農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時表達影響因素研究

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農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時表達影響因素研究

【作者】 孫蔓莉；孟玉玲；張強；黃桂艷；單衛(wèi)星

【機構(gòu)】 西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護學(xué)院；西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院；旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室

通過探究根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導(dǎo)的煙草瞬時表達體系的影響因素,確定煙草瞬時表達的最佳條件,為目的基因的功能研究提供技術(shù)支持。利用馬鈴薯晚疫病抗性基因RB和致病疫霉菌效應(yīng)基因Avrblb 1作為報告基因,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的注射滲透法,摸索農(nóng)桿菌菌懸液OD600值和菌系(遺傳背景)、煙草品種及其生長時期等因素,確定煙草高效的基因瞬時表達條件。研究結(jié)果表明:介導(dǎo)煙草基因瞬時表達的根癌農(nóng)桿菌菌懸液適宜OD600值為0.3～0.8;在菌懸液OD600值為0.1及以上時,AGL1、GV3101和C58C1介導(dǎo)的報告基因瞬時表達效率相似,均引發(fā)較強的葉片壞死反應(yīng);在農(nóng)桿菌菌懸液OD600值小于0.1時,AGL1介導(dǎo)的瞬時表達效率最高。測試的煙草品種都具備較高的瞬時表達效率,苗齡6～8周的煙草適合分析。通過測試農(nóng)桿菌菌懸液OD600值和菌系(遺傳背景)、煙草品種及其生長時期等因素,確定本氏煙和普通煙均可實現(xiàn)基因高效瞬時表達的條件。

摘自《西北農(nóng)業(yè)學(xué)報》 2015年01期