采用M allory染色法制作腦垂體組織切片

李 莉，柳 潔

（湖南醫(yī)藥學(xué)院 組織胚胎學(xué)教研室，湖南懷化418000）

采用M allory染色法制作腦垂體組織切片

李 莉，柳 潔

（湖南醫(yī)藥學(xué)院 組織胚胎學(xué)教研室，湖南懷化418000）

目的：探討采用Mallory染色法制作腦垂體組織切片制作方法。方法：取成年人腦垂體，Helly固定液，固定24h，自來(lái)水沖洗24h后進(jìn)行脫水、包埋、切片、脫蠟、脫汞等步驟配置染液。結(jié)果：Mallory染色的腦垂體遠(yuǎn)側(cè)部中嗜酸性細(xì)胞呈深紅色，胞質(zhì)中嗜酸性顆粒清晰可見(jiàn)，嗜堿性細(xì)胞呈紫藍(lán)色，胞質(zhì)中的嗜堿性顆粒也清晰可見(jiàn)，嫌色細(xì)胞體積較小，胞質(zhì)少。染色較淺，故細(xì)胞界限不清楚。結(jié)論：組織固定液需Helly，效果好。染液中95%乙醇分色十分關(guān)鍵，一定要在顯微鏡下嚴(yán)格控制，否則細(xì)胞的顏色顆粒難以顯示清晰。染液現(xiàn)染現(xiàn)配，需過(guò)濾。

Mallory染色法；腦垂體組織切片；染液配置

腦垂體是人體內(nèi)最復(fù)雜的內(nèi)分泌腺，分泌多種激素，分為腺垂體與神經(jīng)垂體，腺垂體又分為結(jié)節(jié)部、中間部和遠(yuǎn)側(cè)部，遠(yuǎn)側(cè)部有嗜酸性細(xì)胞，嗜堿性細(xì)胞和嫌色細(xì)胞三種，其功能的復(fù)雜性決定了組織結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。人腦垂體是很難得的材料，同時(shí)顯示上述的三種細(xì)胞，雖染色方法很多，但效果不佳［1］，為此經(jīng)過(guò)反復(fù)的實(shí)驗(yàn)，我們采用曼氏（Mallory）染色法的改良，既能觀察腦垂體的結(jié)構(gòu)，又能腺垂體內(nèi)嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞和嫌色細(xì)胞3種細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)清晰可辨且顏色亮麗，取得滿意的效果。

1 材料和方法

1.1 取材和固定：取成年人腦垂體，Helly固定液（含有重鉻酸鉀2.5g，氯化汞5g，硫酸鈉1.0g，蒸餾水100mL，甲醛10m L），固定24h，自來(lái)水沖洗24h。

1.2 脫水、包埋與切片：30%的乙醇梯度上行至無(wú)水乙醇進(jìn)行脫水，二甲苯透明，常規(guī)石蠟包埋，切片，切片厚度4μm。

1.3 脫蠟：二甲苯去蠟2h（室溫高1h，室內(nèi)室溫2h）。

1.4 脫汞：切片從二甲苯取出，由無(wú)水乙醇上行至70%的乙醇脫水，再入Lugol氏碘乙醇3～5min，除去組織中的汞鹽沉淀后，自來(lái)水流水沖洗3min，至5%的硫代硫酸鈉液洗去棕色，至切片組織無(wú)色，約2min后，自來(lái)水沖洗2min，入蒸餾水后再入MalloryI染色液媒染3min。

1.5 染色程序：切片入MalloryI染色液3min。蒸餾水洗，入MalloryⅡ染色中2min，蒸餾水洗，稍吸干入70%～95%乙醇分色。鏡下鑒別再上行至無(wú)水乙醇，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封固。

2 染液配置

2.1 MalloryI染色液：酸性復(fù)紅0.5g，蒸餾水100mL。

2.2 MalloryⅡ染色液：磷鎢酸1.0g，蒸餾水100mL。

2.3 MalloryⅢ染色液：甲苯胺藍(lán)0.5g，桔黃G2.0g，草酸2.0g，蒸餾水100mL。

3 染色結(jié)果

Mallory染色的腦垂體遠(yuǎn)側(cè)部中嗜酸性細(xì)胞呈深紅色，胞質(zhì)中嗜酸性顆粒清晰可見(jiàn)，嗜堿性細(xì)胞呈紫藍(lán)色，胞質(zhì)中的嗜堿性顆粒也清晰可見(jiàn)，嫌色細(xì)胞體積較小，胞質(zhì)少。染色較淺，故細(xì)胞界限不清楚。

4 注意事項(xiàng)

4.1 組織的取材一定要迅速，固定液用Helly固定液效果較其他固定液好。

4.2 切片的厚度4μm較適宜觀察。

4.3 脫蠟、脫汞要徹底，否則影響染色的效果。

4.4 組織在MalloryⅢ染色液時(shí)間不能太長(zhǎng)，否則整個(gè)組織昏暗不亮。

4.5 組織在95%乙醇分色，鏡下觀察尤為重要，分色至嫌色細(xì)胞核清晰，整個(gè)視野清楚為止。

4.6 染液不能存放太久，否則影響染色效果。

4.7 染液需過(guò)濾處理，方能使用。

5 討論

能觀察腦垂體的組織結(jié)構(gòu)，區(qū)分腺垂體的三種細(xì)胞，是組織學(xué)教學(xué)的需要［2］。制作優(yōu)良的腦垂體切片標(biāo)本，多年來(lái)一直困擾技術(shù)人員。顯示腦垂體細(xì)胞的方法很多。以往采用HE染色法，此方法染色效果不理想，腦垂體的各種細(xì)胞不易區(qū)分［3］。我們使用Mallory染色法，腦垂體遠(yuǎn)側(cè)部切片中嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞和嫌色細(xì)胞，形態(tài)清晰，且顏色亮麗，非常適合組織學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)使用，提高了學(xué)生對(duì)腦垂體各種細(xì)胞的辨認(rèn)能力和實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果［4］。該染色法染色時(shí)注意的問(wèn)題是：組織固定液需Helly，效果好。染液中95%乙醇分色十分關(guān)鍵，一定要在顯微鏡下嚴(yán)格控制，否則細(xì)胞的顏色顆粒難以顯示清晰。染液現(xiàn)染現(xiàn)配，需過(guò)濾。

［1］王志東，張子軍.彈力纖維染色方法的改良與體會(huì) ［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2013，8（26）：245－246.

［2］郝奮，岳淑芬，黃世琪.腦垂體Mallory染色的體會(huì)［J］.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，5（4）：313.

［3］柳潔，馬曉健.兩種染色方法對(duì)腦垂體三種嗜色細(xì)胞顯示效果比較［J］.解剖學(xué)雜志，2003，5（3）：362.

［4］尚宏偉，張立新，路欣，等.不同染色方法對(duì)人腦垂體細(xì)胞顯示效果的比較［J］.解剖學(xué)研究，2013，6（3）：208.

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