檢測(cè)器的種類及其在藥物分析中的應(yīng)用

周 玥* 姚書揚(yáng) 吳 斌 鄭 璐

（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)上海海尼藥業(yè)有限公司，上海 201318）

檢測(cè)器的種類及其在藥物分析中的應(yīng)用

周 玥* 姚書揚(yáng) 吳 斌 鄭 璐

（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)上海海尼藥業(yè)有限公司，上海 201318）

本文介紹了高效液相色譜分析上常用的檢測(cè)器，并對(duì)其在藥物分析方面的應(yīng)用進(jìn)行了介紹。

檢測(cè)器，藥物分析

高效液相色譜（HPLC）是現(xiàn)代分離測(cè)定的重要手段。它的特點(diǎn)在于能夠高效、快速地分離樣品，同時(shí)使用范圍廣泛，針對(duì)大分子、高沸點(diǎn)、極性強(qiáng)和對(duì)熱敏感的化合物具有很好的分離效果。因此，在醫(yī)藥衛(wèi)生、食品、環(huán)保等各個(gè)領(lǐng)域已得到了廣泛的應(yīng)用。在各國(guó)的藥典中，HPLC也作為一種重要的分析鑒別手段而格外受到重視。其中檢測(cè)器作為HPLC的關(guān)鍵組成部分，可用于連續(xù)監(jiān)測(cè)被色譜系統(tǒng)分離后的柱流出物的組成和含量變化。檢測(cè)器的靈敏度、響應(yīng)范圍、穩(wěn)定性等都會(huì)對(duì)藥物分析產(chǎn)生巨大影響。為了更好的進(jìn)行藥物研究，人們研發(fā)出了多種檢測(cè)器。本文主要將目前在藥物分析中所使用的檢測(cè)器做一個(gè)綜述，以便廣大讀者對(duì)檢測(cè)器的種類及應(yīng)用有一個(gè)更加全面和清晰的認(rèn)識(shí)。

檢測(cè)器主要分為通用型檢測(cè)器和選擇型檢測(cè)器兩大類。其中通用型檢測(cè)器是指可連續(xù)測(cè)量色譜柱流出物（包括流動(dòng)相和樣品組分）的全部特性變化；而選擇型檢測(cè)器是用以測(cè)量被分離樣品組分某種特性的變化，這類檢測(cè)器對(duì)樣品中組分的某種物理或化學(xué)性質(zhì)敏感，而這一性質(zhì)是流動(dòng)相所不具備的，或至少在操作條件下不顯示。選擇型的檢測(cè)器主要有紫外檢測(cè)器（UV）、光電二極管陣列檢測(cè)器（PDAD）、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器（ECD）、放射性檢測(cè)器、手性檢測(cè)器、紅外檢測(cè)器、發(fā)光檢測(cè)器。通用型檢測(cè)器主要有示差折光檢測(cè)器（RID）、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）、電噴霧檢測(cè)器（CAD）、質(zhì)譜檢測(cè)器（MSD）、核磁檢測(cè)器（NMRD）。下面將逐一對(duì)以上檢測(cè)器進(jìn)行介紹。

紫外檢測(cè)器（UV）：紫外檢測(cè)器作為HPLC中最常用的檢測(cè)器，覆蓋面大概為75%。它的工作原理是當(dāng)樣品組分通過流通池的時(shí)候，對(duì)特定的紫外波長(zhǎng)有吸收，根據(jù)濃度的不同，吸收強(qiáng)度也會(huì)有相應(yīng)的變化，從而可以得到濃度-時(shí)間的曲線。它具有靈敏度高、穩(wěn)定性好、線性范圍寬的特點(diǎn)。但是只能應(yīng)用于具有紫外吸收波長(zhǎng)的化合物的測(cè)定。20世紀(jì)80年代出現(xiàn)了一種新型紫外檢測(cè)器一二極管陣列檢測(cè)器（DAD），用二極管陣列裝置可以同時(shí)獲得樣品的色譜圖及每個(gè)色譜圖組分的吸收光譜，色譜圖用于定量，光譜圖用于定性。韓敏、姚忠明等人采用Agilent SB-C18色譜柱，乙腈-水為流動(dòng)相，HPLC-UVD對(duì)新型減肥藥奧利司他進(jìn)行了溶出度檢測(cè)，得到了一種專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度好、檢測(cè)效率高的分析方法［1］。初立梅、徐家根等人采用用Hypersil ODS色譜柱，以三水合乙酸鈉溶液-甲醇為流動(dòng)相，對(duì)用于治療骨關(guān)節(jié)病的氨基葡萄糖進(jìn)行了分析，建立了一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的分析方法，并可用于硫酸氨基葡萄糖含量的測(cè)定［2］。PDAD是一種多通道的檢測(cè)器，它利用一系列的光電二極管可以同時(shí)測(cè)定吸光度、時(shí)間、波長(zhǎng)三者的關(guān)系。并可繪制出三者的三維譜圖，也可做出任意波長(zhǎng)的吸光度一時(shí)間曲線（色譜圖）和任意時(shí)間的吸光度-波長(zhǎng)曲線（紫外可見光譜圖）。光電二極管陣列檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是掃描速度快、能夠采用比較光譜法測(cè)定峰的純度、繪制三維譜圖、進(jìn)行微柱分析等［3］。童奎驊采用：Waters系列高效液相色譜儀-光電二極管陣列檢測(cè)器（2996型）對(duì)杠板歸不同部位中的齊墩果酸和熊果酸進(jìn)行了含量測(cè)定研究。建立了一個(gè)簡(jiǎn)便、快速，分離效果好的分析方法，為杠板歸不同部位中熊果酸和齊墩果酸的定量分析及質(zhì)量評(píng)價(jià)控制提供了科學(xué)依據(jù)［4］。

熒光檢測(cè)器：目前使用的FD多是具有流通池的熒光分光光度計(jì)。熒光檢測(cè)器的檢測(cè)限較紫外檢測(cè)器的靈敏度高、同時(shí)它的線性范圍廣、對(duì)流動(dòng)相的要求較低、只要流動(dòng)相不會(huì)發(fā)射熒光，就可采用熒光檢測(cè)器進(jìn)行分析。但是其缺點(diǎn)就是使用范圍狹窄，只能適用于能產(chǎn)生熒光或衍生物能發(fā)熒光的物質(zhì)，主要用于氨基酸、多環(huán)芳烴、維生素、甾體化合物及酶等的檢測(cè)。涂星等人復(fù)制藥物誘導(dǎo)失眠動(dòng)物模型、平臺(tái)水環(huán)境誘導(dǎo)失眠動(dòng)物模型、刺激誘導(dǎo)失眠動(dòng)物模型，以Agilent 1100熒光檢測(cè)器高效液相系統(tǒng)為檢測(cè)工具，甲醇-醋酸鈉緩沖液為流動(dòng)相，采取梯度洗脫，測(cè)定正常組及模型組大鼠腦組織中谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、?；撬岬暮浚?］。

電化學(xué)檢測(cè)器（ECD）：電化學(xué)檢測(cè)器從工作原理上可以分為兩大類，一類是以測(cè)量電解電流為基礎(chǔ)的伏安檢測(cè)器，主要有安培、極譜、庫(kù)倫三種；另一類是以測(cè)量液體電阻變化為基礎(chǔ)的電導(dǎo)檢測(cè)器。在過去的十幾年中，ECD檢測(cè)器的發(fā)展十分迅速，在生物、氨基糖苷類等方面，尤其是低濃度的生物樣品分析方面發(fā)揮了重要的作用。廣泛應(yīng)用于卡托霉素、四環(huán)素、磺胺類藥物、氨基糖苷類抗生素等藥物的檢測(cè)。

其余的選擇型檢測(cè)器還有放射性檢測(cè)器、手性檢測(cè)器、紅外檢測(cè)器等。其中放射性檢測(cè)器主要是針具有放射性標(biāo)記的藥物，廣泛應(yīng)用于藥物動(dòng)力學(xué)的研究。手性檢測(cè)器主要針對(duì)具有光學(xué)活性的化合物，無光學(xué)活性的化合物則不受干擾。紅外檢測(cè)器主要用于凝膠色譜，并且要求流動(dòng)相在該紅外波長(zhǎng)下無吸收?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)器是應(yīng)用某些物質(zhì)在化學(xué)反應(yīng)時(shí)發(fā)出微弱的光的原理制造的。捕集這些光信號(hào)可以檢測(cè)出極微量的成分。這種檢測(cè)器的靈敏度比熒光檢測(cè)器高100～10000倍，可用于血液中微量成分等低濃度的分析。

檢測(cè)器中的另一大類型是通用型檢測(cè)器，下文將對(duì)一些常用的通用型檢測(cè)器做一些介紹。

示差折光檢測(cè)器（RID）：RID是一種通用型檢測(cè)器，即如果選擇合適的溶劑，幾乎對(duì)所有的物質(zhì)都可以進(jìn)行檢測(cè)。它是利用樣品和流動(dòng)相在流經(jīng)檢測(cè)池時(shí)吸光度的差異來顯示樣品的濃度，主要用于糖類的分析。

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）：ELSD就是利用在一定條件下粒子的數(shù)量不變，光散射強(qiáng)度正比于由溶質(zhì)濃度決定的粒子的大小而進(jìn)行檢測(cè)的。對(duì)所有不揮發(fā)溶質(zhì)都有響應(yīng)，是一種較理想的通用檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度高，檢出限為l0 ng，溶劑成分及溫度的波動(dòng)對(duì)其影響不大。彭娟等人采用薄層色譜法對(duì)天麻、淫羊藿、丹參進(jìn)行定性鑒別。采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器法對(duì)黃芪甲苷含量進(jìn)行測(cè)定，得到了一種很好的該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)［6］。

電噴霧檢測(cè)器（CAD）：電噴霧檢測(cè)器是近年來戴安公司推出的一款新型檢測(cè)器。它的檢測(cè)原理是當(dāng)有分析物顆粒流經(jīng)檢測(cè)器時(shí)，顆粒產(chǎn)生的信號(hào)電流與樣品中分析物的質(zhì)量成正比，因此無論何種化合物，只要進(jìn)樣質(zhì)量相同響應(yīng)都基本一致，所以電噴霧檢測(cè)器能檢測(cè)所有非揮發(fā)物。李祖明等人用反相高效液相色譜，二極管陣列檢測(cè)器，電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)研究類球紅細(xì)菌紅色素，初步分離出一種結(jié)構(gòu)，并對(duì)其進(jìn)行了鑒定［7］。

質(zhì)譜檢測(cè)器（MSD）：質(zhì)譜檢測(cè)器（MSD）作為通用型檢測(cè)器具有靈敏度高、選擇性好、指紋特征性強(qiáng)、可用于微量或痕量分析等特點(diǎn)，常與高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜法（GC）聯(lián)用。吳宏偉等人用Diamonsil C18色譜柱，乙腈-0.1%甲酸為流動(dòng)相，梯度洗脫，三重四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)器，MRM掃描方式，12 min內(nèi)對(duì)血漿中12種氨基酸進(jìn)行定量分析。應(yīng)用本方法對(duì)腦缺血模型和黃芪注射液的治療作用做出評(píng)價(jià)［8］。

核磁檢測(cè)器（NMRD）：LC-NMR聯(lián)用技術(shù)在20世紀(jì)80年代初期已經(jīng)開始研究，由于NMR靈敏度低，試劑昂貴、固定相技術(shù)的單一使其發(fā)展緩慢。近年來，在靈敏度、氘代溶劑、核磁流體探頭的設(shè)計(jì)方面的迅速發(fā)展，使其在藥品、食品、環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面得到了廣泛應(yīng)用。Zelh.M等人采用此項(xiàng)技術(shù)從茅膏菜屬中鑒定出了十三種化學(xué)成分，其中有三種為首次報(bào)道［9］。

綜上所述，檢測(cè)器在對(duì)于藥品、食品的質(zhì)量安全控制以及研究毒物快速分析、環(huán)境檢測(cè)等有關(guān)生命科學(xué)的發(fā)展均具有重要意義。

［1］韓敏，姚忠明，龔毅飛.奧利司他膠囊溶出度檢測(cè)［J］.中國(guó)抗生素雜質(zhì)，2013，38（4）：268-271.

［2］初立梅，徐家根.反相高效液相色潽法測(cè)定硫酸氨基葡萄糖泡騰片中硫酸氨基葡萄糖的含量［J］.兒科藥學(xué)雜志，2012，18（3）：40-42.

［3］Huber L.二極管陣列檢測(cè)技術(shù)在高效液相色譜中的應(yīng)用［M］. Hewlett-Packard，1967.

［4］童奎驊.杠板歸不同部位中齊墩果酸和熊果酸含量的測(cè)定研究［J］.浙江中醫(yī)雜志，2011，46（4）：294-295.

［5］涂星，郜紅利.熒光高效液相色譜法測(cè)定三種失眠模型大鼠腦組織氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2013，21（5）：74-77.

［6］彭娟，閆寒.HPLC-ELSD 測(cè)定養(yǎng)血益腎膠囊中黃芪甲苷的含量［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜質(zhì)，2013，20（7）：52-54.

［7］李祖明，李健.高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法分離鑒定類球紅細(xì)菌紅色素［J］.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，44（8）：76-80.

［8］吳宏偉，高健.基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的氨基酸代謝組學(xué)方法研究黃芪注射液治療腦缺血［J］.分析化學(xué)，2013，41（3）：344-348.

［9］Zehl M，Braunberger C，Conrad J.Identification and quantification of flavonoids and ellagic acid de-rivatives in therapeutically important Drosera speciesby LC-DAD，LC-NMR，NMR，and LCMS［J］.Anal Bioanal Chem，2011，400（8）： 2565-2576.

R9

C

1671-8194（2015）012-0294-02