不同儀器檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果的可比性分析

張青楊，刁瑩瑩，鄭軍

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，沈陽(yáng) 110001）

不同儀器檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)果的可比性分析

張青楊，刁瑩瑩，鄭軍

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，沈陽(yáng) 110001）

目的探討網(wǎng)織紅細(xì)胞（RET）在不同儀器之間檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性。方法使用參考方法對(duì)Sysmex XE-5000進(jìn)行儀器校準(zhǔn)后，比較Sysmex XE-5000與Sysmex XN-20兩臺(tái)儀器檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞比率的相關(guān)性。結(jié)果校準(zhǔn)之后，兩臺(tái)儀器檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞比率的結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），與手工方法比較也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。結(jié)論使用參考方法對(duì)Sysmex XE-5000的網(wǎng)織紅細(xì)胞校準(zhǔn)之后可使實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的儀器比對(duì)具有可比性。

網(wǎng)織紅細(xì)胞；校準(zhǔn)；參考方法；可比性

網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte，RET）是反映骨髓造血功能的重要指標(biāo)，對(duì)貧血疾病的診斷、療效觀察和預(yù)后有重要的臨床價(jià)值［1，2］。近年來(lái)，隨著臨床快速診療的需求，傳統(tǒng)的手工檢測(cè)方法逐漸被自動(dòng)化網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)所取代［3］。但是，目前國(guó)內(nèi)外尚未建立標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)系統(tǒng)，對(duì)儀器檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性評(píng)估尚未完善。同時(shí)，近年來(lái)醫(yī)療機(jī)構(gòu)間檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)的需求愈加迫切，為滿足此需求，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同儀器檢測(cè)結(jié)果的可比性更值得重視。

本研究選取本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞的兩種儀器，嘗試對(duì)廠家不提供校準(zhǔn)方案的儀器（Sysmex XE-5000）自建校準(zhǔn)方案校準(zhǔn)后，與經(jīng)配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)之后的儀器（Sysmex XN-20）進(jìn)行結(jié)果比較，同時(shí)使用手工方法對(duì)儀器結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，探索網(wǎng)織紅細(xì)胞校準(zhǔn)方案的可行性以及實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同檢測(cè)系統(tǒng)之間的可比性。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

根據(jù)血紅蛋白（hemoglobin，Hb）＞120 g/L、90～120 g/L、＜90 g/L分為高、中、低3組。所有標(biāo)本均來(lái)自本院門(mén)診、住院患者和健康體檢者，隨機(jī)選取Hb高、中、低3個(gè)水平各20例，共60例標(biāo)本用于可比性分析。標(biāo)本均為空腹采集的EDTA-K2抗凝靜脈血，混勻后當(dāng)天完成檢測(cè)。

1.2 儀器與試劑

日本Sysmex公司生產(chǎn)的Sysmex XE-5000與Sysmex XN-20全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及其原裝配套試劑、全血質(zhì)控物；Sysmex XN-20配套校準(zhǔn)品XNCAL；新鮮配制的新亞甲藍(lán)染液；帶Miler窺盤(pán)的Nikon共覽顯微鏡。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本處理：嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程，使用配套校準(zhǔn)品XN-CAL Sysmex XN-20進(jìn)行儀器校準(zhǔn)（包括RET參數(shù)），分別對(duì)Sysmex XN-20和Sysmex XE-5000進(jìn)行儀器驗(yàn)證，空白計(jì)數(shù)、精密性均達(dá)到廠商要求的標(biāo)準(zhǔn)，3個(gè)水平的室內(nèi)質(zhì)控合格。60例新鮮全血樣本，分別使用Sysmex XN-20和Sysmex XE-5000的自動(dòng)進(jìn)樣模式進(jìn)行RET檢測(cè)，每份標(biāo)本檢測(cè)2遍取均值；同時(shí)依據(jù)文獻(xiàn)［4］對(duì)儀器法計(jì)數(shù)剩余標(biāo)本進(jìn)行新亞甲藍(lán)染色后制片，由2位工作人員使用帶Miler窺盤(pán)的共覽顯微鏡進(jìn)行手工計(jì)數(shù)，每份標(biāo)本油鏡下計(jì)數(shù)1 000個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)的RET百分?jǐn)?shù)，取均值。

1.3.2 校準(zhǔn)Sysmex XE-5000 RET檢測(cè)通道：使用參考方法［5］對(duì)1份標(biāo)本賦值。采集新鮮全血分裝在3個(gè)試管中，第1份標(biāo)本取100 μL與等量的新亞甲藍(lán)染液充分混勻后，室溫下染色5 min后制備3張玻片，由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的工作人員使用共覽顯微鏡同時(shí)計(jì)數(shù)，每張玻片至少計(jì)數(shù)5 000個(gè)紅細(xì)胞后，計(jì)算該標(biāo)本RET比率為2.53%。

參考血細(xì)胞分析常規(guī)參數(shù)校準(zhǔn)方案［6］，驗(yàn)證空白計(jì)數(shù)及精密度合格后，使用第2份標(biāo)本在Sysmex XE-5000連續(xù)檢測(cè)11次，去除第1次結(jié)果后計(jì)算均值為2.90%，與定值偏差為14.6%，參照Sysmex公司在Sysmex XN-20上標(biāo)定的校準(zhǔn)允許誤差（8.38%），嚴(yán)重超出范圍，需要調(diào)整儀器系數(shù)；通過(guò)計(jì)算將儀器校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整（1 000→871），然后使用第3份標(biāo)本在Sysmex XE-5000連續(xù)檢測(cè)11次，去除第1次結(jié)果后計(jì)算均值為2.55%，與定值偏差為0.79%，符合廠商標(biāo)定要求，校準(zhǔn)合格。

1.3.3 校準(zhǔn)后儀器比對(duì)：按照儀器操作規(guī)程對(duì)Sysmex XE-5000重新進(jìn)行儀器驗(yàn)證，空白計(jì)數(shù)、精密性均達(dá)到廠商要求的標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)1.3.1方法重新對(duì)60例新鮮全血樣本進(jìn)行儀器檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 校準(zhǔn)前儀器比對(duì)

Sysmex XE-5000在校準(zhǔn)之前，與經(jīng)配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)之后的Sysmex XN-20在檢測(cè)RET時(shí)的結(jié)果相比，除Hb高值組偏差較小外，其余2組和總體與Sysmex XN-20的均值相比，偏差均超過(guò)廠商標(biāo)定的儀器間比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（20%），需對(duì)Sysmex XE-5000進(jìn)行RET通道校準(zhǔn)；同時(shí)進(jìn)行t檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，2臺(tái)儀器總體數(shù)據(jù)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 校準(zhǔn)后比對(duì)

表1 校準(zhǔn)前2種儀器RET檢測(cè)結(jié)果比較Tab.1 Comparison of RET between two instruments before calibration（

表1 校準(zhǔn)前2種儀器RET檢測(cè)結(jié)果比較Tab.1 Comparison of RET between two instruments before calibration（

*Bias=（XE 5000-XN 20）/XN 20×100%

Group n Sysmex XN-20 Sysmex XE-5000 t P Bias（%）* Total 60 2.35±2.03 2.92±1.72 -1.763 0.040 24.26 Hb＞120 g/L 20 1.27±0.59 1.42±0.55 -0.839 0.203 11.81 Hb 90-120 g/L 20 1.78±0.78 2.15±0.70 -1.728 0.046 20.79 Hb＜90 g/L 20 3.99±2.72 4.82±2.64 -0.989 0.164 20.40

表2中數(shù)據(jù)表明，在經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)之后，Sysmex XE-5 000與Sysmex XN-20在檢測(cè)RET時(shí)的結(jié)果相比，分組及整體均值偏差均在廠商規(guī)定范圍之內(nèi)，t檢驗(yàn)差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；整體數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，相關(guān)性良好（回歸曲線為y=0.989x-0.018，r2= 0.993，t=91.01，P＜0.01）。

同時(shí)，2種儀器法檢測(cè)結(jié)果與手工法相比，除Hb低值組外差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；整體數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，相關(guān)性良好（Sysmex XE-5000回歸曲線為y=0.907x+0.192，r2=0.985，t=55.53，P＜0.01；Sysmex XN-20回歸曲線為y=0.910x+0.227，r2= 0.975，t=47.20，P＜0.01）。

表2 校準(zhǔn)后RET檢測(cè)結(jié)果比較Tab.2 Comparison of RET after calibration

表2 校準(zhǔn)后RET檢測(cè)結(jié)果比較Tab.2 Comparison of RET after calibration

1）compared with by hand，P＜0.05；*Bias=（XE 5000-XN 20）/XN 20×100%.

Group n By hand Sysmex XN-20 Sysmex XE-5000 Comparison Between Different Instruments t P Bias（%）* Total 60 2.33±2.22 2.35±2.03 2.30±2.01 0.118 0.892 -2.13 Hb＞120g/L 20 1.26±0.77 1.27±0.59 1.26±0.58 0.081 0.936 -0.79 Hb 90-120g/L 20 1.71±1.01 1.78±0.78 1.77±0.87 0.019 0.985 -0.56 Hb＜90g/L 20 4.02±3.01 3.99±2.72 3.88±2.721） 0.128 0.898 -2.76

3 討論

隨著檢驗(yàn)技術(shù)的快速發(fā)展，帶RET的全自動(dòng)血液分析儀在臨床廣泛的應(yīng)用，使RET的檢測(cè)從傳統(tǒng)的人工染色鏡檢被全自動(dòng)血液分析儀采用的流式分析技術(shù)取代，在計(jì)數(shù)RET的同時(shí)還可根據(jù)熒光強(qiáng)度等檢測(cè)多個(gè)RET參數(shù)，為臨床貧血性疾病的鑒別診斷以及療效監(jiān)測(cè)提供了新型指標(biāo)。同時(shí)，由于發(fā)展規(guī)模和所服務(wù)的臨床對(duì)象的變化，許多實(shí)驗(yàn)室會(huì)同時(shí)擁有多個(gè)品牌或者同一品牌不同型號(hào)的血細(xì)胞分析儀，伴隨醫(yī)療機(jī)構(gòu)間檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)的需求，如何保證這些不同品牌或型號(hào)的血細(xì)胞分析儀檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，是目前各實(shí)驗(yàn)室必須面對(duì)的問(wèn)題?；鶎俞t(yī)院已經(jīng)嘗試使用可溯源的定值抗凝新鮮全血對(duì)不同檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間統(tǒng)一比對(duì)，效果顯著［7］。

2011年，衛(wèi)生部先后發(fā)布實(shí)施了《血細(xì)胞分析的校準(zhǔn)指南》和《網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的參考方法》兩份衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。然而，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于儀器法RET檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)還未確立，參考區(qū)間建立也正處于研究之中，標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)體系尚未完善；而資料顯示［8］，儀器在長(zhǎng)期使用過(guò)程中，其校準(zhǔn)系數(shù)會(huì)發(fā)生變化，為使血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確，也更有臨床診斷價(jià)值，必須定期校準(zhǔn)。

Sysmex XN系列是Sysmex血細(xì)胞分析儀中首次配置了標(biāo)準(zhǔn)的RET校準(zhǔn)品的儀器，而Sysmex XE-5000則尚未生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)的RET校準(zhǔn)品，因此為2種類型儀器之間結(jié)果的可比性增加了難度。

本研究參考血細(xì)胞分析常規(guī)參數(shù)校準(zhǔn)方案［4］，使用參考方法［5］對(duì)新鮮全血樣本賦值后對(duì)Sysmex XE-5000的RET比率進(jìn)行校準(zhǔn)，并對(duì)校準(zhǔn)前后2臺(tái)儀器之間的結(jié)果可比性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，經(jīng)校準(zhǔn)后Sysmex XE-5000與Sysmex XN-20在不同濃度水平上的檢測(cè)結(jié)果均具有可比性，同時(shí)通過(guò)手工法驗(yàn)證，結(jié)果準(zhǔn)確性良好，證明該校準(zhǔn)方案在臨床實(shí)驗(yàn)室操作中具備可行性。但在本試驗(yàn)進(jìn)行過(guò)程中發(fā)現(xiàn)Hb低值組在Sysmex XE-5000與手工法間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中有3份標(biāo)本的偏差均超過(guò)10%，測(cè)定值均在9.8～12.9之間，考慮是由于RET數(shù)量大、密度高、RNA物質(zhì)多，這對(duì)于手工法及儀器法都造成一定干擾，使結(jié)果出現(xiàn)較大誤差。

綜上所述，通過(guò)自建方案對(duì)Sysmex XE-5000進(jìn)行儀器校準(zhǔn)后，可使實(shí)驗(yàn)室內(nèi)多臺(tái)儀器間的檢測(cè)結(jié)果更具可比性，檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。同時(shí)由于該校準(zhǔn)方案所需材料均為臨床標(biāo)本，也不需要高精端儀器，方便了基層醫(yī)院的借鑒與應(yīng)用。但仍需定期參加實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)計(jì)劃（衛(wèi)生部、省內(nèi)EQA等），以持續(xù)關(guān)注檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

［1］Karagülle M，Gündüz E，Mutlu FS，et al.Clinical significance of reticulocyte hemoglobin content in the diagnosis of iron deficiency anemia［J］.Turk J Hematol，2013，30（2）：153-156.

［2］Oustamanolakis P，Koutroubakis IE，Messaritakis I，et al.Measurement of reticulocyte and red blood cell indices in the evaluation of anemia in inflammatory bowel disease［J］.J Crohns Colitis，2011，5（4）：295-300.

［3］李琳，張磊，李偉.血細(xì)胞分析儀與手工法RET計(jì)數(shù)結(jié)果比對(duì)及其臨床意義［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（14）：1928-1929.

［4］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：131-132.

［5］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的參考方法（WS/T 346-2011）［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011：1-5.

［6］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.血細(xì)胞分析的校準(zhǔn)指南（WS/T 347-2011）［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2011：1-5.

［7］李芳文，張吉平，鐘蘭君，等.用新鮮血進(jìn)行基層醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室間血細(xì)胞分析儀比對(duì)的探討［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（10）：1282-1284.

［8］張志強(qiáng).血細(xì)胞分析儀校準(zhǔn)系數(shù)變化分析［J］.中國(guó)醫(yī)療設(shè)備，2014，29（5）：61-63.

（編輯 武玉欣）

Comparison Study of Reticulocyte Analysis Results Determined by Different Instruments

ZHANGQing-yang，DIAO Ying-ying，ZHENGJun

（Department of Laboratory Medicine，The First Hospital，China Medical University，Shenyang110001，China）

Objective To explore the correlation of reticulocyte（RET）detection results between different instruments.MethodsThe reference method（Sysmex XE-5000）for instrument calibration was carried out，then the results of reticulocyte ratio tested by Sysmex XE-5000 and Sysmex XN-20 was compared.ResultsThere was no statistical significance between two instruments for detecting reticulocyte ratio（P＞0.05）.Moreover，no statistically significant differences were found when comparing these data with the manual method（P＞0.05）.ConclusionInternal instruments are comparable for RET after calibrating Sysmex XE-5000 using reference method.

reticulocyte；calibration；reference method；comparability

R446.11

B

0258-4646（2015）11-0975-03

國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目（81102231）

張青楊（1986-），男，技師，本科.

刁瑩瑩，E-mail：cmudyy@163.com

2015-04-02

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：