中藥預(yù)防流感的作用與黏膜免疫相關(guān)性探討

郭圣敏

中藥預(yù)防流感的作用與黏膜免疫相關(guān)性探討

郭圣敏

目的探討中藥在預(yù)防流感中的作用和黏膜免疫的相關(guān)性。方法選用BALB/c小鼠120只, 分成A、B兩組, A組分為六小組, 每組10只, 分別為是空白組(使用生理鹽水)、銀翹散制劑組、冰香散滴鼻組、玉屏風(fēng)散制劑組、冰香散霧化組、利巴韋林組。連續(xù)給藥12 d后處死小鼠, 分離血清,收集每只小鼠的鼻咽沖洗液、腸道沖洗液以及支氣管肺泡灌洗液, 然后使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)其免疫球蛋白A(IgA)的含量, 空白組的小鼠稱體重和肺重, 測(cè)定肺指數(shù)。B組同樣分為6組, 每組10只小鼠, 對(duì)應(yīng)每組分別是病毒對(duì)照組、銀翹散制劑組、冰香散滴鼻組、玉屏風(fēng)散制劑組、冰香散霧化組、利巴韋林組。給藥1周后對(duì)照組小鼠感染15 LD50流感病毒, 使用滴鼻感染的方式, 感染后連續(xù)給藥5 d, 1次/d, 感染5 d后處死小鼠, 同樣每只小鼠稱體重并測(cè)定肺指數(shù), 分離血清, 收集每只小鼠的鼻咽沖洗液、腸道沖洗液以及支氣管肺泡灌洗液, 然后使用ELISA檢測(cè)其IgA的含量。結(jié)果在對(duì)流感病毒所感染的小鼠產(chǎn)生的抑制作用方面, 銀翹散制劑組、利巴韋林組與病毒組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在對(duì)正常小鼠黏膜免疫產(chǎn)生的影響方面, 銀翹散制劑組小鼠血清中IgA含量明顯較空白對(duì)照組高, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；利巴韋林組小鼠支氣管-肺泡內(nèi)sIgA較空白組下降明顯(P＜0.05)。在對(duì)流感病毒感染小鼠黏膜免疫功能的影響方面, 利巴韋林組小鼠血清中IgA含量明顯較對(duì)照對(duì)要高(P＜0.05)。結(jié)論中藥預(yù)防流感和黏膜免疫具有相關(guān)性。

流感；中藥；黏膜免疫；免疫球蛋白A

流感是有流感病毒引起的一種呼吸道傳染病, 病毒首先接觸呼吸道的黏膜, 這樣黏膜就成了阻止病毒入侵的第一道防線, 黏膜內(nèi)的免疫細(xì)胞分泌的IgA能與病毒結(jié)合, 阻止病毒入侵。中醫(yī)藥在預(yù)防流感上具有悠久的歷史, 其給藥方式主要有口服、佩戴和煙熏等［1］。本研究旨在利用小鼠模型來探討重要預(yù)防流感的作用和黏膜免疫的一些相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 6周大雌性BALB/c小鼠120只, SPF級(jí),購(gòu)于上海市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和器材 乙醚、小鼠ELISA試劑盒、利巴韋林；醫(yī)用的超聲霧化器、滅菌鍋、醫(yī)用的凈化工作臺(tái)、電子分析天平純水儀、酶標(biāo)儀、低溫冰箱等。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)所用藥物 銀翹散制劑、冰香散、玉屏風(fēng)散制劑、利巴韋林。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)所用病毒株 甲型流感病毒 (H1N1) 鼠肺的適應(yīng)株是購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所, 本研究所病毒室冷凍保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 A組：60只小鼠隨機(jī)分成六組, 每組10只,分別為空白組(使用生理鹽水)、銀翹散制劑組、冰香散滴鼻組、玉屏風(fēng)散制劑組、冰香散霧化組、利巴韋林組。針對(duì)不同的預(yù)防方藥使用口服、滴鼻和霧化吸入的方式。給藥1次/d, 共計(jì)12 d。給藥的劑量分別為銀翹散制劑口服40 g/kg,冰香散滴鼻組0.03 g/kg, 玉屏風(fēng)散制劑組60 g/kg, 冰香散霧化組0.6 g/kg, 利巴韋林組口服100 mg/kg。給藥12 d后處死小鼠,收集血清、鼻咽沖洗液、支氣管肺泡沖洗液以及腸道沖洗液后ELISA檢測(cè)IgA的含量?？瞻捉M小鼠稱體重、肺重, 測(cè)定肺指數(shù)。B組：給藥量與A組相同。對(duì)照組小鼠在乙醚麻醉后采用滴鼻感染的方式感染15LD50病毒液, 每只小鼠約0.05 ml, 在給藥1周后攻擊感染, 感染5 d后處死, 稱體重和肺重, 測(cè)定肺指數(shù)。收集血清、鼻咽沖洗液、支氣管肺泡沖洗液以及腸道沖洗液后ELISA檢測(cè)IgA的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。顯著性檢驗(yàn)取α=0.05。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同中藥對(duì)流感病毒所感染的小鼠產(chǎn)生的抑制作用

通過實(shí)驗(yàn),空白組小鼠的肺重為(0.15±0.02)mg, 肺重指數(shù)(0.72±0.06)g/g, 肺指數(shù)的抑制率0；病毒對(duì)照組小鼠的肺重為(0.23±0.04)mg, 肺重指數(shù)(1.62±0.36)g/g, 肺指數(shù)的抑制率0；銀翹散制劑組的肺重為(0.20±0.05)mg, 肺重指數(shù)(1.04±0.43)g/g, 肺指數(shù)的抑制率35.45%；利巴韋林組的肺重為(0.18±0.04)mg, 肺重指數(shù)(1.09±0.41)g/g, 肺指數(shù)的抑制率33.10%。統(tǒng)計(jì)可知, 病毒對(duì)照組與空白組比較發(fā)現(xiàn)小鼠肺重明顯增加, 肺指數(shù)明顯上升, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。銀翹散制劑、利巴韋林作用后小鼠肺指數(shù)的抑制率在25.48%～41.62%。銀翹散制劑組、利巴韋林組與病毒對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 不同中藥對(duì)正常小鼠黏膜免疫產(chǎn)生的影響 研究結(jié)果顯示, 連續(xù)12 d給藥后, 空白組血清IgA為(1.81±0.35)g/L, 鼻煙sIgA為(0.86±0.47)g/L, 支氣管-肺泡sIgA為(13.12±2.48)g/L,腸道sIgA為(24.89±20.79)g/L；銀翹散制劑組血清IgA為(5.58±1.52)g/L, 鼻煙sIgA為(0.91±0.85)g/L, 支氣管-肺泡sIgA為(13.72±2.78)g/L, 腸道sIgA為(38.59±28.48)g/L；利巴韋林組血清IgA為(2.31±1.15)g/L, 鼻煙sIgA為(0.53± 0.25)g/L, 支氣管-肺泡sIgA為(7.45±1.69)g/L, 腸道sIgA為(25.15±20.35)g/L。

銀翹散制劑組小鼠血清中IgA含量明顯較空白組要高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 由此可知銀翹散制劑給藥方式都能提升小鼠的免疫力。利巴韋林組小鼠支氣管-肺泡內(nèi)sIgA較空白組下降明顯, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.3 不同預(yù)防中藥對(duì)流感病毒感染小鼠黏膜免疫功能的影響

病毒對(duì)照組血清sIgA為(1.75±0.43)g/L, 鼻煙sIgA(0.35± 0.15)g/L, 支氣管肺泡sIgA為(8.15±1.71)g/L, 腸道sIgA為(90.25± 47.10)g/L；銀翹散制劑組血清sIgA為(1.93±0.35)g/L, 鼻煙sIgA (0.37±0.25)g/L, 支氣管肺泡sIgA為(8.98±1.21)g/L, 腸道sIgA為(89.89±32.10)g/L；利巴韋林組血清sIgA為(1.11±0.37)g/L, 鼻煙sIgA(0.31±0.15)g/L, 支氣管肺泡sIgA為(4.41±1.21)g/L, 腸道sIgA為(72.35±23.89)g/L。結(jié)果顯示利巴韋林組小鼠血清中IgA含量明顯較病毒對(duì)照組要高, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。利巴韋林則顯著降低了支氣管-肺泡內(nèi)sIgA的分泌。

3 討論

病毒入侵時(shí), 機(jī)體的第一道屏障是黏膜, 而黏膜免疫反應(yīng)中其主要作用的就是IgA。流感病毒入侵機(jī)體往往是通過呼吸道黏膜, 因此, 呼吸道黏膜在抵抗流感的過程中起著舉足輕重的作用, 呼吸道黏膜分泌的分泌型IgA-sIgA的多少?zèng)Q定了機(jī)體對(duì)流感的抵抗力大?。?］。

研究表明中藥對(duì)流感的預(yù)防有著很好的療效［3］。本研究結(jié)果表明銀翹散制劑、冰香散、玉屏風(fēng)散、冰香散作用后小鼠的肺指數(shù)明顯改善, 都能夠很好的預(yù)防流感, 并在一定程度上減輕感染鼠肺后的病變程度。利巴韋林給藥能夠抑制黏膜分泌IgA, 不宜作為流感預(yù)防用藥?？诜?、佩戴和煙熏三種中藥給藥的方式都可以作用于消化道和呼吸道黏膜, 使黏膜分泌IgA。因此, 中藥預(yù)防流感的作用和黏膜免疫具有一定的相關(guān)性。

［1］ 孫翠娥,楊篤然,丁正琪,等.中草藥煙熏對(duì)空氣消毒及預(yù)防呼吸道傳染病作用的研究.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2007,7(12):1884-1885.

［2］ 徐培平,丁偉,趙昉,等.中藥預(yù)防流感作用與黏膜免疫相關(guān)性研究.中國(guó)免疫學(xué)雜志, 2012,28(11):992-998.

［3］ 蘇惠萍,沈薔,武維屏,等.中醫(yī)預(yù)防方案干預(yù)社區(qū)流感的隨機(jī)對(duì)照研究.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2010,33(10):690-694.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.14.212

2015-01-07］

471000 洛陽市第一人民醫(yī)院