更高，這時甚至可能還不出現(xiàn)變態(tài)反應。若經過1～2年以后重檢，所得的結果恰好相反，變態(tài)反應陽性率比凝集反應和補體結合反應陽性率顯著地高。因此應當根據具體情況使用這些方法，并應根據流行病學情況對檢驗結果做出正確的判斷。

1 試管凝集試驗

此法在我國應用已久，目前仍然是檢查牛布氏桿菌病的初步試驗。我國生產的布氏桿菌凝集抗原，是按聯(lián)合國世界衛(wèi)生組織和糧農組織布氏桿菌病專家委員會規(guī)定的標準定的，其應用液（即抗原原液1:20稀釋液）對國際標準布氏桿菌陽性血清的凝集價恰為1:1000二個加號。而國際血清1mL恰含有凝集素1000IU，因此用我國抗原進行檢驗所獲得的凝集價正好與所含凝集素單位相符，故可用凝集價來表示被檢血清所含的凝集素單位。有報道說，未接種過布氏桿菌苗的牛，凝集價達到80～100IU/mL的認為陽性；40～50IU/mL的認為可疑。幼齡時期接種過布氏桿菌19號菌苗的牛，年齡超過30個月以后，凝集價為200IU/mL的認為陽性，100IU/mL的認為可疑。在剛發(fā)生布氏桿菌病的牛群中，由于有些新感染的牛凝集價尚未升高，出現(xiàn)1:25凝集現(xiàn)象的，亦應認為可疑。凝集價是隨著病程的演變而升高、降低或保持一定水平的。所以可疑反應牛應于15～30d后采血重驗，如重檢仍未可疑，表示該牛處在本病的隱性期中，應做陽性牛處理。但凝集試驗也有它的局限性，有些處于潛伏期的病牛的凝集價達不到陽性標準。妊娠牛初次感染時，往往不出現(xiàn)凝集素，需在流產或產犢后數天到2周才出現(xiàn)。少數病牛在妊娠后期，由于免疫球蛋白由血液循環(huán)轉移到乳腺，凝集價暫時下降。此外，慢性病牛也可能不出現(xiàn)凝集反應，對這些?？刹扇《啻螜z驗的方法把它們逐步檢出。

2 平板凝集反應

用這種抗原按照規(guī)定方法檢驗血清時，所獲得的結果與用試管凝集試驗法所檢測的結果基本上相符。在平板凝集反應試驗中，0.08mL的血清量的反應相當于試管法中的1:25血清稀釋液的反應，0.04mL相當于1:50，0.02mL相當于1:100，0.01mL相當于1:200。在0.02mL量中出現(xiàn)凝集反應的判為陽性，在0.04mL中出現(xiàn)反應的判為可疑。

3 全乳環(huán)狀反應和乳清凝集試驗

患布氏桿菌病的牛，其奶中常有凝集素，可根據奶中凝集素的有無來診斷牛的布氏桿菌病。一般來說，奶中有凝集素的母牛，血清中也有凝集素，但也有少數牛在奶中有凝集素而在血清中則沒有。乳清凝集反應和血清凝集反應不相符的現(xiàn)象時經常見到的，甚至從同一母牛的4個乳頭擠出的奶，其乳清凝集價也往往不同，相差顯著的由1:10～1:160，這可能是由于乳房局部感染造成的。因此，檢查奶牛凝集素有其特殊的意義，可以補血清凝集反應的不足。此外，檢查混合奶的凝集素，還可以了解牛群布氏桿菌病的流行情況。乳清凝集反應可采用試管法或平板法進行，采用試管法時，乳清稀釋度由1:5開始。采用平板法時，須用特別的抗原，最好先用已知凝集價的血清滴定其敏感度和規(guī)定其濃度，使與試管法相符。提取乳清的最好方法是加凝乳酶于奶中，在38～40℃水浴鍋中放5min后，乳清即隨奶的凝固而滲出。

4 補體結合試驗

牛感染布氏桿菌之后，通常經過10～20d出現(xiàn)補體結合反應。補體結合試驗對牛布氏桿菌病也有很高的診斷價值，但陽性檢出率的高低是依牛感染布氏桿菌后經過期間的長短而有所不同。補體結合試驗對于鑒別由注射19號菌苗所引起的凝集反應和由自然感染所引起的凝集反應很有用處，是鑒別這兩種凝集反應最好的方法。接種19號菌苗的牛，凝集反應消失較晚，注射后9個月尚未完全消失，補體結合反應消失較早。自然感染布氏桿菌病的牛則與此不同，凝集反應和補體結合反應經常相伴出現(xiàn)。因此，注苗后經過半年的牛，若僅出現(xiàn)凝集反應而無補體結合反應，即可認為此種凝集反應有可能是注射菌苗引起。

5 變態(tài)反應

通常用流產菌素來檢驗布氏桿菌病牛的變態(tài)反應。用皮下注射法或點眼法進行檢驗均可。但需要注意的是，有部分病?？祻椭螅邢喈旈L的時期內仍保持陽性變態(tài)反應。因此根據變態(tài)反應實行防制措施時，將有一部分已康復的牛被當作病牛處理。在培育健康犢牛群時，為了保證犢牛群健康，必須將所有正在患病或患過病的犢牛檢出。況且犢牛年幼，得病時間不會太久，在多數場合下陽性變態(tài)反應正好標示出該犢正在患病，因此用此法與凝集反應一起檢查犢牛布氏桿菌病是有用的。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2015．11.045