葛花降糖丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

吳慶淼吳宛玲

（1 吉林省松原市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 松原 138000；2 白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠，吉林 長春 131100）

葛花降糖丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

吳慶淼1吳宛玲2

（1 吉林省松原市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 松原 138000；2 白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠，吉林 長春 131100）

目的 建立葛花降糖丸（川芎、黃連、黃芪等）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用TLC法鑒別處方中的川芎、黃連；用HPLC-ELSD法測定黃芪中黃芪甲苷的含量，色譜柱：菲羅門Luna C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-水（36∶64）；流速：1.0 mL/min；漂移管溫度：105 ℃；載氣流速：2.7 L/min。結(jié)果 TLC鑒別色譜特征斑點(diǎn)明顯，黃芪甲苷在0.493～2.465 μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，r=0.9997；平均回收率為98.7%（n=6），RSD=1.5%。結(jié)論 所建立的TLC和HPLC-ELSD方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于葛花降糖丸的質(zhì)量控制。

葛花降糖丸；TLC；HPLC-ELSD；川芎；黃連；黃芪甲苷

葛花降糖丸原標(biāo)準(zhǔn)為吉林省食品藥品監(jiān)督管理局［1］醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)，黃芪、金銀花、丹參、川芎、黃連等17味中藥組成，具有養(yǎng)陰益氣，生津止渴，活血祛瘀，降糖補(bǔ)腎的功效。用于口干，煩渴，多飲，多尿，乏力，肢體酸軟等糖尿病所致諸癥。原標(biāo)準(zhǔn)為醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)，只有一個(gè)顯微鑒別項(xiàng)［2］。為了提高該制劑的生產(chǎn)質(zhì)量，更好的進(jìn)行生產(chǎn)監(jiān)管，本文增加了TLC法對(duì)川芎、黃連定性鑒別，采用HPLC-ELSD法對(duì)制劑中黃芪甲苷的含量進(jìn)行測定，更好的對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行控制。

1　試藥與儀器

川芎對(duì)照藥材（批號(hào)：120918-201110），黃連對(duì)照藥材（批號(hào)：101512-200702），鹽酸小檗堿（批號(hào)：110713-200911）黃芪甲苷對(duì)照品（批號(hào)：110781-200613），均購自中國藥品生物制品檢定所。LC-10AT型高效液相色譜儀，ALLTECH ELSD2000型蒸發(fā)光散射檢測器。葛花降糖丸樣品由前郭爾羅斯蒙古族自治縣蒙醫(yī)院（批號(hào)：130624、130626、130628）提供。

2　薄層鑒別

2.1川芎的薄層色譜鑒別：供試品溶液的制備為取本品6丸，研細(xì)，加乙醇25 mL，置水浴上加熱回流60 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，即得。對(duì)照藥材溶液的制備為取川芎對(duì)照藥材1 g，按上述方法制成對(duì)照藥材溶液。將對(duì)照藥材溶液、三批供試品溶液、陰性對(duì)照溶液點(diǎn)于同一個(gè)硅膠G薄層板上，點(diǎn)樣量為5 μL，展開劑使用醋酸乙酯：正己烷（1∶9）的混合液，展開，在紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果在對(duì)照藥材色譜中出現(xiàn)熒光斑點(diǎn)的位置上，三批供試品溶液都顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照溶液色譜中無其他斑點(diǎn)干擾。

2.2黃連的薄層色譜鑒別：供試品溶液的制備為取本品5丸，研細(xì)，加甲醇25 mL，回流提取15 min，濾過后蒸干，殘?jiān)蛹状? mL，作為供試品溶液。對(duì)照藥材溶液的制備為取黃連對(duì)照藥材0.5 g，加甲醇50 mL，按上述方法制成對(duì)照藥材溶液。取鹽酸小檗堿對(duì)照品5 mg，置于10 mL容量瓶中，制成對(duì)照品溶液。將對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液、三批供試品溶液、陰性對(duì)照溶液點(diǎn)于同一個(gè)硅膠G薄層板上，點(diǎn)樣量為5 μL，展開劑使用甲苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）的混合液，置氨蒸氣預(yù)飽和的層析缸內(nèi)，展開，在紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果在對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜中出現(xiàn)熒光斑點(diǎn)的位置上，三批供試品溶液都顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照溶液色譜中無其他斑點(diǎn)干擾。

3　含量測定

3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱菲羅門Luna C18，流動(dòng)相：乙腈+水（36+64）；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；漂移管溫度：105 ℃；載氣流速：2.7 L/min［3］；理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

3.2對(duì)照品溶液的制備：精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成對(duì)照品溶液（每1 mL含黃芪甲苷0.1 mg）。

3.3供試品溶液的制備：取重量差異項(xiàng)下的已研細(xì)的藥粉5 g，精密稱定，置于索氏提取器中，加甲醇50 mL，放置過夜，再加適量甲醇，回流提取6 h，提取液蒸干后加水20 mL溶解，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次10 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次40 mL，棄去氨洗滌液，正丁醇層蒸干，殘?jiān)铀?0 mL溶解，放冷后通過D101型大孔吸附樹脂柱，先用水40 mL洗脫，棄去，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去，最后用70%乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并定容至5 mL量瓶中，即得。

3.4線性：取對(duì)照品溶液（0.0986 mg/mL）5、10、15、20、25 μL依次測定，結(jié)果黃芪甲苷在0.493～2.465 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=1.953X+13.6（r=0.9997）。

3.5空白：空白陰性溶液未出現(xiàn)與黃芪甲苷對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰，即空白陰性溶液無干擾。

3.6穩(wěn)定性：取本品（批號(hào)：130626），按本文方法制備，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)行測定，結(jié)果RSD為1.5%。說明供試液具有良好的穩(wěn)定性。

3.7精密度：吸供試液20 μL進(jìn)行測定，重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD為0.6%。

3.8重復(fù)性：取同批次樣品6份按上述方法制備，進(jìn)行測定，黃芪甲苷的平均含量為0.0907 mg/g，結(jié)果RSD為0.9%。

3.9回收率：稱取樣品（批號(hào)：130626，含量為 0.0907 mg/g）2.5 g，分別加入對(duì)照品0.2220 mg，按本文方法提取和測定，結(jié)果平均回收率為98.7%。RSD為1.5%。

3.10樣品測定：以本文方法測得三批樣品中黃芪甲苷含量為0.1011 mg/g（批號(hào)：130624）；0.0907 mg/g（批號(hào)：130626）；0.0935 mg/g（批號(hào)：130628）。

4　討 論

4.1增加TLC法鑒別本品中的川芎、黃連方法，操作簡單，專一性好，色譜斑點(diǎn)清晰，易于觀察。

4.2參考《中國藥典》2010年版一部黃芪含量測定方法中流動(dòng)相及比例，進(jìn)行了大量的試驗(yàn)，經(jīng)驗(yàn)證，乙腈-水（36∶64）作為流動(dòng)相分離效果更好，保留時(shí)間接近18 min，比較適中，無雜質(zhì)峰干擾，陰性也無干擾。

［1］吉林省食品藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)JLZJ-ZSy-0035-2005［S］.

［2］國家藥典委員會(huì).中國藥典2010年版一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：283.

［3］馬艷蓉，劉泓，柴國林，等.HPLC-ELSD測定黃芪中黃芪甲苷含量及相關(guān)試驗(yàn)條件選擇的探討［J］.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2003，17（6）：17-19.

R282.710.5

B

1671-8194（2015）27-0049-02