夾竹桃麻素預處理對急性腦梗死腦組織損傷影響的初步研究

劉艷麗 張欽遲 王延平 王璐 崔利 王劍鋒

夾竹桃麻素預處理對急性腦梗死腦組織損傷影響的初步研究

劉艷麗 張欽遲 王延平 王璐 崔利 王劍鋒

目的初步研究夾竹桃麻素預處理對急性腦梗死腦組織的損傷影響。方法45只健康雄性小鼠作為研究對象, 隨機分成正常組﹑對照組﹑研究A組﹑研究B組﹑研究C組五組, 每組9只。分別予以不同處理, 比較各組腦梗死面積百分比, 并進行免疫印跡分析。結(jié)果研究A﹑B﹑C組的腦梗死面積百分比分別為14.01%﹑19.79%﹑10.18%, 對照組的腦梗死面積百分比為19.80%, 與對照組的腦梗死面積百分比比較, 研究A﹑C組的腦梗死面積百分比下降顯著, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；免疫印跡分析中正常組小鼠大腦中動脈栓塞后, 于0.5﹑1.5 h時, gp91phox, p67phox, p47phox蛋白表達上調(diào)﹑4 h時蛋白表達下調(diào)。經(jīng)夾竹桃麻素預處理后, 僅研究C組的p67phox蛋白表達顯著下調(diào)。結(jié)論夾竹桃麻素主要是通過抗氧化應激以抑制缺血區(qū)及再灌注區(qū)氧化自由基釋放, 并穩(wěn)定血腦屏障, 從而縮小腦梗死面積, 延緩腦梗死損傷發(fā)展。

急性腦梗死；夾竹桃麻素；NADPH氧化酶；自由基損傷

急性腦梗死的腦組織損傷包括缺血所造成的神經(jīng)損傷和損傷后氧化應激產(chǎn)生過多自由基對腦組織的二次損傷［1］。本文為了初步研究夾竹桃麻素預處理對急性腦梗死腦組織損傷影響, 對本院2010年2月～2015年2月實驗動物研究中心飼養(yǎng)的45只健康雄性小鼠進行研究, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院實驗動物研究中心2010年2月～2015年2月飼養(yǎng)的45只健康雄性小鼠作為研究對象, 隨機分成正常組﹑對照組﹑研究A組﹑研究B組﹑研究C組五組,每組9只。

1.2 方法 予以45只健康的雄性小鼠線栓法誘導大腦中動脈栓塞, 24 h后建立大腦中動脈栓塞模型［2］, 將造模成功的小鼠斷頭留取腦組織標本, 做冠狀位2 mm的切片, 采用2%三苯基四氮唑?qū)吮具M行染色, 并用10%福爾馬林定型。照相后用Adobe Photoshop軟件進行掃描, 計算腦梗死面積百分比。

五組小鼠分別于造模后0.5﹑1.5﹑4 h等各時間點留取腦組織標本, 正常組﹑研究A﹑B﹑C組每3只小鼠為一小組,分別進行p47phox, p67phox和gp91phox的免疫印跡分析；對照組予以鹽水處理；研究A﹑B﹑C組分別予以10﹑20﹑50 mg/kg的夾竹桃麻素處理, 比較各組的蛋白表達變化。

1.3 觀察指標 計算小鼠的腦梗死面積百分比, 觀察各組進行免疫分析后的蛋白表達變化。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 腦梗死面積百分比比較 研究A﹑B﹑C組的腦梗死面積百分比分別為14.01%﹑19.79%﹑10.18%, 對照組的腦梗死面積百分比為19.80%, 與對照組的腦梗死面積百分比相比,研究A﹑C組的腦梗死面積百分比下降顯著, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.2 免疫印跡分析比較 正常組小鼠大腦中動脈栓塞后,于0.5﹑1.5 h時, gp91phox, p67phox, p47phox蛋白表達上調(diào)﹑4 h時蛋白表達下調(diào)。經(jīng)夾竹桃麻素預處理后, 僅研究C組的p67phox蛋白表達顯著下調(diào)。

3 討論

急性腦梗死的腦組織損傷中二次腦組織損傷是由氧化應激引起的, 而氧化應激主要是通過還原型輔酶Ⅱ(NADPH)氧化酶發(fā)揮作用。NOX是維持NADPH氧化酶活性和促進氧自由基產(chǎn)生的酶復合體。相關資料顯示［3］, NOX活性被激活后,產(chǎn)生大量的活性氧, 并造成腦缺血后的神經(jīng)元死亡, 并在缺血性腦卒中后的嚴重阻礙腦功能恢復。而氧化應激和自由基則可在腦卒中后破壞神經(jīng)元功能。

夾竹桃麻素作為非選擇性自由基清除劑可減輕腦梗死神經(jīng)功能損傷［4］, 雖然其臨床應用安全性還有待研究, 但指明了未來藥物選擇的方向。研究A﹑B﹑C組分別予以10﹑20﹑50 mg/kg夾竹桃麻素預處理后, 研究A組和C組的腦梗死面積百分比與對照組的腦梗死面積百分比相比顯著降低。說明予以50 mg/kg的夾竹桃麻素抑制腦梗死面積的作用最強。

夾竹桃麻素能夠抗氧化自由基, 其藥物動力學具有起效快﹑代謝快的優(yōu)勢, 有利于夾竹桃麻素的藥物加工和制劑［5］。夾竹桃麻素可以顯著減小腦梗死病灶面積, 并通過抗氧化自由基來減少腦細胞損傷。此外, 夾竹桃麻素還可阻止膜結(jié)合的亞基NOX2與胞漿亞基p47phox之間發(fā)生易位, 從而阻礙亞基NOX2組裝及NADPH氧化酶的活化。

綜上所述, 夾竹桃麻素主要是通過抗氧化應激以抑制缺血區(qū)及再灌注區(qū)氧化自由基釋放, 并穩(wěn)定血腦屏障, 從而縮小腦梗死面積, 延緩腦梗死損傷發(fā)展。

［1］張欽遲.夾竹桃麻素預處理對急性腦梗死腦組織損傷影響的初步研究. 大連醫(yī)科大學, 2014.

［2］張德賢,任凱,官媛, 等.夾竹桃麻素對兔心房電重構的影響.中華老年心腦血管病雜志, 2011, 13(3):208-210.

［3］田苗,劉屏,王字玲, 等.夾竹桃麻素對兔原代左心房肌細胞氧化應激損傷的保護作用.軍醫(yī)進修學院學報, 2011, 32(6): 632-634.

［4］劉巖,李泱,林琨, 等.夾竹桃麻素對過氧化氫所致兔心房肌細胞超速激活延遲整流鉀電流及瞬時外向鉀電流異常的保護作用.中國心臟起搏與心電生理雜志, 2012, 26(5):422-426.

［5］張德賢,任凱,官媛, 等.夾竹桃麻素對兔心房電重構時氧化應激損傷保護作用的研究.中華老年心腦血管病雜志, 2011, 13(10):919-921.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.23.221

2015-08-17］

116033 遼寧省大連市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)二科(劉艷麗王延平 王璐 崔利)；吉林省通化市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科(張欽遲)；大連市中心醫(yī)院(王劍鋒)

王劍鋒