中藥復(fù)方穩(wěn)心顆粒對(duì)家兔心肌缺血/再灌注損傷的影響

周昌盛，孫小祥

中藥復(fù)方穩(wěn)心顆粒對(duì)家兔心肌缺血/再灌注損傷的影響

周昌盛1，孫小祥2*

目的研究復(fù)方中藥制劑穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌缺血/再灌注損傷家兔模型的保護(hù)作用。方法36只家兔隨機(jī)分為假手術(shù)組(陰性對(duì)照組)、模型組、三七顆粒組(陽(yáng)性對(duì)照組)及穩(wěn)心顆粒低、中、高劑量組(給藥組)。陽(yáng)性對(duì)照組家兔灌胃三七顆粒0.4 g/(kg·d)，給藥組家兔分別灌胃穩(wěn)心顆粒0.4、0.6、0.8 g/(kg·d)，其余兩組灌胃等體積生理鹽水；給藥1周后，采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支方法制備家兔心肌缺血/再灌注模型，觀察各組家兔心電圖，并檢測(cè)血清丙二醛(MDA)含量，以及乳酸脫氫酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。結(jié)果與假手術(shù)組比較，模型組室性心律失常發(fā)生率、血清CK與LDH活性、MDA含量升高(P<0.05)，而SOD活性降低(P<0.05)，表明家兔心肌缺血/再灌注模型成功；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和給藥組室性心律失常發(fā)生率、血清CK與LDH活性、MDA含量均顯著降低(P<0.05)，SOD活性升高(P<0.05)，且給藥組表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)。結(jié)論穩(wěn)心顆粒對(duì)家兔心肌缺血/再灌損傷有保護(hù)作用。

穩(wěn)心顆粒；三七；缺血/再灌注

0　引言

心肌缺血容易造成心肌結(jié)構(gòu)和功能上的損傷[1]，臨床常采用手術(shù)治療，如經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)、溶栓治療和冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)等，但受損的心肌很難恢復(fù)正常的功能結(jié)構(gòu)，而且手術(shù)可能導(dǎo)致?lián)p傷加重，如再灌注心律失常、內(nèi)皮損傷和心肌頓抑等[2-3]。目前，中醫(yī)藥在心肌缺血的治療中取得了較好的效果[4-7]。有報(bào)道，使用穩(wěn)心顆粒治療各種類型的心律失常效果顯著[8]，且毒性低、不良反應(yīng)小，但其現(xiàn)代藥理作用機(jī)制并不明確。本研究通過(guò)建立心肌缺血/再灌注損傷的家兔模型，從現(xiàn)代藥理作用層面探討穩(wěn)心顆粒對(duì)心肌缺血損傷的影響。

1　儀器與試劑

1.1動(dòng)物大耳白兔36只，雄性，體重2.2～2.5 kg，江蘇大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d。

1.2試劑穩(wěn)心顆粒(山東步長(zhǎng)制藥有限公司，批號(hào)：111053)；自制三七顆粒(每3 g相當(dāng)于三七原藥材1 g)；丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)和磷酸肌酸激酶(Creatine kinase，CK)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3儀器日本KO-HDENE(G-651)型心電圖機(jī)；美國(guó)LIFDAK9P型心電監(jiān)護(hù)儀；日本島津CL-7300全自動(dòng)生化分析儀；德國(guó)SiGMA 1-13臺(tái)式離心機(jī)。

2　方法

2.1分組及給藥將36只家兔隨機(jī)分為假手術(shù)組(陰性對(duì)照組)、模型組、三七顆粒組(陽(yáng)性對(duì)照組)及穩(wěn)心顆粒高、中、低劑量組(給藥組)，每組6只。假手術(shù)組和模型組每天以生理鹽水5 mL/kg連續(xù)灌胃7 d；陽(yáng)性對(duì)照組以三七顆粒0.4 g/kg溶于生理鹽水中，連續(xù)灌胃7 d；給藥組分別以穩(wěn)心顆粒0.4、0.6、0.8 g/kg溶于生理鹽水后，連續(xù)灌胃7 d。

2.2手術(shù)造模[9]各組家兔末次給藥1 h后進(jìn)行手術(shù)或假手術(shù)造模。按照30 mg/kg劑量靜脈注射戊巴比妥鈉將家兔麻醉，記錄肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。沿家兔左胸骨邊緣切斷3、4肋軟骨，暴露心臟，剪開心包膜，于左冠狀動(dòng)脈前降支近起始部7 mm處用3-0絲線結(jié)扎阻閉血管。家兔心電圖Ⅱ?qū)?lián)ST段升高，T波高聳，結(jié)扎線以下心肌組織顏色變蒼白再變暗，提示心肌缺血造模成功。30 min后松開血管，恢復(fù)左前降支血流，再灌注60 min。假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。

2.3心律失常率各組家兔均于心肌缺血模型復(fù)制成功后進(jìn)行心電監(jiān)護(hù)[10]，模擬標(biāo)Ⅱ?qū)?lián)至再灌注后60 min，記錄再灌注性心律失常發(fā)生的次數(shù)，與模型組比較計(jì)算心律失常率。

2.4血清各指標(biāo)測(cè)定[11]各組家兔均于再灌注60 min時(shí)取頸內(nèi)動(dòng)脈血2.0 mL，自然凝血后離心，取上層血清，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)LDH、CK活性；采用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸鹽法試劑盒測(cè)定血清中的SOD活性和MDA含量。

2.5統(tǒng)計(jì)方法采用Graphpad 5.0軟件，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　結(jié)果與分析

3.1各組家兔再灌注性心律失常率的比較見表1。由表1可見，各組家兔室性心律失常的發(fā)生率均高于假手術(shù)組，提示造模成功。陽(yáng)性對(duì)照組和給藥組室性心律失常發(fā)生率顯著低于模型組(P<0.01)，表明穩(wěn)心顆粒具有對(duì)抗再灌注性心律失常的作用。另外，穩(wěn)心顆粒中、高劑量組心律失常率低于低劑量組(P<0.05)，提示該中藥復(fù)方制劑對(duì)抗家兔再灌注性心律失常具有明顯的劑量效應(yīng)。

表1　各組家兔再灌注性心律失常的發(fā)生率比較(n=6)

3.2各組家兔血清CK、LDH活性比較見表2。由表2可見，與假手術(shù)組比較，其余各組血清CK與LDH活性明顯升高(P<0.05)，提示心肌缺血/再灌注對(duì)心肌組織有損傷作用。與模型組比較，三七顆粒組及穩(wěn)心顆粒各劑量組CK與LDH活性降低(P<0.05)，而穩(wěn)心顆粒中、高劑量組降幅較大，超過(guò)了陽(yáng)性對(duì)照組，提示穩(wěn)心顆粒能有效抑制兔缺血再灌注時(shí)心肌酶的溢出，具有保護(hù)心肌細(xì)胞膜的作用。

表2　各組家兔再灌注60 min的CK、LDH值比較(U/L)

注：與假手術(shù)組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05

3.3各組家兔血清SOD活性及MDA含量比較見表3。由表3可見，與假手術(shù)組比較，模型組的SOD降低，MDA含量升高(P<0.05)，提示心肌缺血/再灌注對(duì)家兔心肌造成了脂質(zhì)過(guò)氧化損傷；與模型組比較，三七顆粒對(duì)照組和穩(wěn)心顆粒各劑量組SOD升高，MDA降低，說(shuō)明穩(wěn)心顆?？缮呷毖俟嘧⑿募〗M織SOD水平，降低MDA含量，從而恢復(fù)心肌功能。

表3　各組家兔再灌注60 min的SOD、MDA值比較

注：與假手術(shù)組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05

4　討論

根據(jù)氧自由基學(xué)說(shuō)，心肌缺血再灌注后，會(huì)產(chǎn)生大量自由基，形成脂性自由基和脂過(guò)氧化物，改變了心肌細(xì)胞膜脂質(zhì)環(huán)境，使膜的基本特性發(fā)生變化，如細(xì)胞膜通透性增加，細(xì)胞內(nèi)的酶如LDH及CK擴(kuò)散至細(xì)胞外[12]，從而引起心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及功能障礙，誘發(fā)心律失常。本研究采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支方法制備家兔心肌缺血/再灌注模型，測(cè)定血液中的LDH、CK等酶的活性，以評(píng)價(jià)缺氧所致組織受損的程度，同時(shí)測(cè)定血液中SOD活性和MDA含量等作為反映脂質(zhì)過(guò)氧化損傷程度的指標(biāo)。結(jié)果顯示，各組家兔手術(shù)造模后出現(xiàn)心肌缺血，血液中SOD活性降低，MDA含量增加，表明血液中氧自由基大量增加；血清中LDH、CK活性增加，表明膜的基本結(jié)構(gòu)、特性發(fā)生了破壞，從而導(dǎo)致室性心律失常發(fā)生。該模型有效模擬了心肌缺血及手術(shù)再灌注引起的心律失常。

先前研究表明，單味中藥三七能有效改善心肌缺血/再灌注后心律失常發(fā)生率[9,13-14]，本研究考察復(fù)方中藥穩(wěn)心顆粒治療再灌注性心律失常的藥理機(jī)制。穩(wěn)心顆粒由黨參、黃精、三七、琥珀、甘松等中藥組成，臨床上應(yīng)用穩(wěn)心顆粒治療各種類型的心律失常均取得了較好的療效[7,15]。《內(nèi)經(jīng)》認(rèn)為，心脈氣血不足，治當(dāng)重調(diào)脾胃，以補(bǔ)益為主，脾充胃旦，則氣血生化有源。黨參甘平入脾經(jīng)，能補(bǔ)中益氣，安精神，止驚悸，為君藥。黃精甘平，補(bǔ)脾氣而潤(rùn)心肺，輔助黨參，益氣以生血，為臣藥。氣虛血少，心脈不充，運(yùn)行必然不暢，多由滯而成瘀，故虛中多夾瘀血。三七甘而微苦性溫，行瘀止血定痛，而兼有補(bǔ)益之力；琥珀甘平，活血化瘀兼平肝安神之效。故用三七、琥珀為佐藥。本中藥組方臨床應(yīng)用多年，適用于早搏及快速性心律失常。本研究結(jié)果表明，該方能降低心肌缺血再灌注的心律失常發(fā)生率，顯著減少心肌細(xì)胞釋放心肌酶，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物，對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷有顯著的保護(hù)作用，療效優(yōu)于單味三七。

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Cardioprotective effects of wenxin granules on myocardial ischemia/reperfusion injury in rabbits

ZHOU Chang-sheng1,SUN Xiao-xiang2*

(1.Department of Pharmacy,The People′s Hospital of Rugao,Rugao 226500,China;2.Department of Pharmacy,Zhenjiang Hospital of Traditional Chinese Medicine,Zhenjiang 212003,China)

ObjectiveTo observe the protective effect of wenxin granules (WXG) on myocardial ischemia/reperfusion injury in rabbits.MethodsThirty-six rabbits were randomized into 6 groups: sham operation group (negative control group),model group,Radix notoginseng group (positive control group),WXG low,middle and high dosage group (medication groups).Rabbits in above groups were given i.g.physiological saline,Radix notoginseng granule and low,middle,high dosages of WXG (5 mL/kg) for 7 d respectively.The myocardial ischemia/reperfusion models of rabbits were induced by coronary artery occulsion.The ventricular tachycardia was recorded,the levels of CK,LDH,MDA,SOD were measured.ResultsCompared with sham operation group,the arrhythmia incidence,CK,LDH,MDA levels of model group increased,and the SOD activity decreased significantly (P<0.05).Compared with model group,the arrhythmia incidence,CK,LDH,MDA levels of positive control group and WXG groups decreased,and the SOD activity increased significantly (P<0.05).In addition,there was a dose-dependent effect in WXG low,middle and high dosage groups.ConclusionWXG is effective in protecting the myocardium against myocardial ischemia/reperfusion injury in rabbits.

Wenxin granules;Radix notoginseng;Ischemia/reperfusion

2014-12-27

1.如皋市人民醫(yī)院藥劑科，江蘇 如皋 226500；2.鎮(zhèn)江市中醫(yī)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212003

鎮(zhèn)江市科技計(jì)劃項(xiàng)目(HS2014069)

10.14053/j.cnki.ppcr.201508006

*通信作者