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    HPLC測(cè)定不同廠家發(fā)酵型茶葉中阿魏酸含量

    2015-01-26 22:50:40陳錦胡茂豐文欣吳章華劉素純
    中國(guó)釀造 2015年4期
    關(guān)鍵詞:長(zhǎng)沙液相湖南

    陳錦,胡茂豐,文欣,吳章華,劉素純,5*

    (1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙410128;2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙410128;3.湖南省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,湖南長(zhǎng)沙410128;4.長(zhǎng)沙市調(diào)料食品工程技術(shù)研究中心,湖南長(zhǎng)沙410000;5.食品科學(xué)與生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南長(zhǎng)沙410128)

    HPLC測(cè)定不同廠家發(fā)酵型茶葉中阿魏酸含量

    陳錦1,胡茂豐2,文欣3,吳章華4,劉素純1,5*

    (1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙410128;2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南長(zhǎng)沙410128;3.湖南省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,湖南長(zhǎng)沙410128;4.長(zhǎng)沙市調(diào)料食品工程技術(shù)研究中心,湖南長(zhǎng)沙410000;5.食品科學(xué)與生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南長(zhǎng)沙410128)

    采用高效液相色譜法測(cè)定不同廠家發(fā)酵型茶葉中阿魏酸的含量,色譜條件為Shimpack VP-ODS C18(150 mm×6 mm,5 μm)色譜柱,流動(dòng)相為0.2%冰醋酸-甲醇(28∶72),檢測(cè)波長(zhǎng)314 nm,柱溫30℃,流速1.0 mL/min。結(jié)果表明,阿魏酸在20~100 μg/mL范圍內(nèi)線性良好(相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8),平均加樣回收率為98.73%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.71%。測(cè)得9個(gè)廠家不同發(fā)酵型茶葉中阿魏酸的含量在22.559~30.286 μg/g,其中湖南益陽(yáng)的湘益茯磚茶阿魏酸含量最高,為30.286 μg/g。該方法簡(jiǎn)便快速,適用于發(fā)酵型茶葉中阿魏酸含量的測(cè)定。

    阿魏酸含量;發(fā)酵型茶;高效液相色譜;檢測(cè)條件

    發(fā)酵型茶是中國(guó)傳統(tǒng)茶類之一,生產(chǎn)歷史悠久,早在11世紀(jì)前后就有有關(guān)于茶蒸制成團(tuán)塊,堆積20多天使其變色的記載,因其獨(dú)特的品質(zhì)風(fēng)味,深受人們喜愛(ài)。微生物在其渥堆過(guò)程中起到關(guān)鍵作用,GREENWALT C J等[1]研究表明,經(jīng)微生物發(fā)酵后的茶比綠茶具有更高的生物活性,這種活性主要來(lái)源于酚酸類物質(zhì)。阿魏酸是桂皮酸的衍生物,是普遍存在的一種酚酸,具有抗氧化[2]、抗血栓[3]、降血脂[4]、抗菌消炎[5]以及抗突變防癌[6]等功能。其含量測(cè)定方法的報(bào)道有很多,主要有氣相色譜法[7]、薄層顯色掃描法[8]、紫外分光光度法[9]及高效液相色譜法[10]。但目前,國(guó)內(nèi)外大多研究集中在茶葉中沒(méi)食子酸[11]、原兒茶酸[12]、咖啡酸[13]、蘆丁[14]等,少見(jiàn)發(fā)酵型茶中阿魏酸含量測(cè)定的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)就提高阿魏酸的穩(wěn)定性及高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法測(cè)定阿魏酸含量的方法進(jìn)行了探討,并用HPLC法測(cè)定了不同廠家生產(chǎn)的不同的幾種典型發(fā)酵型茶中阿魏酸的含量,并進(jìn)行比較分析,為發(fā)酵型茶葉中阿魏酸含量的質(zhì)量控制研究提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    茶葉樣品為市場(chǎng)購(gòu)買的黑毛茶,中藥粉碎機(jī)粉碎過(guò)100目篩后備用;茯磚茶、普洱茶、青磚茶3種茶葉各選3個(gè)不同茶廠生產(chǎn)的產(chǎn)品作為測(cè)定的樣品,中藥粉碎機(jī)粉碎過(guò)100目篩后,備用。

    甲醇(色譜純)、冰醋酸(分析純):國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;水為超純水;其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純;阿魏酸標(biāo)樣:上海紫一試劑廠。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Waters 2695高效液相色譜儀、Waters 2996二級(jí)管陣列檢測(cè)器、Empower色譜工作站:美國(guó)Waters公司;FW135中藥粉碎機(jī):天津市泰斯特儀器有限公司;BCD-206BD電冰箱:青島海爾有限公司;TE214S分析天平:長(zhǎng)沙康源科技開(kāi)發(fā)有限公司;CF-RXⅡ離心機(jī):日本日立公司;pHS-3E pH計(jì):上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;SB120D超聲波清洗機(jī):寧波新芝生物科技股份有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品的制備

    稱取茶葉樣品粉末(過(guò)100目篩)約0.2 g,于10 mL容量瓶中,用體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇加至刻度,超聲(40 kHz、120 W)提取30 min,靜置。取上清液過(guò)0.45 μm濾膜,取濾液進(jìn)樣。

    1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

    稱取阿魏酸對(duì)照樣品1 mg于250 mL棕色容量瓶中,用體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇加至刻度,超聲(40 kHz、120 W)提取30 min,靜置。取上清液過(guò)0.45 μm濾膜,取濾液進(jìn)樣。

    1.3.3 色譜條件

    Shimpack VP-ODS C18(150 mm×6 mm,5 μm)色譜柱,流動(dòng)相選用0.2%冰醋酸-甲醇(28∶72)[11],流速1mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)314 nm,柱溫30℃,進(jìn)樣量10 μL。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 測(cè)定條件的選擇

    文獻(xiàn)報(bào)道中高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸含量多用體積分?jǐn)?shù)為70%、50%的甲醇、體積分?jǐn)?shù)為70%、50%的乙醇等作為溶劑[11],樣品制備方法的篩選中,對(duì)比了4種溶劑對(duì)樣品中阿魏酸的提取,結(jié)果用體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇提出的阿魏酸最為完全,因此確定用體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇作溶劑,但因阿魏酸不穩(wěn)定,容易分解,對(duì)照品溶液及樣品溶液配制后,應(yīng)存放于棕色試劑瓶中避光低溫保存,且須當(dāng)天配制。阿魏酸對(duì)照品溶液在190~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描,結(jié)果表明,阿魏酸在波長(zhǎng)314 nm處吸收靈敏度最高,因此選用314 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

    2.2 阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及含量測(cè)定

    標(biāo)品及樣品高效液相色譜圖見(jiàn)圖1。吸取質(zhì)量濃度分別為20 μg/mL、40 μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL對(duì)照品溶液進(jìn)行色譜測(cè)定,按上述色譜條件測(cè)定峰面積,以阿魏酸含量(x)對(duì)峰面積(y)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2,得回歸方程:y=0.727x+0.019 2,相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8。結(jié)果表明,阿魏酸質(zhì)量濃度在20~100 μg/mL間與峰面積有良好的線性關(guān)系[16]。

    2.3 方法學(xué)考察

    2.3.1 精密度試驗(yàn)

    按照樣品測(cè)定方法,精密吸取上述阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,每次進(jìn)樣量10 μL,結(jié)果(見(jiàn)表1)可知,檢測(cè)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)為1.46%,<5%,表明儀器精密度良好[16]。

    2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn)

    精密稱取茶葉樣品(過(guò)100目篩)約2.0 g(6份),按1.3.1制備樣品溶液,測(cè)定阿魏酸含量,結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知,檢測(cè)結(jié)果RSD為1.67%,<5%,表明該檢測(cè)方法重現(xiàn)性好[16]。

    2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

    精密吸取同一樣品溶液,進(jìn)樣量10 μL,分別測(cè)定阿魏酸的含量,結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知,檢測(cè)結(jié)果RSD為1.59%,<5%,表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.3.4 加樣回收率試驗(yàn)

    取茶葉樣品約0.1 g共6份,于10 mL容量瓶中,加入阿魏酸對(duì)照品20 μg,加體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇至刻度,超聲30 min靜置,取上清液過(guò)0.45 μm濾膜,取濾液,進(jìn)樣10 μL,按上述色譜條件測(cè)定阿魏酸含量,分別計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表4。

    由表4可知,檢測(cè)結(jié)果所得平均回收率為98.73%,RSD=1.71%,<5%,表明該方法準(zhǔn)確度高。

    2.3.5 樣品提取的條件選擇

    稱取樣品茶葉粉末(過(guò)100目篩)約0.4 g于10 mL棕色容量瓶中(3份),用體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇稀釋至刻度,分別超聲(40 kHz,120 W)提取10 min、20 min、30 min,靜置。取上清液過(guò)0.45 μm濾膜,取濾液,色譜檢測(cè)條件下進(jìn)樣10 μL,檢測(cè)阿魏酸含量,結(jié)果見(jiàn)表5。

    由表5可知,超聲提取10 min未將阿魏酸提取充分,超聲提取20 min較好,與30 min含量沒(méi)有明顯變化,因此,選用超聲提取20 min。

    2.4 樣品中阿魏酸含量的測(cè)定

    不同茶廠具有各自獨(dú)立的生產(chǎn)線與發(fā)酵環(huán)境,同一廠家的茶類產(chǎn)品成分大致相近,因此本研究選擇不同茶廠較具代表性的一種發(fā)酵型茶葉產(chǎn)品作為研究對(duì)象。茯磚茶、青磚茶、普洱茶3種茶葉各選3個(gè)不同茶廠生產(chǎn)的產(chǎn)品作為測(cè)定的樣品,中藥粉碎機(jī)粉碎過(guò)100目篩后,備用。每個(gè)樣品取2.0 g左右,按1.3.1制備樣品溶液,進(jìn)樣10 μL,檢測(cè)阿魏酸含量,結(jié)果見(jiàn)表6。

    由表6可知,產(chǎn)于湖南益陽(yáng)的茯磚茶,阿魏酸含量最高30.286 μg/g,產(chǎn)于云南的普洱茶阿魏酸含量略低為25.762 μg/g,產(chǎn)于湖北的青磚茶阿魏酸含量最低為22.559 μg/g,其含量比湖南益陽(yáng)的茯磚茶低25.3%,可見(jiàn)不同產(chǎn)地廠家的發(fā)酵型茶葉中阿魏酸的含量差異很大,可能是由原料及制備工藝的差異引起的。

    3 結(jié)論

    本試驗(yàn)確定了發(fā)酵型茶葉中阿魏酸的HPLC最佳檢測(cè)條件為Shimpack VP-ODS C18色譜柱(150 mm×6 mm,5μm),流動(dòng)相選用0.2%冰醋酸-甲醇(28∶72)[11],流速1 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)314 nm,柱溫30℃,進(jìn)樣10 μL。并在上述條件下進(jìn)行了儀器精密度試驗(yàn)RSD=1.46%、重復(fù)性試驗(yàn)RSD=1.67%、穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD=1.59%、加樣回收率試驗(yàn)RSD=1.71%,均證明試驗(yàn)的可行性良好。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)行測(cè)定各個(gè)地區(qū)不同廠家發(fā)酵型茶的茶葉樣品中阿魏酸的含量,測(cè)定結(jié)果表明產(chǎn)于湖南益陽(yáng)的茯磚茶阿魏酸含量最高為30.286 μg/g,不同產(chǎn)地廠家的發(fā)酵型茶葉中阿魏酸的含量差異很大,可能是由原料及制備工藝的差異引起的,具體原因有待進(jìn)一步探討。對(duì)不同產(chǎn)地不同差價(jià)的發(fā)酵型茶葉中阿魏酸的含量進(jìn)行比較對(duì)完善發(fā)酵型茶葉的質(zhì)控體系具有重要意義,茶葉中阿魏酸的具體含量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)有待進(jìn)一步研究。

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    CHEN Jin1,HU Maofeng2,WEN Xin3,WU Zhanghua4,LIU Suchun1,5*
    (1.College of Food Science and Technology,Hunan Agricultural University,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,China; 2.College of Bioscience and Biotechnology,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,China; 3.Hunan Institute of Food Quality Supervision Inspection and Research,Changsha 410128,China; 4.Changsha Seasoning Food Engineering Technology Research Center,Changsha 410000,China; 5.Hunan Key Laboratories of Food Science and Biotechnology,Changsha 410128,China)

    The ferulic acid contents of fermented tea from different manufacturers were determined by HPLC.The separation was performed on Shimpack VP-ODS C18column(150 mm×6 mm,5 μm)with 0.2%glacial acetic acid-methyl alcohol(28∶72)as mobile phase.Ferulic acid was detected at 314 nm with flowing rate 1.0 ml/min at 30℃.The calibration curve was linear(R2=0.999 8)in the range of 20-100 μg/ml for ferulic acid.The average recovery was 98.73%and relative standard deviation was 1.71%,respectively.The ferulic acid contents of fermented tea from 9 manufacturers were 22.559-30.286 μg/g,and the ferulic acid content in Xiangyi brick tea was the highest of 30.286 μg/g.The method was quick and convenient for ferulic acid determination for fermented tea.

    ferulic acid content;fermented tea;HPLC;determination conditions

    O657.7

    A

    0254-5071(2015)04-0161-04

    10.11882/j.issn.0254-5071.2015.04.037

    2015-03-17

    湖南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012NK3072)

    陳錦(1989-),女,碩士研究生,研究方向?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)。

    *通訊作者:劉素純(1966-),女,博士,教授,研究方向?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)。

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