維吾爾藥材刺糖的體外抑菌效果

張 倩 孟新源 張明君 耿文寧 劉恒戈*

1.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院藥學(xué)部，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所，新疆 烏魯木齊 830004

藥物研究

維吾爾藥材刺糖的體外抑菌效果

張 倩1孟新源1張明君2耿文寧2劉恒戈1*

1.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院藥學(xué)部，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所，新疆 烏魯木齊 830004

目的：研究維吾爾藥材刺糖醇提取物的體外抑菌作用。方法：制備刺糖95%的乙醇提取物，采用試管二倍稀釋與瓊脂平板法，對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念珠菌進行體外抑菌作用的研究，測定其最低抑菌濃度與最低殺菌濃度。結(jié)果：刺糖95%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌2種菌株均有抑菌作用，而對大腸埃希菌和白色念珠菌無抑制作用。結(jié)論：刺糖醇提物對細菌有一定的抑菌作用。

刺糖；體外抑菌；液體2倍稀釋法

刺糖(Saccharum Alhagi)為豆科植物駱駝刺(AlhagipseudoalhagiDesv)枝葉分泌的糖液凝結(jié)而成的顆粒，色黃白，味甜，略具粘性，是維吾爾醫(yī)常用藥材，可治療痢疾、腹瀉、血尿等疾病[1]。在《維吾爾常用藥材》中早有記載，至今臨床仍在使用，它具有滋補強壯、益精壯陽、澀腸止痛、祛痰止咳的功效[2]。然而多年來并未見刺糖的抑菌作用的研究報道。本試驗以新疆地產(chǎn)刺糖為原材料，通過95%乙醇提取方法制備其不同濃度提取物，研究其對4種常見菌株的抑制作用，為開發(fā)利用這一野生資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和試劑

刺糖500g，購自新疆自治區(qū)維吾爾醫(yī)院，藥材經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院鑒定；95%乙醇；甲醇；水為純化水，其他試劑均為分析純。菌株和培養(yǎng)基：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、大腸埃希菌，枯草牙胞桿菌均購自新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗所。肉湯培養(yǎng)基、瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、玫瑰紅納瓊脂培養(yǎng)基等加蒸餾水經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌20min后冷卻備用。主要儀器設(shè)備：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；電熱恒溫培養(yǎng)箱；生化培養(yǎng)箱；生物安全柜。

2 方法

2.1 藥液的制備 取刺糖藥材200g，粉碎，加入3倍量95%乙醇加熱回流2h，過濾；濾渣加入2倍量95%乙醇加熱回流2h，過濾；濾渣再加人2倍量95%乙醇加熱回流1h，過濾，合并三次濾液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮成浸膏(25.00g)。加甲醇4ml溶解，再加蒸餾水稀釋至20ml，配成濃度為20%的醇提液混懸液(最大濃度)，即得刺糖醇提物，藥物濃度為1.25g/ml。

2.2 菌液的制備 將凍存于-80℃的實驗用菌株取出，活化后根據(jù)試驗的需要配制成含菌數(shù)為103～105CFU/ml的菌懸液，備用。

2.3 液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法 分別取10支滅菌試管，將刺糖提取濃縮液(1.25g/ml的刺糖醇提物和醇后水提物藥液)1ml采用試管2倍稀釋法[3]，以營養(yǎng)肉湯或改良馬丁液體培養(yǎng)基倍比稀釋后(原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128)，使營養(yǎng)肉湯或改良馬丁液體培養(yǎng)基含藥濃度分別為625mg/ml、312.5mg/ml、156.3mg/ml、78.2mg/ml、39.1mg/ml、19.6mg/ml、9.8mg/ml，分別加入含菌數(shù)為103～105CFU/ml的菌懸液(大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌)0.1ml。另在營養(yǎng)肉湯或改良馬丁液體培養(yǎng)基接種相同菌種的菌懸液作為陽性對照；以0.5ml營養(yǎng)肉湯或改良馬丁液體培養(yǎng)基與0.5ml蒸餾水或20%甲醇溶液作為稀釋劑對照，以有藥液不加試驗菌液的為空白對照。

2.4 最低抑菌濃度的測定 將上述試管用橡皮塞封口，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。因藥材提取液顏色較深并且澄明度差，影響試驗結(jié)果的觀察，肉眼不易辨明其生長情況，從各管取一環(huán)轉(zhuǎn)接于營養(yǎng)瓊脂平板或玫瑰紅鈉瓊脂平板上，觀察有無菌落生長。以無菌落生長的最低藥液濃度為該藥材的最低抑菌濃度(Minimal Inhibitory Concentration，MIC)。

2.5 最低殺菌濃度的測定[4]從每個試管中各取0.1ml培養(yǎng)液接種于營養(yǎng)瓊脂平板或玫瑰紅鈉瓊脂平板上，放人37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察各瓊脂平板上菌落生長情況，以平板上計數(shù)少于5個菌落的藥液濃度作為該藥材的最低殺菌濃度(Minimum Bactericidal Concentration，MBC)。

3 結(jié)果與討論

3.1 刺糖不同提取物對各供試菌的影響 刺糖95%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌均有抑菌作用，其中對金黃色葡萄球菌的MIC和MBC為78.2mg/ml；對枯草芽孢桿菌的MIC和MBC為78.2mg/ml；刺糖的醇提物對大腸埃希菌和白色念珠菌均無抑菌作用。結(jié)果見表1。

注：“ + ”表示有菌落生長，“ -”表示無菌落生長，“①”表示最低抑菌濃度(MIC)，“②”表示最低殺菌濃度(MBC)。

3.2 討論

刺糖可以滋補強壯、整腸止痛[5-6]?！侗静菥V目》載：“甘平無毒，清熱解毒，消腫止痛”，主治“痰嗽下血”。還可治腹脹腹痛、口舌生瘡[7-8]。雖然目前在刺糖藥理學(xué)研究方面做了許多工作并取得了一定成果[9-10]，但對其在抑菌試驗方面的報道卻很少。本試驗結(jié)果表明，刺糖95%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌均有抑菌作用；對大腸埃希菌和白色念珠菌均無抑菌作用。對刺糖的抑菌效果及MIC、MBC的測定，對于了解刺糖抗菌效果具有一定的意義，同時有利于促進該植物的合理開發(fā)。但是對其抑菌成分、抑菌機理等方面還有待于進一步研究。

[1]菅麗君,常軍民,李改茹,等.刺糖多糖的分離純化與基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)分析[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,36(4):460-463.

[2]中國科學(xué)院中國植物志編委會.中國植物志(第五十五卷第一分冊)[M].北京:科學(xué)出版社,1979:89-91.

[3]馬緒榮,蘇德模.藥品微生物學(xué)檢驗手冊[M].北京:科學(xué)出版社,2000:198.

[4]李漢浠,任賽賽,李勇,等.楓楊萘醌對常見菌的抗菌譜，最低抑菌濃度和最低殺菌濃度研究[J].時珍國醫(yī)醫(yī)藥,2012,23(6):1422-1423.

[5]劉勇民,維吾爾藥志(上冊)[M].烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社,1999:215-217.

[6]王濟憲．維醫(yī)常用藥材—阿里紅和駱駝刺[J]．特種經(jīng)濟動植物,2003,(9).

[7]溫玲,馬驥. 維藥駱駝刺種子微形態(tài)特征的研究[J]. 中醫(yī)藥學(xué)刊,2006,3(24): 536-537.

[8]茹克婭木·沙地克. 維吾爾醫(yī)常用藥材學(xué)[M].烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社,1993：284.

[9]曹雯麗，賈舒安，陳陽，等. 刺糖對小鼠腸推進和離體小腸平滑肌運動的影響[J]. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2011,34(3):193-196.

[10]米克熱木·沙衣布扎提,海如拉·馬木提,姚琛. 刺糖對慶大霉素致小鼠腎損傷保護作用的初步研究[J]. 中國畜牧獸醫(yī),2013,40(3):230-233.

In Vitro Bacteriostasis Research of Exteacts from Uygur medicine Saccharum Alhagi

ZHANG Qian1MENG Xinyuan1ZHANG Mingjun2GENG Wenning2LIU Hengge1*

1.Depatment of Pharmacy,Affillated Tumor Hospotal of Xinjiang Medical University,Urumqi 830011，China；2.Xinjiang Uygur Autonmous Region Institute For Food and Drug Control,Urumqi 830004，China

Objective To study the in vitro antimicrobial activity of Uygur Medicine Saccharum Alhagi.Method To prepare the Saccharum Alhagi 95% ethanol extract,using tube dilution and agar plate method,Staphylococcusaureus,Candidaalbicans,EscherichiacoliandBacillussubtilis in vitro antibacterial study measured the minimum inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration. Results The Saccharum Alhagi 95% ethanol extract antibacterial effects onStaphylococcusaureusandBacillussubtills,while no inhibitory effect onEscherichiacoliandCandidaalbicans.Conclusion The Saccharum Alhagi alcohol extract had inhibitory effects on bacteria.

Saccharum Alhagi；Bacteriostasis in vitro；Double dilution method

新疆醫(yī)科大學(xué)科研創(chuàng)新基金項目(XJC2013104)。

張倩(1982-)，女，碩士研究生，主管藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。

劉恒戈(1969-)，男，主任藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。

R285.5

A

1007-8517(2015)18-0005-02

2015.05.19)