熒光光度法在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用

王宇 靳偉東 劉天堯 蘭凱

熒光光度法在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用

王宇 靳偉東 劉天堯 蘭凱

目的探究熒光光度法在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值。方法以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針，分析熒光光度法在血清中膽汁酸檢測(cè)中的應(yīng)用情況。結(jié)果金屬離子等共存物質(zhì)在與人體內(nèi)濃度相近時(shí)，膽汁酸與鋱—環(huán)丙沙星體系的相互作用并不明顯，采用熒光探針?lè)椒y(cè)定膽汁酸，可用于測(cè)定血清中膽汁酸含量。結(jié)論以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針測(cè)量血清中膽汁酸具有可行性。

臨床檢驗(yàn)；熒光光度法；熒光探針

臨床檢驗(yàn)是臨床醫(yī)學(xué)的重要組成部分，也是臨床生物化學(xué)的重要研究領(lǐng)域，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展以及衛(wèi)生保健水平的提高，對(duì)臨床檢驗(yàn)提出了更高的要求，目前臨床檢驗(yàn)常用的方法包括色譜分析法、光度分析法等，其中光度分析法具有準(zhǔn)確度高、分析速度快、選擇性好等諸多優(yōu)點(diǎn)，在臨床應(yīng)用較為廣泛，尤其是熒光光度法，靈敏度較高，現(xiàn)已成為各種制劑中藥物分析的常用方法，如抗生素、抗瘧藥、止痛藥、麻醉藥等，其在臨床檢驗(yàn)中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用[1]。本研究以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針，分析熒光光度法在膽汁酸測(cè)定中的應(yīng)用情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)資料

所用儀器包括F380型熒光分光光度計(jì)（由天津港東科技發(fā)展股份有限公司生產(chǎn)）和SevenExcellence酸度計(jì)（由梅特勒—托利多國(guó)際股份有效公司生產(chǎn)），試劑有膽酸儲(chǔ)備液、諾氟沙星儲(chǔ)備液、環(huán)丙沙星儲(chǔ)備液、Tb3+儲(chǔ)備液等，儲(chǔ)備液和工作液均置于生化培養(yǎng)箱內(nèi)保存，控制溫度為0～4℃。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將諾氟沙星儲(chǔ)備液和Tb3+儲(chǔ)備液依次置于比色管中，蒸餾水稀釋定容，測(cè)定熒光光譜及強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)條件為：NF=1.1×10-6mol/L，Tb3+=7.5×10-5mol/L，pH=9.0，BA=1.0×10-6mol/L，明確酸度、鋱離子、反應(yīng)時(shí)間、加入順序、共存物質(zhì)對(duì)熒光強(qiáng)度的影響，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，線性范圍為5.0×10-7～2.0×10-6mol/L，熒光強(qiáng)度與BA濃度成正比，確立BA測(cè)定方法，以血清膽汁酸測(cè)定肝功能具有可行性。將環(huán)丙沙星儲(chǔ)備液和Tb3+儲(chǔ)備液依次置于比色管中，蒸餾水稀釋定容，振蕩后靜止10 min，測(cè)定熒光光譜及強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)條件為：CIP=7.6×10-7mol/L，Tb3+=5.0×10-5mol/L，pH=9.2，BA=1.0×10-6mol/L，分析膽汁酸與鋱—環(huán)丙沙星體系的相互作用。

2 結(jié)果

2.1 相互作用關(guān)系分析

當(dāng)pH值為9.2時(shí)，鋱—環(huán)丙沙星體系的熒光強(qiáng)度F值達(dá)到最大，此時(shí)緩沖溶液加入量為1.5 ml，反應(yīng)時(shí)間為10 min，試劑加入順序依次為CIP、Tb3+、pH、BA；當(dāng)Tb3+濃度體積在8.0×10-5～1.0×10-4mol/L時(shí)，熒光強(qiáng)度達(dá)到最大并保持穩(wěn)定，此時(shí)溶液體積在1.6～2.0 ml范圍內(nèi)，以1.8 ml為準(zhǔn)，CIP與Tb3+配比為1：118。測(cè)定結(jié)果顯示，Zn2+（Cl-）濃度為1.2×10-4mol/L，熒光強(qiáng)度為-1.14%；Ca2+（Cl-）濃度為1.0×10-4mol/L，熒光強(qiáng)度為-3.44%；Fe3+（SO42-）濃度為8.9×10-8mol/L，熒光強(qiáng)度為-5.35%；Mg3+（SO42-）濃度為5.0×10-4mol/L，熒光強(qiáng)度為-0.92%；鳥(niǎo)嘌呤濃度為8.0×10-9mol/L，熒光強(qiáng)度為-8.73；L-組氨酸濃度為1.0×10-4mol/L，熒光強(qiáng)度為-5.84%；葡萄糖濃度為1.0×10-3mol/L，熒光強(qiáng)度為-1.39%?？梢?jiàn)金屬離子等共存物質(zhì)在與人體內(nèi)濃度相近時(shí)，相互之間不會(huì)產(chǎn)生影響。

2.2 臨床檢驗(yàn)應(yīng)用分析

優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件后，采用熒光探針?lè)椒y(cè)定膽汁酸，其檢測(cè)限較低，濃度參考值4.8×10-4～4.8×10-3mol/L；取0.4 ml血清置于試管中，加入Al2O3和異丙醇，劑量分別為2.0 g、12.0 ml，在60℃水浴中加熱，超聲振蕩，時(shí)間分別為2 min、10 min，取上層離心，轉(zhuǎn)速為4 000 轉(zhuǎn)/min，時(shí)間為min，置于試管備用，求得血清中膽汁酸濃度，其中血清1樣品含量和膽汁段平均值分別為2.26×10-6mol/L、6.13×10-6mol/L，回收率為97.1%，血清濃度為6.74×10-4mol/L；血清2樣品含量和膽汁段平均值分別為2.10×10-6mol/L、6.03×10-6mol/L，回收率為98.3%，血清濃度為6.24×10-4mol/L；血清3樣品含量和膽汁段平均值分別為1.73×10-6mol/L、5.65×10-6mol/L，回收率為98.0%，血清濃度為5.18×10-4mol/L。

3 討論

熒光光度分析法是臨床檢驗(yàn)中較為先進(jìn)的一種手段，具有高靈敏度、寬線性范圍等優(yōu)勢(shì)，在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用十分廣泛，相關(guān)報(bào)道統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，熒光光度分析法現(xiàn)多用于氨芐青霉素、氟羅沙星、甲硝唑、醋酸潑尼松龍、醋酸甲地孕酮、諾氟沙星、氧氟沙星、依諾沙星等藥物測(cè)定中，可獲得pH值、線性范圍及檢測(cè)限，測(cè)定樣品以藥物制劑為主，并拓展到血清中藥物含量的測(cè)定中，隨著熒光分析技術(shù)的不斷進(jìn)步，臨床檢驗(yàn)可供選擇的熒光光度法也越來(lái)越多，如同步熒光法、熒光探針?lè)?、熒光免疫分析法、光化學(xué)熒光法等，這些新方法在臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用取得的結(jié)果較為滿意[2-3]。以第三代喹諾酮藥物和熒光探針為例，諾氟沙星和環(huán)丙沙星的抗菌譜廣，是鋱離子的理想配體；因某些金屬離子具有熒光特性，將其作為熒光探針置換生命金屬離子與生物分子配位體相結(jié)合，通過(guò)測(cè)定熒光基本參數(shù)，可獲得與生物大分子相關(guān)的一些信息[4]。

膽汁酸是膽汁的主要成分，其代謝以肝臟為中心，涉及到膽道系統(tǒng)等途徑，肝膽疾病患者體內(nèi)血清膽汁酸濃度會(huì)發(fā)生明顯變化，膽汁酸含量的測(cè)定對(duì)肝膽疾病的診斷具有重要的臨床意義[5]。本次實(shí)驗(yàn)中，以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，分析熒光光度法在血清中膽汁酸檢測(cè)中的應(yīng)用情況，結(jié)果顯示，金屬離子等共存物質(zhì)在與人體內(nèi)濃度相近時(shí)，膽汁酸與鋱—環(huán)丙沙星體系的相互作用并不明顯，采用熒光探針?lè)椒y(cè)定膽汁酸，其檢測(cè)限較低，可用于測(cè)定血清中膽汁酸含量，其濃度在正常參考值范圍內(nèi)，證實(shí)以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針測(cè)量血清中膽汁酸具有可行性，

綜上所述，熒光探針可成功用于血清中膽汁酸的測(cè)定，是一種很有發(fā)展前景的肝功能試驗(yàn)，在一定程度上反映了熒光光度分析法在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值，至于該方法在其他方面的應(yīng)用還有待進(jìn)一步研究。

[1]王美丹，高燕，趙渤年. 熒光分析法在藥學(xué)研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J].食品與藥品，2013，15（1）：61-64.

[2]陸明，范國(guó)榮，汪楊，等. 測(cè)量不確定度在藥品檢測(cè)領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥事，2013，27（5）：485-492.

[3]高霞，周凌云，席景磚. 熒光分析法在環(huán)境有機(jī)污染物檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室，2011（4）：2008-2016.

[4]吳曉紅，李小華. 熒光光度法在食品檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 食品工業(yè)，2012，33（12）：172-175.

[5]徐靜，孫興權(quán)，韓慧，等. 熒光法在食品理化檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2015（1）：17-24.

Application of Fluorescence Spectrophotometry in Clinical Examination

WANG Yu JIN Weidong LIU Tianyao LAN Kai, Heilongjiang Provincial Prison Administration Center Hospital, Harbin 150080, China

ObjectiveTo explore the application value of fluorescence spectrophotometry in clinical examination.MethodsWith terbium foxacin as fuorescent probe, analysis on Application of fuorescence method in the detection of serum bile acid.ResultsMetal ions coexisting substances in and are close to the concentration of human body and the interaction of bile acid with terbium ciprofoxacin system is not obvious, determination of bile acids by fluorescence probe technique can be used for the determination of bile acids in serum.ConclusionWith terbium foxacin as fuorescence probe in the measurement of serum bile acids is feasible.

Clinical test, Fluorescence spectrometry, Fluorescence probe

R446.1

A

1674-9308（2015）32-0037-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.32.027

150080哈爾濱，黑龍江省監(jiān)獄管理局中心醫(yī)院