HPLC法測定咽炎含片中橙皮苷的含量

朱建明

甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050

咽炎含片由金銀花、菊花、陳皮等12味中藥組成，具有解毒、消炎、止痛等功效［1］。陳皮為其主要化痰藥物，為了控制其化痰作用，筆者采用HPLC對陳皮中的主要成分橙皮苷進行含量測定?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-9A高效液相色譜儀(日本島津公司)；641旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士BüCHI公司)；HS-6150D超聲波清洗儀(上海珂淮儀器有限公司)；SK-M2サンプルミル粉碎器（日本松下公司）；AE-260 AE-240電子天平（瑞士科恩公司）；HHS21-8電熱恒溫水浴鍋（上海科升公司)；CS101-30型電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶四達試驗設(shè)備有限公司），TGL-16G高速臺式離心機（上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥 咽炎含片(四川華星藥業(yè)有限公司)，橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，批號：721-9102)；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，并經(jīng)0.45μm濾膜過濾，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法［2-4］

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Shim-pack C18(150mm×6.0 mm，5μm)；流動相：甲醇 -0.1%磷酸水溶液(40∶60)；流速：1.0mL/min；進樣體積：10μL；檢測波長：283 nm；柱溫：30℃。

2.1.2 對照品溶液的制備 取橙皮苷化學(xué)對照品適量，精密稱定。用甲醇定容于25mL容量瓶中，制成177μg/mL的對照品溶液備用。

2.1.3 供試品溶液的制備 取咽炎含片，研細，混勻，取粉末約1.0 g，精密稱定，加甲醇15mL，回流40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容到25mL容量瓶中，作為供試品溶液。

2.1.4 陰性溶液的制備 在去除陳皮的條件下，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.2 結(jié)果

2.2.1 線性關(guān)系考察 取橙皮苷對照品約4.44 mg，精密稱定，用甲醇定容到25 mL容量瓶中，超聲使其充分溶解，作為貯備液。精密吸取對照品儲備液0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、2.0 mL，置 10 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，按“2.1”項色譜條件操作，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，處理得到直線回歸方程：Y=6 999.6X+1 921.6，r=0.999 9，線性范圍為 14.21～35.52μg/mL。

2.2.2 精密度實驗 精密吸取橙皮苷對照品溶液，連續(xù)進樣5次，5μL/次，以“2.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，峰面積的RSD=0.44%。

2.2.3 專屬性實驗 分別取對照品溶液、樣品溶液、陰性對照品溶液，按“2.1”項色譜條件操作，記錄色譜圖。結(jié)果供試品與對照品溶液均在相同保留時間出現(xiàn)吸收峰，空白溶液在此處無吸收峰。見圖1。

圖1 咽炎含片中橙皮苷專屬性考察

2.2.4 重現(xiàn)性實驗 取同批咽炎含片，研細、混勻，取粉末6份，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，測定，記錄色譜圖，其RSD為0.42%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.2.5 回收率實驗 采用加樣回收法，取已知含量的同批咽炎含片，研細，混勻，取粉末適量，精密稱定，精密加入17.76μg/mL的橙皮苷對照品溶液 1、2、3mL，每個比例制備 3份樣品。按“2.1”項下相應(yīng)方法制備供試品溶液，測定，記錄色譜圖，計算回收率，平均方法回收率分別為99.75%、RSD為1.13%，符合相關(guān)規(guī)定。結(jié)果見表1。

2.2.6 樣品測定 取10批咽炎含片，研細，混勻，取粉末適量，精密稱定，按“2.1”項方法制備供試品溶液，測定，計算十批樣品中橙皮苷的平均含量為5.99 mg/g，RSD=1.72%。結(jié)果見表2。

表1 咽炎含片中橙皮苷的回收率測定(n=3)

表2 咽炎含片中橙皮苷的含量測定(n=3)

3 討論

HPLC是一種常用的分離分析色譜，較普通的液相色譜有以下優(yōu)點：速度快、靈敏度高、分辨率高、柱子可反復(fù)使用［5-8］。本實驗通過對HPLC色譜條件的考察，得到橙皮苷色譜條件及標準曲線，通過測定樣品中橙皮苷的含量，可得到咽炎含片的質(zhì)量控制標準。該方法簡單、快速、重現(xiàn)性好，適應(yīng)性廣泛，具有良好的實用價值。

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