脂肪細(xì)胞因子Chemerin對冠心病的預(yù)警作用

吳心語，張朝明，王 剛，葛一漫，謝國麗

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科，四川 成都 610075；2.四川省人民醫(yī)院檢驗科，四川 成都 610072)

脂肪細(xì)胞因子Chemerin對冠心病的預(yù)警作用

吳心語1，張朝明1，王 剛2，葛一漫1，謝國麗1

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科，四川 成都 610075；2.四川省人民醫(yī)院檢驗科，四川 成都 610072)

目的：探討脂肪細(xì)胞因子Chemerin在冠心病(CHD)發(fā)生與發(fā)展中的臨床價值。方法：將20只健康雄性apoE-/-小鼠隨機分為普食喂養(yǎng)組(NF組)10只和高脂喂養(yǎng)組(HF組)10只,實時熒光定量PCR(QPCR)檢測2組小鼠腹主動脈旁脂肪中Chemerin mRNA相對表達(dá)水平；ELISA方法檢測2組小鼠血清中Chemerin的含量；采用ELISA方法檢測45例正常人及150例疑似CHD患者血清中Chemerin，其中疑似CHD患者經(jīng)臨床相關(guān)檢測確診為心絞痛25例，心肌梗死115例，心肌損傷非冠心病10例。結(jié)果：(1)小鼠腹主動脈旁脂肪組織中Chemerin mRNA相對表達(dá)水平HF組較NF組明顯升高(P<0.01)。(2)小鼠血清中Chemerin含量HF組較NF組也明顯升高(P<0.05)。(3)人血清中Chemerin含量冠心病患者(最終確診為心絞痛及心肌梗死)較正常人群明顯升高(P<0.05)，其中心肌梗死患者較心絞痛患者Chemerin水平明顯增加(P<0.05)。結(jié)論：在小鼠動脈粥樣硬化斑塊形成過程中Chemerin水平的升高提示其可能參與了促動脈粥樣硬化斑塊的形成。在正常人及冠心病患者尤其是心肌梗死患者的血清中Chemerin水平的改變表明其可能參與了冠心病尤其是心肌梗死的發(fā)生與發(fā)展，具有一定的預(yù)警作用。

Chemerin；冠心??；實時熒光定量PCR；ELISA

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary heart disease，CHD)簡稱冠心病，已成為威脅人類生命健康的主要疾病之一，脂肪細(xì)胞因子所產(chǎn)生的大量生物活性因子可破壞機體穩(wěn)態(tài)，激活全身炎癥反應(yīng)，從而啟動和推進(jìn)動脈粥樣硬化等疾病的發(fā)展，使心腦血管事件風(fēng)險顯著提高[1]。有研究報道，Chemerin可作用于內(nèi)皮細(xì)胞上相應(yīng)受體，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和新生血管的形成，在缺血性心臟病早期起代償作用[2]。本研究采用高脂喂養(yǎng)apoE-/-小鼠，觀察Chemerin在小鼠腹主動脈旁脂肪中Chemerin mRNA相對表達(dá)水平，旨在闡明Chemerin在動脈粥樣硬化斑塊形成中可能的作用；收集健康人群與CHD患者血清，并檢測Chemerin在這兩種人群中的含量，旨在探討Chemerin在CHD檢測中可能的臨床意義，為CHD的治療提供新的策略及可能的治療靶點。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 apoE-/-雄性小鼠20只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分為普食喂養(yǎng)組(NF組，n=10)、高脂喂養(yǎng)組(HF組，n=10)，共喂養(yǎng)36周。

1.1.2 一般資料 收集成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院2012年10月至2013年10月150例疑似CHD患者，其中最終經(jīng)臨床確診為CHD心絞痛25例(平均年齡52±6歲)，心肌梗死115例(平均年齡53±4歲)，心肌損傷非CHD10例(平均年齡55±6歲)。排除診斷：急性創(chuàng)傷、自身免疫性疾病或結(jié)締組織疾病患者、惡性腫瘤患者、合并感染、嚴(yán)重肝腎功能異?；颊?。對照組為同期體檢中心健康者45例，各組在年齡、性別比例等方面無顯著性差異(P<0.05)，組間均衡性好，具有可比性。所有研究對象均知情同意。

1.1.3 試劑 小鼠、人血清Chemerin ELISA試劑盒購自北京愛迪博公司；RNA抽提試劑盒、RT-QPCR試劑盒購自大連寶生物TAKARA公司。

1.1.4 儀器 Beckman Coulter AU5400全自動生化分析儀，羅氏lightcycle熒光定量PCR儀，美國Thermo公司DNA質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定儀，TECNA Austria公司safire熒光酶標(biāo)儀。

1.2 方法 (1)各組小鼠腹主動脈旁脂肪組織Chemerin mRNA表達(dá)水平的檢測。提取小鼠腹主動脈旁脂肪組織總RNA，根據(jù)NCBI公布的Chemerin序列(NM27852.2)，采用Premier5.0軟件設(shè)計QPCR所有引物，產(chǎn)物片段大小控制在100～300 bp之間。冰上配置RT反應(yīng)液，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA 37 ℃15 min，85 ℃5 s，即得cDNA立即用于real-time PCR或置于-20 ℃保存。在冰上配置Real time-PCR反應(yīng)液(25 μL體系)，上機、加樣，用羅氏lightcycle熒光定量PCR儀檢測各組腹主動脈旁脂肪組織中Chemerin mRNA的水平。(2)采用ELISA法檢測小鼠NF組和HF組血清Chemerin水平。(3)采用ELISA法檢測健康人群、疑似CHD患者血清Chemerin水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料比較采用t檢驗或單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠腹主動脈旁脂肪組織Chemerin mRNA的相對表達(dá)水平 實驗結(jié)果分析采用依據(jù)熔解曲線判讀擴增產(chǎn)物的穩(wěn)定性和特異性，用2-△△CT表示基因的相對表達(dá)量。小鼠腹主動脈旁脂肪組織Chemerin mRNA表達(dá)水平HF組為11.23±0.76，NF組為15.67±0.46，HF組較NF組明顯增加(P<0.01)。

2.2 小鼠NF組和HF組血清Chemerin含量 HF組為98.458±24.3 pg/mL，NF組121.324±36.8 pg/mL，與NF組相比，HF組小鼠血清中Chemerin含量顯著增高(P<0.05)。

2.3 健康人群與疑似CHD患者血清中Chemerin含量差異 45例正常人血清Chemerin含量為20.157±3.9 ng/mL，25例心絞痛患者血清Chemerin含量為28.313±3.8 ng/mL，115例心肌梗死患者血清Chemerin含量為33.827±3.5 ng/mL，10例心肌損傷非CHD患者血清Chemerin含量為21.750±2.6 ng/mL。心絞痛患者和心肌梗死患者與正常人比較有顯著性差異(P<0.05)，冠心病的Chemerin含量明顯升高；心肌梗死患者與心絞痛患者比較有顯著性差異(P<0.05)，心肌梗死患者的Chemerin含量明顯升高。

3 討 論

近年來研究發(fā)現(xiàn)動脈粥樣硬化患者及大鼠血管旁脂肪組織Chemerin表達(dá)升高，且增高程度與AS嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，說明Chemerin可能參與了AS發(fā)生及發(fā)展[4]。Chemerin可能是CHD的一個新的預(yù)測因子，大量的流行病學(xué)研究表明，心血管疾病患者一般都有內(nèi)皮細(xì)胞的功能紊亂[5]。有研究者發(fā)現(xiàn)Chemerin可以誘導(dǎo)內(nèi)皮血管再生，而這些新生的血管脆性增加，容易破裂出血，促進(jìn)了斑塊的進(jìn)展[6]。

在冠狀動脈狹窄早期由于心肌血供尚可代償，患者沒有明顯的癥狀。當(dāng)狹窄度接近70%時，患者在活動后會出現(xiàn)心肌供血不足，則出現(xiàn)為心絞痛的癥狀；當(dāng)血管完全堵塞，局部心臟無血供，大面積心肌壞死，患者則會出現(xiàn)為心肌梗死的癥狀。本研究發(fā)現(xiàn)CHD較正常人群明顯升高，其中心肌梗死組較心絞痛組Chemerin水平明顯增加。而心肌損傷非CHD患者較健康人群無顯著差異。這一結(jié)果提示：Chemerin水平與CHD具有相關(guān)性，可能參與CHD發(fā)生與發(fā)展且與病情的嚴(yán)重程度相關(guān)，這種新的脂肪細(xì)胞因子有望為CHD的治療及死亡率的降低提供新的治療策略，也有望成為預(yù)測CHD獨立的檢測指標(biāo)，具有一定的預(yù)警檢測價值。

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[2]KAUR J, ADYA R, TAN BK, et al. Identification of chemerin receptor (ChemR23) in human endothelial cells: chemerin-induced endothelial angiogenesis[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2010, 391(4): 1762-1768.

[3]SPIROGLOU SG, KOSTOPOULOS CG, VARAKIS JN, et al. Adipokines in periaortic and epicardial adipose tissue: differential expression and relation to atherosclerosis[J]. J Atheroscler Thromb, 2010, 17(2): 115-130.

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[5]ZHAO Rui-jun, PAN Zhi-yuan, LONG Chao-liang, et al. Stimulation of non-neuronal muscarinic receptors enhances chemerin/ChemR23 system in dysfunctional endothelial cells[J]. Life Sci, 2013, 92(1): 10-16.

[6]OU Zhi-jun, CHANG Feng-jun, LUO Dan, et al. Endothelium-derived microparticles inhibit angiogenesis in the heart and enhance the inhibitory effects of hypercholesterolemia on angiogenesis[J]. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2011, 300(4): E661-E668.

Early Warning of Chemerin Level in the Serum of Patients with CHD

WU Xinyu1,ZHANG Chaoming1,WANG Gang2,GE Yiman1，XIE Guoli1

(1.Clinical Laboratory，The Affiliated Hospital of Chengdu University of TCM, Sichuan Chengdu 610075,China;

2.Clinical Laboratory，Sichuan People’s Hospital, Sichuan Chengdu 610072,China)

Objective:To explore the clinical value of Chemerin in the occurrence and development of coronary heart disease (CHD). Methods:Healthy male ApoE-/-mice were randomly divided into normal-chow group (NF group, n=10) and high-fat fed group (HF group, n=10).THE mRNA expression of Chemerin were measured by QPCR in mice hepatic tissue.The level of serum Chemerin were determined by ELISA. The levels of serum Chemerin in 45 cases of normal control group and in 150 cases of CHD suspected group were measured with ELISA.Results:(1)Chemerin mRNA relative expression levels of mice in abdominal aorta adipose tissue:in HF group was compared with in NF group, there was significantly difference (P<0.01).(2)The serum Chemerin levels of mice: in HF group than the in NF group was significantly increased (P<0.05) and Chemerin level of the serum were increased (P<0.05).(3)The levels of serum Chemerin of the normal population and patients with CHD: in CHD group (eventually diagnosed as angina and myocardial infarction) was compared with in the normal population,there was significantly difference (P<0.05), Chemerin levels of myocardial infarction was increased more than angina group(P<0.05).Conclusion:Chemerin level increase in the process of formation of atherosclerotic plaques in mice may be involved in promoting atherosclerotic plaque formation. Changes of Chemerin level may be involved in the occurrence and development of CHD and MI, there is a role in early warning for CHD.

Chemerin；CHD；QPCR；ELISA

張朝明，601587352@qq.com

R541.4

A

10.11851/j.issn.1673-1557.2015.01.011

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1688.R.20150116.1357.001.html

2014-03-31)