酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作關(guān)鍵點(diǎn)

張瑞嫻，吳有全，鄭雪蓮，李煒煊（佛山市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東528000）

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是酶免疫測(cè)定方法中應(yīng)用最廣的技術(shù)，既可用于定性，又可用于定量檢測(cè)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原-抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，通過(guò)洗滌去除未與固相載體結(jié)合的游離成分，加底物顯色進(jìn)行測(cè)定。ELISA 具有操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，特異性好，廣泛應(yīng)用于臨床免疫檢驗(yàn)，是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)習(xí)生必須掌握的最基本的試驗(yàn)操作。ELISA 在操作過(guò)程中有很多需要注意的事項(xiàng)，現(xiàn)將作者在日常帶教中認(rèn)為的關(guān)鍵點(diǎn)及如不慎加入孔外則注意事項(xiàng)總結(jié)如下。

1 實(shí)習(xí)前的培訓(xùn)

實(shí)習(xí)生在進(jìn)行ELISA 操作前首先閱讀相應(yīng)項(xiàng)目的操作規(guī)程，本科免疫室使用ELISA 法的項(xiàng)目有11 個(gè)，每個(gè)試驗(yàn)的操作規(guī)程都不一樣，要求每位實(shí)習(xí)生熟悉每個(gè)項(xiàng)目的操作規(guī)程，需要每位實(shí)習(xí)生多花時(shí)間和付出一定的努力，做好這項(xiàng)工作對(duì)后面的操作起到很大的作用。

2 試驗(yàn)過(guò)程中帶教的注意事項(xiàng)

本科免疫室使用ELISA 方法的試驗(yàn)很多，以下是ELISA 操作過(guò)程中的一些注意事項(xiàng)。試劑從冰箱取出后，必須在室溫放置30 min[1]再進(jìn)行檢測(cè)，試劑使用前應(yīng)搖勻，盡量避免有溶血、黃疸、脂血或被微生物污染的標(biāo)本[2]。加樣前要求學(xué)生先檢查標(biāo)本狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本退回并要求重抽。用全自動(dòng)加樣系統(tǒng)，標(biāo)本加完后要求學(xué)生注意是否有漏加的情況，如果漏加了，則用加樣器補(bǔ)上。加酶結(jié)合物和底物一般用8 頭加樣器，套吸嘴時(shí)要注意是否有套緊，否則加樣量會(huì)減少，引起加樣不準(zhǔn)確，加液時(shí)要加在ELISA 板孔的底部，避免濺出、產(chǎn)生氣泡等。特別是加酶試劑，操作時(shí)不能濺到微孔板的外面，酶試劑要加在微孔板的中央，否則很容易使結(jié)果產(chǎn)生假陽(yáng)性。加酶試劑是整個(gè)ELISA 試驗(yàn)中最重要的步驟，這個(gè)步驟做好了，這個(gè)試驗(yàn)的質(zhì)量就得到了保證。加底物時(shí)，各種試劑盒的顯色劑不能混用。孵育時(shí)間和溫度嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書(shū)規(guī)定， 溫育的條件對(duì)結(jié)果有一定影響[3]，加樣完畢后封上封紙防止標(biāo)本或反應(yīng)液蒸發(fā)在孔壁上。洗板的次數(shù)可能對(duì)結(jié)果有影響[4-5]，要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定的次數(shù)使用專用洗液。 洗板前應(yīng)先將洗板機(jī)管道清洗干凈將洗液注滿管道， 保證洗液充滿各孔，洗板結(jié)束后，應(yīng)在脫水機(jī)上脫去反應(yīng)板殘留的少量洗液。顯色是ELISA 反應(yīng)中最重要的一個(gè)步驟，關(guān)系著試驗(yàn)的成敗。 孵育時(shí)要按照操作規(guī)程掌握好孵育的時(shí)間和溫度[6]。在加顯色劑時(shí)不能加到孔外，應(yīng)用洗水紙吸干；加終止液時(shí)不能產(chǎn)生氣泡；為了提高分析樣本的準(zhǔn)確度，應(yīng)用酶標(biāo)儀判讀檢測(cè)結(jié)果，先打開(kāi)酶標(biāo)儀電源預(yù)熱15 min， 比色前把酶標(biāo)板底部用吸水紙吸干，然后將板放在酶標(biāo)儀架上。

3 重視培養(yǎng)學(xué)生的質(zhì)量控制

每批標(biāo)本都要做空白對(duì)照陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和質(zhì)控，保證操作的質(zhì)量。

4 生物安全教育

ELISA 檢測(cè)的對(duì)象多為感染性的標(biāo)本，因此，對(duì)實(shí)習(xí)生的生物安全教育很重要[7]，一些標(biāo)本，如梅毒、艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎試劑盒的陽(yáng)性對(duì)照有一定的危害，需妥善處理[8]；如果懷疑是艾滋病的標(biāo)本，要用有效氯為2 000 mg/L 的消毒液浸泡30 min 后清潔處理。

總之，ELISA 是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)實(shí)習(xí)中最基本的檢驗(yàn)技術(shù)操作，操作過(guò)程中有許多細(xì)致的步驟和注意事項(xiàng)，要嚴(yán)格按照操作規(guī)程認(rèn)真仔細(xì)地進(jìn)行。避免假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，保證檢測(cè)結(jié)果真實(shí)可靠。

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