類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清標(biāo)本庫(kù)的構(gòu)建及意義

鈕敏紅　萬(wàn)曉春　閆曉霏　呂衛(wèi)東

（深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 深圳 518035）

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清標(biāo)本庫(kù)的構(gòu)建及意義

鈕敏紅萬(wàn)曉春閆曉霏呂衛(wèi)東

（深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 深圳 518035）

目的 探討類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清標(biāo)本庫(kù)的創(chuàng)建及管理方法，合理利用標(biāo)本資源，為臨床及類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的防治研究提供平臺(tái)。方法收集類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血標(biāo)本，分離血清、血漿和血細(xì)胞，按照標(biāo)本入庫(kù)編號(hào)進(jìn)行登記，-80 ℃低溫冷凍保存；同時(shí)建立血清標(biāo)本庫(kù)的信息管理系統(tǒng)，以便于標(biāo)本及臨床資料數(shù)據(jù)的收集管理、查詢(xún)及調(diào)用。結(jié)果已收集了類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者不同分期的血清共326份，血漿261份，淋巴細(xì)胞213份。并對(duì)所收集標(biāo)本的流行病學(xué)及臨床資料整理后歸檔管理。結(jié)論初步建立了具有一定數(shù)量的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清標(biāo)本庫(kù)，為今后相關(guān)的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎研究提供服務(wù)平臺(tái)。

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；血清標(biāo)本庫(kù)；構(gòu)建

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種常見(jiàn)的、以全身性炎癥及骨關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯穆宰陨砻庖咝约膊　ｋS著病情的進(jìn)展，可出現(xiàn)全身滑膜關(guān)節(jié)的病變、骨質(zhì)破壞、關(guān)節(jié)畸形甚至關(guān)節(jié)強(qiáng)直，具有較高的致殘率，患病率約為0.3%～0.4%，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，多認(rèn)為RA的發(fā)病是由遺傳和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，RA目前尚無(wú)根治的藥物，但早期診斷、早期治療可以有效延緩病情進(jìn)展，改善患者的生活質(zhì)量。RA的血清樣本是重要的臨床病例資料，建立規(guī)范化、臨床資料完整的RA血清標(biāo)本庫(kù)，不僅能最大限度的保護(hù)和合理利用標(biāo)本資源，同時(shí)還可為相關(guān)研究提供足夠的標(biāo)本，實(shí)現(xiàn)臨床資源和樣本資源的共享，縮短研究周期，促進(jìn)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎研究的進(jìn)展。

1　材料與方法

1.1主要材料：人淋巴細(xì)胞分離液（灝洋生物），DMEM培養(yǎng)基、小牛血清（GIBCO），DMSO（Amresco），-80 ℃超低溫冰箱（SANYO），液氮罐（Thermo），離心機(jī)（Eppendorf）等。

1.2血液標(biāo)本的收集：所收集的病例均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)RA診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)排除糖尿病、高血壓、慢性系統(tǒng)性疾病及其他自身免疫性疾病。血液樣本來(lái)源于晨起空腹采集的外周靜脈血，在首先滿足臨床病理檢測(cè)的前提下，收集剩余血液樣本，每份血液樣本以抗凝與不抗凝兩種形式保存。所有血液標(biāo)本處理工作應(yīng)盡快完成，通過(guò)嚴(yán)格控制標(biāo)本處理時(shí)間從而有效保證血液標(biāo)本的質(zhì)量。

1.3血清的分離與凍存：收集的抗凝血液樣本于37 ℃靜置1 h后，1500轉(zhuǎn)/分離心5 min分離血清，每份血清樣本經(jīng)分裝后置于-80 ℃冰箱中保存。

1.4血漿、淋巴細(xì)胞的分離與凍存：取收集的新鮮抗凝血，小心加入等體積的細(xì)胞分離液于液面上，1500轉(zhuǎn)/分離心15 min，此時(shí)所分離的血液樣本分為四層，其中第一層即為血漿層，第二層為淋巴細(xì)胞。收集第一層的血漿分裝后置于-80 ℃冰箱中保存。將第二層的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含PBS的離心管中，充分混勻后，1500轉(zhuǎn)/分離心15～20 min，棄上清，沉淀經(jīng)反復(fù)洗2次后即得淋巴細(xì)胞。所得淋巴細(xì)胞與凍存液混勻后，分裝至凍存管，經(jīng)程序降溫后轉(zhuǎn)移至液氮罐保存。

1.5標(biāo)本的后期管理：收集的標(biāo)本經(jīng)編號(hào)登記后，標(biāo)本數(shù)據(jù)庫(kù)實(shí)行信息化管理，以便與后期的使用和管理。

2　結(jié)　果

2.1血液標(biāo)本的采集及凍存：已收集了類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者不同分期的血清共326份，血漿261份，淋巴細(xì)胞213份。并對(duì)所收集標(biāo)本的流行病學(xué)及臨床資料整理后歸檔管理。

2.2標(biāo)本數(shù)據(jù)的收集及管理：我們按照血清標(biāo)本庫(kù)建設(shè)的各項(xiàng)工作流程、工作制度、質(zhì)控和管理要求建立了類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清標(biāo)本庫(kù)。根據(jù)標(biāo)本庫(kù)建設(shè)及管理需要，標(biāo)本庫(kù)需詳細(xì)記錄患者的基本信息、臨床診斷信息、標(biāo)本基本信息、標(biāo)本使用情況、標(biāo)本質(zhì)量控制等相關(guān)資料。標(biāo)本庫(kù)信息主要包括以下內(nèi)容：①患者的一般資料：姓名、性別、年齡、民族、職業(yè)、聯(lián)系方式、住院號(hào)等；②標(biāo)本臨床檢驗(yàn)資料：臨床診斷、病理診斷等；③病理資料：診治經(jīng)過(guò)、預(yù)后資料等；④標(biāo)本基本信息：編號(hào)、存放位置、入庫(kù)日期、標(biāo)本數(shù)量、標(biāo)本到期時(shí)間；⑤標(biāo)本使用管理：出庫(kù)編號(hào)、出庫(kù)時(shí)間、使用單位、使用人、審批單位、審批人等；⑥患者隨訪信息：定期隨訪患者的疾病發(fā)展情況信息。

3　討　論

標(biāo)本采集是臨床護(hù)士工作的一項(xiàng)重要內(nèi)容，為了保證所收集的血清標(biāo)本的質(zhì)量，避免血清標(biāo)本在收集與保存過(guò)程中因人為因素造成偏差，需要對(duì)標(biāo)本采集人員進(jìn)行相應(yīng)的技術(shù)培訓(xùn)，強(qiáng)化質(zhì)量意識(shí)，確保所收集血清樣本的質(zhì)量［1-3］。參與標(biāo)本庫(kù)建立的護(hù)士需具有豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)和高度的責(zé)任心，熟悉血清標(biāo)本庫(kù)建設(shè)的工作流程及注意事項(xiàng)，能夠嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化的血清處理步驟建庫(kù)，從而嚴(yán)格控制血標(biāo)本的質(zhì)量。

建設(shè)規(guī)范化的標(biāo)本庫(kù)，需嚴(yán)格把關(guān)所收集的患者血液標(biāo)本，要具備完善的患者基本信息、臨床診斷信息等，以保證標(biāo)本庫(kù)的信息完整性［4-6］。收集患者的標(biāo)本前務(wù)必需要經(jīng)患者或患者家屬的同意并簽署知情同意書(shū)，在首先滿足臨床病理檢測(cè)的前提下，收集剩余血液樣本。通過(guò)制定相應(yīng)的規(guī)范操作流程以保證所收集標(biāo)本的質(zhì)量，其中包括制定標(biāo)本采集流程標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)本信息記錄規(guī)范，標(biāo)本制備、保存，標(biāo)本使用等規(guī)范。保證從標(biāo)本收集開(kāi)始整個(gè)過(guò)程都能標(biāo)準(zhǔn)化操作，標(biāo)本的保存過(guò)程中還應(yīng)定期對(duì)標(biāo)本庫(kù)進(jìn)行質(zhì)量控制以保證標(biāo)本的有效性和穩(wěn)定性。標(biāo)本庫(kù)的建設(shè)需要與科研緊密結(jié)合，做到物盡其用，避免不必要的資源浪費(fèi)，規(guī)范化的工作流程也提高了工作效率。

RA是一種高致殘率的自身免疫性疾病，對(duì)其病因研究依然是近幾年研究的重點(diǎn)，目前針對(duì)RA相關(guān)細(xì)胞因子的研究雖已取得了進(jìn)展，但RA是一種多因素引發(fā)的疾病，仍需進(jìn)一步研究其發(fā)病機(jī)制以發(fā)現(xiàn)更有效的治療靶點(diǎn)。建立規(guī)范化、臨床資料完整的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清標(biāo)本庫(kù)將為RA的研究提供大量臨床標(biāo)本，并為今后開(kāi)展相關(guān)方面的研究進(jìn)行了資源儲(chǔ)備，對(duì)于促進(jìn)RA研究的發(fā)展具有重要的醫(yī)學(xué)意義。

［1］溫博，曾升平.類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究進(jìn)展［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，9（9）:1014-1019.

［2］高薇，魯靜，趙麗娟.炎性細(xì)胞因子與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2007，17（4）:450-457.

［3］董峰.腫瘤血清資源庫(kù)在腫瘤臨床研究中的應(yīng)用［J］.甘肅科技，2008，24（9）:156-158.

［4］楊宗澤，譚維維，譚珺婭，等.華西醫(yī)院肝炎病毒血液標(biāo)本庫(kù)的創(chuàng)建［J］.華西醫(yī)學(xué)，2013，28（5）:752-755.

［5］季加孚.北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院腫瘤標(biāo)本庫(kù)的建設(shè)［J］.北京大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2005，37（3）:329-330.

［6］朱杰，孫忠保.血清標(biāo)本庫(kù)信息系統(tǒng)的建設(shè)和應(yīng)用［J］.公共管理，2013，29（10）:180-181.

Establishment of Rheumatoid Arthritis Serum Specimen Bank and Its Significance

NIU Min-hong，WAN Xiao-chun，YAN Xiao-fei，LV Wei-dong
（The First Affiliated Hospital of Shenzhen University，Shenzhen 518035，China）

Objective To explore the methods to establish a rheumatoid arthritis serum specimen bank and information management system，rational use of resources specimen，which are important to establish a platform for rheumatoid arthritis research. Methods Blood samples were collected from rheumatoid arthritis patients，specimens of serum，plasma and lymphocytes were separated and stored at -80 ℃ after registration. The patient's information was entered into the database. Results326 portions of serum，261 portions of plasma and 213 portions of lymphocyte were collected，the donors' information of epidemiology，clinical records were documented. Conclusion A rheumatoid arthritis serum specimen bank have been established initially，which can provide quality samples and related clinical information for rheumatoid arthritis research.

Rheumatoid arthritis；Serum specimen bank；Establishment

R593.22

B

1671-8194（2015）22-0058-02

深圳大學(xué)科研基金資助項(xiàng)目（006023）