復(fù)方榛花肝寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

南勁松，南紅梅，季存蕊，張 鐸，南 征*

(1.吉林省食品藥品監(jiān)督管理局，長春130022;2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春130117)

復(fù)方榛花肝寧膠囊系由五味子、三七、龍膽和板藍(lán)根等17味藥物組成的復(fù)方制劑，具有疏肝解郁，除黃利膽，理氣和胃等功效。五味子為復(fù)方榛花肝寧膠囊中的君藥，最主要藥理活性成分為木脂素，包括五味子素、五味子醇甲等［1-2］?，F(xiàn)采用薄層色譜法對復(fù)方榛花肝寧膠囊中三七、龍膽進行定性鑒別，同時采用高效液相色譜法對復(fù)方中五味子中五味子醇甲進行含量測定，以建立復(fù)方榛花肝寧膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料

日立-635高效液相色譜儀，DL-800色譜工作站(大連依利特公司)。復(fù)方榛花肝寧膠囊(由吉林正輝煌藥業(yè)有限公司提供);五味子醇甲對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(供含量測定，批號:0857-9601);甲醇為優(yōu)級純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法的選擇 1)采用甲醇超聲處理后上D101吸附樹脂柱;2)加甲醇加熱回流后上D101吸附樹脂柱。結(jié)果:1)法測定的吸收峰面積積分值明顯低于2)法，故采用2)法。

2.2 柱洗脫條件的考察 樣品經(jīng)甲醇提取后，通過D101吸附樹脂柱，以水 30 mL，20%乙醇40 mL，70%乙醇50 mL即能大量洗脫雜質(zhì)，有效成分完全收集。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 色譜柱Relasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相為甲醇∶水(13∶8)，流速為1.0 mL/min，檢測波長為 250 nm［3］。理論塔板數(shù)應(yīng)不低于3 000。

2.4 方法學(xué)考察 對照品溶液的制備:稱取10 mg五味子醇甲對照品，精密稱定后置于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻后精密吸取2 mL于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備:精密稱定本品內(nèi)容物1.25 g置具塞錐形瓶中，精密加入50 mL甲醇并稱定重量，加熱回流2 h后放冷，再稱定重量并用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過。精密吸取25 mL續(xù)濾液，蒸干后加5 mL水溶解殘渣，再通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.0 cm，填充高度10 cm)。先用30 mL水洗脫并棄去水液，再用20%乙醇洗脫后棄去20%乙醇洗脫液，最后用70%乙醇洗脫，收集50 mL 70%乙醇洗脫液并蒸干，用1 mL甲醇溶解殘渣，并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度線，搖勻，即得。

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密稱取適量五味子醇甲對照品，加甲醇配制成每1 mL含0.085 mg的溶液，分別精密吸取2、4、6、8、10 μL 注入液相色譜儀，測定，以五味子醇甲進樣量(μg)為橫坐標(biāo)，對應(yīng)峰面積結(jié)果為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程Y=9 832 120.6X+1 282 419.5，r=0.9 999，結(jié)果表明:五味子醇甲在0.17～0.85 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度考察 取同一批號樣品，按供試品的制備方法制備，測定，連續(xù)5次進樣。測定結(jié)果:峰面積平均值為7 708 154，RSD為0.51%，說明精密度較好。

2.4.3 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液，分別在不同的時間內(nèi)進行重復(fù)測定。供試品溶液在0、3、6、12、24 h的測試結(jié)果:RSD為0.35%，峰面積在0～24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重現(xiàn)性考察 對同一批號的樣品按供試品的制備方法制備，依法進行5次獨立測定，測試結(jié)果:五味子醇甲平均含量為 0.102 2 mg/粒，RSD為1.28%。結(jié)果表明本方法的重現(xiàn)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 取同法測定的已知含量為0.106 3 mg/粒的復(fù)方榛花肝寧膠囊樣品為基底，加入0.085 mg/mL五味子醇甲對照品溶液3 mL(即0.255 0 mg)，依含量測定方法測定加樣回收率，結(jié)果:平均加樣回收率為98.85%，RSD=1.08%(n=5)，符合規(guī)定要求。

2.5 樣品含量測定 分別精密吸取5 μL對照品溶液、5 μL供試品溶液，注入液相色譜儀，依法測定。測定10批樣品中五味子醇甲的含量，測定計算得樣品平均含量為0.094 8 mg/粒。

2.6 五味子藥材含量測定 按《中華人民共和國藥典》［3］(一部)五味子藥材含量測定方法，對生產(chǎn)廠家提供的3批五味子藥材進行了五味子醇甲的含量測定。測得五味子醇甲的含量均大于0.40%，結(jié)果表明藥材符合藥典規(guī)定。

2.7 限度的確定 經(jīng)過對投料的五味子藥材的測定，其五味子含量為0.42%～0.50%，由于在本制劑中五味子為粉末直接入藥，故收率可達90%以上，證明本法是可行的，以樣品最低含量0.08 mg/粒的5%計算，本品含量限度暫定為:含五味子按五味子醇甲(C24H32O7)計，應(yīng)不得少于0.07 mg/粒。

3 結(jié)論

本實驗結(jié)果表明，所建立的方法具有良好分離度、精密度、重現(xiàn)性，且回收率在規(guī)定范圍內(nèi);五味子醇甲進樣量在0.17～0.85μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;樣品在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性;本品含量限度暫定為:五味子按五味子醇甲(C24H32O7)計，含量不得少于0.07 mg/粒，為控制該品質(zhì)量提供了依據(jù)［4］。

［1］高雁，李廷利.五味子有效成分的藥理作用研究進展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2011，39(6):104-106.

［2］史琳，王志成，馮敘橋.五味子化學(xué)成分及藥理作用的研究進展［J］.藥物評價研究，2011，34(3):208-212.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［4］黃曉東，路倩，沈楠，等.五味子多糖對人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞體外增殖及侵襲能力的抑制作用［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2015，41(2):287-290.