老年婦女外陰營養(yǎng)不良組織中細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因的表達(dá)分析

董 麗

（汪清縣中醫(yī)院，吉林 汪清 133200）

老年婦女外陰營養(yǎng)不良組織中細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因的表達(dá)分析

董 麗

（汪清縣中醫(yī)院，吉林 汪清 133200）

目的 探討老年婦女外陰營養(yǎng)不良組織中細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因的表達(dá)情況。方法 選取我院接收的70例老年婦女外陰營養(yǎng)不良患者作為觀察1組，同時(shí)選取10例老年婦女外陰營養(yǎng)不良惡變患者作為觀察2組，利用原位末端標(biāo)記及免疫組化S-P法對兩組患者蠟包埋組織中的細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因bcl-2、bax的表達(dá)情況進(jìn)行檢測。同時(shí)選取10例石蠟包埋的老年婦女正常外陰皮膚進(jìn)行對照（對照組）。結(jié)果 三組患者均在細(xì)胞凋亡及bcl-2、bax的表達(dá)現(xiàn)象，且觀察1組患者的細(xì)胞凋亡指數(shù)及bcl-2、bax的表達(dá)方面均明顯高于觀察2組（P＜0.05）；bcl-2、bax二者間的表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05），在惡變部分凋亡細(xì)胞的分布區(qū)域及bcl-2、bax的表達(dá)方面則無明顯相關(guān)性。結(jié)論 外陰營養(yǎng)不良的發(fā)生發(fā)展與惡變及細(xì)胞凋亡間有較大的關(guān)系，且bcl-2、bax發(fā)揮著一定的作用。

老年婦女；外陰營養(yǎng)不良；細(xì)胞凋亡；基因表達(dá)

慢性外陰營養(yǎng)不良是女性常見的一種良性病變，其惡變率高達(dá)8%，嚴(yán)重影響著婦女的身體健康。且近些年來，該病的發(fā)病年齡逐漸趨于年輕化，然而現(xiàn)階段臨床上尚未明確該病的根治方法。臨床上通常將原位末端標(biāo)記及免疫組織化學(xué)S-P法作為檢測外應(yīng)營養(yǎng)不良及惡變組織中細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)的常用方式。我院為探討老年婦女外陰營養(yǎng)不良組織中細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因的表達(dá)情況特進(jìn)行了以下研究，報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料：選取我院自2013年1月至2014年1月期間接收的80例外陰活檢患者為研究對象，以其中70例外陰營養(yǎng)不良患者為觀察1組其中增生型營養(yǎng)不良25例，硬化型營養(yǎng)不良25例，混合型營養(yǎng)不良20例；10例營養(yǎng)不良惡變患者為觀察2組，本組10例患者均惡變?yōu)轺[癌；同時(shí)選取10例正常外陰患者為對照組。本組所有標(biāo)本均采用10%福爾馬林溶液進(jìn)行固定，并行常規(guī)石蠟包埋，切片厚度應(yīng)控制為4 μm。

1.2方法

1.2.1原位末端標(biāo)記檢測法：本次研究選用由BoehringerMannheim公司生產(chǎn)的試劑盒，并嚴(yán)格以說明書為依據(jù)進(jìn)行操作，結(jié)果判定：陽性細(xì)胞：細(xì)胞核中含有棕黃色顆粒，且背景清晰。在400倍顯微鏡下，于標(biāo)記良好區(qū)域選擇10個(gè)視野計(jì)數(shù)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)。凋亡指數(shù)=陽性細(xì)胞數(shù)總和/1000×100%。

1.2.2免疫組織化學(xué)S-P法檢測bcl-2、bax蛋白：選用由Snta Cruz公司生產(chǎn)的第一抗體鼠抗人bcl-2、兔抗人Bax單克隆抗體，同時(shí)選用由北京中山技術(shù)有限公司生產(chǎn)的S-P試劑進(jìn)行檢測。工作濃度應(yīng)設(shè)置為1∶50及1∶75，嚴(yán)格按照說明術(shù)進(jìn)行操作。結(jié)果判定：陽性細(xì)胞：以細(xì)胞質(zhì)著棕黃色為陽性細(xì)胞；陽性：細(xì)胞質(zhì)著色程度＞20%；陰性：細(xì)胞質(zhì)著色程度＜20%。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SAS9.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)，并對其相關(guān)性進(jìn)行分析，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2　結(jié) 果

2.1細(xì)胞凋亡的檢測結(jié)果：對照組患者細(xì)胞凋亡指數(shù)為（23.2± 4.6）%，觀察1組患者細(xì)胞凋亡指數(shù)為（19.6±4.2）%，其中增生型營養(yǎng)不良患者的細(xì)胞凋亡指數(shù)為（18.9±5.7）%，硬化型營養(yǎng)不良患者的細(xì)胞凋亡指數(shù)為（20.5±3.1）%，混合型營養(yǎng)不良患者細(xì)胞凋亡指數(shù)為（19.9±4.4）%；觀察2組患者細(xì)胞凋亡指數(shù)為（5.1±2.2）%，三組患者均存在有細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，其觀察組及研究組患者的細(xì)胞凋亡指數(shù)均明顯高于對照組（P＜0.05），但兩組間及觀察組中三種病理類型組間比較細(xì)胞凋亡指數(shù)比較均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2bcl-2、bax檢測結(jié)果：對照組10例患者中bcl-2表達(dá)9例，占90%，bax表達(dá)10例，占100%；觀察1組70例患者中bcl-2表達(dá)65例，占92.9%，bax表達(dá)63例，占90%；其中增生型營養(yǎng)不良25例中bcl-2表達(dá)23例，占92%，bax表達(dá)23例，占92%；硬化型營養(yǎng)不良25例中bcl-2表達(dá)24例，占96%，bax表達(dá)23例，占92%；混合型營養(yǎng)不良20例中bcl-2表達(dá)17例，占85%，bax表達(dá)18例，占90%；觀察2組10例患者中bcl-2表達(dá)2例，占20%，bax表達(dá)2例，占20%；對照組患者及觀察1組患者中bcl-2、bax均有較高表達(dá)，但觀察2組患者中bcl-2、bax均顯著減弱（P＜0.05）。

2.3細(xì)胞凋亡指數(shù)、bcl-2、bax三者間的關(guān)系：觀察1組和對照組患者凋亡細(xì)胞的分布區(qū)域及表達(dá)bcl-2、bax蛋白的細(xì)胞分布區(qū)域則保持一致，且bcl-2、bax二者間的表發(fā)呈正相關(guān)（P＜0.05），在惡變部分凋亡細(xì)胞的分布區(qū)域及bcl-2、bax的表達(dá)方面則無明顯相關(guān)性。

3　討 論

細(xì)胞凋亡也叫程序化細(xì)胞死亡，其主要是指細(xì)胞核在特定條件下通過啟動自身內(nèi)部機(jī)制，同時(shí)通過一系列連續(xù)性變化所引發(fā)的主動性死亡的過程［1］。細(xì)胞凋亡不同于細(xì)胞壞死，細(xì)胞凋亡是一種主動過程，而非被動過程，細(xì)胞凋亡往往需涉及一系列的基因激活、表達(dá)及調(diào)控作用，其并非病理?xiàng)l件下的自體損傷現(xiàn)象，是為適應(yīng)環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程［2］。細(xì)胞凋亡不僅可有效的維持個(gè)體自身的穩(wěn)定性，同時(shí)在控制細(xì)胞增殖、分化及疾病的發(fā)生發(fā)展中同樣發(fā)揮著難以取代的作用［3］。本次研究結(jié)果顯示正常外陰皮膚及外應(yīng)營養(yǎng)不良患者與外陰營養(yǎng)不良惡變患者相比其細(xì)胞凋亡指數(shù)均明顯升高。這就表明外應(yīng)營養(yǎng)不良的發(fā)生發(fā)展在一定程度上受細(xì)胞凋亡的影響，因而在細(xì)胞凋亡現(xiàn)象受到抑制時(shí)便極易引起外陰營養(yǎng)不良組織惡現(xiàn)象。所以，臨床上通常將細(xì)胞凋亡指數(shù)作為判斷生物學(xué)活性的有效依據(jù)。

bcl-2及bax屬于正負(fù)凋亡調(diào)節(jié)基因，其中bcl-2可有效的對細(xì)胞凋亡現(xiàn)象進(jìn)行抑制，且可有效的延長細(xì)胞生存周期，有助于增加細(xì)胞的積累率［4］。而bax本身即可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)還可與bcl-2聯(lián)合對細(xì)胞凋亡現(xiàn)象進(jìn)行調(diào)控。臨床研究表明bcl-2與bax間存在有較大的化學(xué)劑量關(guān)系，其比值在一定程度上決定了細(xì)胞接受信號后是否存活；通常在bcl-2含量較大時(shí)可對細(xì)胞凋亡現(xiàn)象進(jìn)行抑制，而在bax含量較大時(shí)則可對細(xì)胞凋亡現(xiàn)象進(jìn)行促進(jìn)，而在兩組計(jì)量相當(dāng)時(shí)則不會抑制細(xì)胞凋亡［5］。本次研究結(jié)果顯示組患者均在細(xì)胞凋亡及bcl-2、bax的表達(dá)現(xiàn)象，且觀察1組患者的細(xì)胞凋亡指數(shù)及bcl-2、bax的表達(dá)方面均明顯高于觀察2組（P＜0.05）；bcl-2、bax二者間的表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05），在惡變部分凋亡細(xì)胞的分布區(qū)域及bcl-2、bax的表達(dá)方面則無明顯相關(guān)性。這就表明外陰營養(yǎng)不良的發(fā)生發(fā)展與惡變及細(xì)胞凋亡間有較大的關(guān)系，且bcl-2、bax發(fā)揮著一定的作用。

［1］方志啟，吳剛，王賀彬，等.凋亡相關(guān)基因p53、bcl-2、baX在前列腺組織中的相關(guān)性［J］.中國臨床解剖學(xué)雜志，2013，31（5）：560-563.

［2］周蘭英，孫圣華，高健，等.吲哚美辛對COPD大鼠TNF-α與Bcl-2和Bax表達(dá)的影響［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，12（6）：1044-1047.

［3］郭巍，陳美霓，王愛紅，等.P53、Bcl-2和Bax在膀胱癌的表達(dá)及意義［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，45（3）：180-183.

［4］余姚鳳，何愛文，李章平，等.凋亡相關(guān)性microRNA及其靶基因蛋白在心肺復(fù)蘇后大鼠心肌中的表達(dá)變化［J］.溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，43（6）：367-370.

［5］桂春，賈衛(wèi)光，林梅，等.上調(diào)HCCR-2基因表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞增殖與凋亡的影響［J］.臨床醫(yī)學(xué)工程，2012，19（12）：2117-2119.

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1671-8194（2015）012-0085-02