注射用雙黃連(凍干)總糖及總皂苷的含量測(cè)定

欒 蘭 任嘉鵬 王鋼力 林瑞超

1.北京醫(yī)藥集團(tuán)職工大學(xué)，北京 100079；2.北京諾信達(dá)醫(yī)藥企業(yè)管理有限公司，北京 100020；3.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050；4.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029

注射用雙黃連(凍干)總糖及總皂苷的含量測(cè)定

欒 蘭1任嘉鵬2王鋼力3林瑞超4

1.北京醫(yī)藥集團(tuán)職工大學(xué)，北京 100079；2.北京諾信達(dá)醫(yī)藥企業(yè)管理有限公司，北京 100020；3.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050；4.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029

目的：建立注射用雙黃連(凍干)中總糖、總皂苷的含量測(cè)定方法。方法：以葡萄糖為對(duì)照，采用硫酸-蒽酮法制備總糖的有色糠醛衍生物，利用分光光度法測(cè)定總糖的含量；以齊墩果酸為對(duì)照，香草醛-濃硫酸顯色，測(cè)定總皂苷的含量。結(jié)果：總糖含量測(cè)定方法的回收率為95.50%～101.39%；總皂苷含量測(cè)定方法的回收率在115.90%～117.79%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，進(jìn)一步完善了注射用雙黃連(凍干)的質(zhì)量控制，為提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

注射用雙黃連(凍干)；總糖；總皂苷；分光光度法

雙黃連為中藥抗菌抗病毒的著名方劑，注射用雙黃連(凍干)是由雙黃連處方(金銀花、黃芩、連翹)中藥經(jīng)提取、精制、冷凍干燥制備的供靜脈滴注的中藥粉針劑，是一種廣譜的抗病毒藥物，對(duì)呼吸道合胞病毒、流感病毒、皰疹病毒、腺病毒及麻疹病毒等均具有明顯的抑制作用。注射用雙黃連(凍干)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于2005年版《中國(guó)藥典》(一部)，內(nèi)容包括處方、制法、性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定、功能與主治、用法與用量、規(guī)格等，并在增補(bǔ)本收載了指紋圖譜檢測(cè)項(xiàng)目[1-4]。在上述研究的基礎(chǔ)上，利用分光光度法，測(cè)定注射用雙黃連(凍干)中總糖和總皂苷的含量，進(jìn)一步完善注射用雙黃連(凍干)的質(zhì)量控制，為提升其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 8453紫外-可見分光光度儀；TOLEDO型電子天平(METTLER公司)；KQ=250 DE型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；XMTD-6000水浴鍋。

1.2 材料 葡萄糖對(duì)照品、齊墩果酸對(duì)照品均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；注射用雙黃連(凍干)(北京醫(yī)藥集團(tuán))；AB-8大孔樹脂(天津興南允能高分子技術(shù)有限公司)；水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 總糖的含量測(cè)定

2.1.1 供試品溶液的制備 分別取三批注射用雙黃連(凍干)樣品，加水溶解后經(jīng)預(yù)先處理好的AB-8大孔樹脂柱(內(nèi)徑2 cm，高度30 cm)，流速為1～2 ml/min，用水700 ml洗脫，濃縮洗脫夜，加水定容至50 ml，從中精密吸取0.5 ml，加水定容至5 ml，混勻，即得。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品，加水稀釋至50 ml，制成0.118 ml/min對(duì)照品溶液，即得。

2.1.3 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml置于10 ml的具塞試管中，加水至2 ml，精密加入硫酸-蒽酮溶液(精密稱取蒽酮0.1 g，加80 %的硫酸溶液100 ml使溶解，搖勻)6 ml，搖勻，置水浴中加熱15 min，取出，放入冰浴中冷卻15 min，以相應(yīng)的試劑為空白，在625 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)(A)，濃度為橫坐標(biāo)(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=4.8928C+0.1117，r=0.9992。表明樣品在0.0236～0.1180 mg/ml范圍內(nèi)總糖含量與吸光度程的線性關(guān)系良好[5]。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 取濃度為0.118 mg/ml的葡萄糖對(duì)照品溶液，精密吸取0.4 ml，按上述方法連續(xù)測(cè)量5次，記錄吸光度，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)= 0.4 %，表明儀器的精密度良好。

2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn) 按供試品溶液制備方法制備樣品5份，測(cè)定吸光度值并計(jì)算總糖的含量，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)=1.1 %，表明本法的重復(fù)性良好。

2.1.6 加樣回收試驗(yàn) 采用加標(biāo)回收法，精密稱取已知含量(231.84 mg/g)的注射用雙黃連(凍干)樣品為基底，精密加入葡萄糖對(duì)照品，依法制備樣品，測(cè)定吸光度，結(jié)果樣品的平均回收率為97.88%，RSD為3.8%。見表1。

2.1.7 穩(wěn)定性的考察 按上述供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，分別于0、30、60、90、120、180 min測(cè)定吸光度值，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)=1.0 %，表明樣品在3h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.8 樣品的測(cè)定 按上述供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算出同一企業(yè)3批注射用雙黃連(凍干)樣品的含量，結(jié)果見表2。

2.2 總皂苷的含量測(cè)定[6-7]

2.2.1 供試品溶液的制備 精密稱取342.2 mg雙黃連注射液(凍干)，加水10 ml，溶解后用正丁醇萃取4次，合并正丁醇減壓蒸干，浸膏用甲醇溶解，過濾，定容至50 ml，精密吸取4 ml，用甲醇定容至10 ml，搖勻，即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的齊墩果酸對(duì)照品14.21 mg，置10 ml容量瓶中，加入甲醇溶解，搖勻，定容；精密吸取1 ml，用甲醇定容至10 ml，搖勻，即得。

2.2.3 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 ml對(duì)照品溶液，分別置10 ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，依次加入0.5 ml 8%香草醛乙醇溶液和5.0 ml 72 %硫酸，搖勻后置60℃恒溫水浴1 h，隨后立即取出，置冰浴中冷卻15 min，制成系列梯度溶液，以0.5ml 8 %香草醛乙醇溶液和5.0ml 72 %硫酸為空白對(duì)照，在536 nm測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)(A)，濃度為橫坐標(biāo)(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=8.42063C+0.0068，r=0.9999。表明樣品在0.0284～0.0853 mg測(cè)量范圍內(nèi)總皂苷的含量與吸光度程的線性關(guān)系良好。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 取齊墩果酸對(duì)照品溶液(濃度為0.154 mg/ml)0.35 ml，按上述方法連續(xù)測(cè)量5次，記錄吸光度值，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)=0.5 %，表明儀器的精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取注射用雙黃連(凍干)樣品，按供試品溶液制備方法制備樣品5份，測(cè)定吸光度值并計(jì)算總皂苷的含量，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)=1.0 %，表明本法的重現(xiàn)性良好。

2.2.6 加樣回收試驗(yàn) 采用加標(biāo)回收法，精密吸取已知含量總皂苷(5.22 %)的注射用雙黃連(凍干)樣品，按供試品溶液制備方法，同法制備5份，加入齊墩果酸對(duì)照品溶液(1.41 mg/ml)7.80 mg，測(cè)定吸光度并計(jì)算回收率，結(jié)果樣品的平均回收率為116.84%，RSD為1.0%。見表3。

2.2.7 穩(wěn)定性的考察 取注射用雙黃連(凍干)樣品適量，按供試品溶液制備方法制備樣品，分別于0、30、90、150、240 min測(cè)定吸光度值，計(jì)算總皂苷含量，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)=1.0 %，表明樣品在4.0 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.8 樣品的測(cè)定 按上述制備方法制備樣品測(cè)定，計(jì)算出同一企業(yè)3批樣品中總皂苷的含量，結(jié)果見表4。

3 討論

總糖樣品制備此過程中以一個(gè)柱體積為單位，洗至流出液無(wú)顏色為止，共收集7份樣品，當(dāng)收集到第5號(hào)樣品時(shí)，98.04%的總皂苷已被洗脫，故選擇洗脫劑是7倍柱體積洗脫。

取葡萄糖和齊墩果酸對(duì)照品溶液于紫外-可見分光光度儀下進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果顯示葡萄糖在625nm處有最大吸收，齊墩果酸在536nm處有最大吸收，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)分別為625nm和536nm。

實(shí)驗(yàn)對(duì)注射用雙黃連(凍干)中總糖和總皂苷的含量進(jìn)行測(cè)定，三批樣品的總糖平均含量22.07%，總皂苷的平均含量5.23%。研究為注射用雙黃連(凍干)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了參考依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：135．

[2]孫效珍，解建設(shè)，解魯豫．雙黃連的藥理與臨床應(yīng)用[J]．黑龍江醫(yī)藥，2006，19(1)：54-55．

[3]劉樹芬，張建華．雙黃連粉針劑免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J]．中國(guó)藥房，1995，6(6)：32-33．

[4]李文杰．注射用雙黃連與抗菌藥物配伍穩(wěn)定性研究概況[J]．中國(guó)藥師，2002，5(5)：301-303．

[5]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：174．

[6]梁貴娟，王文平，張義明，等．野木瓜總皂苷的含量的測(cè)定[J]．食品工業(yè)科技，2006，27(11)：192-195．

[7]木拉提·克扎依別克，哈木拉提·吾甫爾，庫(kù)吐比江·阿木提．異常黑膽質(zhì)成熟劑總糖和總皂苷含量測(cè)定[J]．科技導(dǎo)報(bào)，2009，27(9)：39-42．

Determination the Content of total sugar and total saponins in Shuanghuanglian Injection

LUAN Lan1REN Jiapeng2WANG Gangli3LIN Ruichao4

1.Staff and Workers University of Beijing Resources Pharmaceutical Group Limited, Beijing 100079, China; 2.Beijing NuoXinDa Pharmaceutical Enterprise Mananement Co.Ltd., Beijing 100020, China. 3.National institute for Food and Drug Control，Beijing 100050，China;4.Bejing university of Chinese Medicine, Beijing 100029, China

Objective To establish an determining method of total sugar and total saponins in Shuanghuanglian Injection．Methods Determination for the content of total sugar and total saponins were completed by colorimetric method. Results The recoveries of the methods were from 95.50% to 101.39% and from 115.90% to 117.79%. Conclusion The methods were accurate，easy and reproducible，the results provide valuable data for material and improving the standard control for its quality．

Shuanghuanglian Injection；total sugar；total saponins；colorimetric

欒蘭(1978-)，女，博士，遼寧大連人，主要從事中藥化學(xué)成分及質(zhì)量控制研究，E-mail:luan9896@126.com

R284.1

A

1007-8517(2015)18-0010-02

2015.06.15)