HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果分析

金士萍

HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果分析

金士萍

目的分析高效液相色譜法(HPLC法)測定人血漿中氯氮平濃度的效果。方法選用Eclipse plus C18色譜柱, 具體規(guī)格為100 mm×4.6 mm, 3.5 μm；采用0.5%三乙胺溶液作為流動(dòng)性, 具體規(guī)格為冰醋酸調(diào)節(jié)pH=8.0；甲醇∶水(75∶25, V/V)。流速為1 ml/min, 檢測波長為254 nm, 柱溫定為30℃, 進(jìn)樣量為20 μl, 以乙醚為萃取液。堿化血漿后, 以Agilent固相萃取小柱將血漿中的氯氮平提取出來, 運(yùn)用HPLC法對人血漿中氯氮平濃度進(jìn)行檢測。結(jié)果具有良好的線性關(guān)系的前提條件為血漿氯氮平的濃度在0.10～2.00 mg/L。最低檢測限為5 μg/L(rsn=3)。對照品血漿的回收率高濃度為(92.1±3.1)%,低濃度為(105.8±7.6)%, 中間濃度為(96.7±8.2)%；日內(nèi)和日間RSD高濃度分別為0.5%、7.1%, 低濃度分別為7.4%、7.6%, 中間濃度分別為4.6%、5.8%。結(jié)論HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果良好,值得推廣。

高效液相色譜法；人血漿中氯氮平濃度；效果

氯氮平是第一代非典型抗精神病藥物, 鎮(zhèn)靜作用強(qiáng), 在臨床藥物應(yīng)用中具有強(qiáng)大的抗精神病效應(yīng)［1］。氯氮平雖然對精神病的治療效果顯著, 但是也存在著不可忽視的弊端, 其不良反應(yīng)主要為粒細(xì)胞缺乏癥和癲癇發(fā)作［2］, 從而使氯氮平在臨床上的應(yīng)用受到限制。如果能夠運(yùn)用儀器檢測, 得到可靠的血液中氯氮平藥物濃度的量, 給患者正確的使用適宜的藥物劑量, 相應(yīng)的就可以避免或者減少不良反應(yīng)的發(fā)生。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步, 分析儀器在臨床檢驗(yàn)中得到應(yīng)用,使用HPLC法進(jìn)行藥物濃度檢查, 操作簡單, 可以快速的完成藥物濃度的檢測, 但是在對于氯氮平藥物的檢測效果如何,是否會受到一些外界因素的影響和干擾, 影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此作者通過以下HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果分析得以求證, 對臨床精神疾病指導(dǎo)合理用藥提供可靠依據(jù), 具有重要的參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 試藥與儀器

1.1.1 試藥 購買上海九福制藥廠生產(chǎn)的批號：020417的氯氮平對照品, 純度為99.9%；購買天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的批號為20140102的甲醇, 屬于HPLC專用；分析純試劑包括乙醚、冰醋酸、三乙胺等。

1.1.2 儀器 Agilent公司生產(chǎn)的1260系列溶劑管理系統(tǒng)、二極管陣列檢測器、固相萃取裝置等；Millipore公司生產(chǎn)的Milli-Q純水過濾儀；天津市東康科技有限公司生產(chǎn)的真空負(fù)壓泵；北京醫(yī)用離心機(jī)廠生產(chǎn)的LDZ5-2低速自動(dòng)平衡離心機(jī)；上海精科實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)的XW-80A旋渦混合器；上海上平儀器有限公司生產(chǎn)的FA/JA系列電子分析天平；杭州奧立儀器有限公司生產(chǎn)的PHS系列實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)；天津市東康科技有限公司生產(chǎn)的DS系列超聲波清洗器。

1.2 色譜條件 美國Agilent公司Eclipse plus C18色譜柱,具體規(guī)格為100 mm×4.6 mm, 3.5 μm；采用0.5%三乙胺溶液作為流動(dòng)性, 具體規(guī)格為冰醋酸調(diào)節(jié)pH=8.0；甲醇∶水(75∶25, V/V)。流速為1 ml/min, 檢測波長為254 nm, 柱溫定為30℃,進(jìn)樣量為20 μl, 以乙醚為萃取液。

1.3 方法

1.3.1 配置對照品溶液 將1.30 mg氯氮平對照品精密稱取出來, 在10 ml容量瓶中用甲醇稀釋, 搖勻, 將對照品儲備液配制出來, 濃度為130 mg/L, 將母液設(shè)定為該儲備液(于4℃避光保存3個(gè)月穩(wěn)定不變備用), 并將系列濃度的對照品溶液分別配制出來［3］。

1.3.2 處理血漿樣品 在-20℃的溫度條件下在暗處將冷凍保存的正常人肝素抗凝血漿自然熔融, 混勻后將1 ml取出來, 置于10 ml磨口試管中, 用微量注射器吸取標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液5 μl以及1 mol/L NaOH(氫氧化鈉)溶液200 μl準(zhǔn)確加入其中, 然后加入乙醚4 ml, 進(jìn)行30 s的旋渦振蕩, 并進(jìn)行5 min離心,離心速率為3000 r/min, 靜止分層, 將全部上清液傾取出來置于錐形離心管中, 進(jìn)行固相萃取。將離心管置于40℃水浴在氮?dú)饬飨聦⑾疵撘捍蹈?。預(yù)先用1 ml甲醇活化OASIS固相萃取小柱, 然后用1 ml水對其進(jìn)行洗滌后備用, 用100 μl甲醇溶解離心管中的殘留物, 用微量注射器吸取出20 μl在色譜儀上進(jìn)樣(流動(dòng)相復(fù)溶和進(jìn)樣［4］)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用DAS2.0藥物代謝動(dòng)力學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 色譜行為 為了確保血樣測定可靠性, 氯氮平在本法色譜分離條件下, 以 6.5 min的保留時(shí)間分離完整, 其檢測不會受到血漿中內(nèi)源性物質(zhì)的干擾, 出峰完全。

2.2 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線 將100 μl系列濃度的對照品溶液精密量取出來置于10 ml磨口試管中, 將1ml空白血漿加入其中,使血漿中對照品的濃度分別為0.10、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 mg/L, 操作過程中嚴(yán)格依據(jù)血漿樣品處理方法進(jìn)行。以對照品氯氮平峰面積(Y)線性回歸其血漿中濃度(X), 將回歸方程得出來, 即Y=1661491.3X+118958.4, r=0.9988(n=6)。從此處可以看出, 具有良好的線性關(guān)系的前提條件為血漿氯氮平的濃度在0.10～2.00 mg/L。最低檢測限為5 μg/L(rsn=3)。

2.3 萃取回收率 在對含對照品血漿進(jìn)行處理的過程中嚴(yán)格依據(jù)血漿樣品處理方法進(jìn)行, 進(jìn)樣前將固相萃取小柱處理, 比較其和對照品直接進(jìn)樣所得峰面積, 從而對方法的萃取回收率進(jìn)行有效評價(jià), 結(jié)果高濃度為2.00 mg/L, 低濃度為0.10 mg/L, 中間濃度為0.50 mg/L, 每種濃度進(jìn)行5次重復(fù), 高濃度的萃取回收率為(93.8±4.7)%, 低濃度的萃取回收率為(97.3±4.2)%, 中間濃度的萃取回收率為(96.9±5.5)%。

2.4 加樣回收率和精密度 分別將100 μl不同濃度的對照品溶液量取出來, 向1 ml空白血漿加入, 使血漿中對照品濃度分別為0.10、0.50、2.00 mg/L, 操作過程中嚴(yán)格依據(jù)血漿樣品處理方法進(jìn)行, 日內(nèi)進(jìn)行6次測定, 隔日進(jìn)行1次測定,結(jié)果高濃度為2.00 mg/L, 低濃度為0.10 mg/L, 中間濃度為0.50 mg/L, 對照品血漿的回收率高濃度為(92.1±3.1)%, 低濃度為(105.8±7.6)%, 中間濃度為(96.7±8.2)%；日內(nèi)和日間RSD高濃度分別為0.5%、7.1%, 低濃度分別為7.4%、7.6%,中間濃度分別為4.6%、5.8%。

3 討論

從本研究結(jié)果中可以看出, HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果良好, 不僅具有較少的干擾、較高的靈敏度、較為簡單的操作、準(zhǔn)確性好、分析周期不長、方法很實(shí)用等,而且選用的試驗(yàn)試劑均為國產(chǎn)品價(jià)格低廉, 來源容易［5,6］。臨床在檢測血藥濃度過程中測定大批量樣本的要求, 能夠在其作用下得到有效滿足, 值得推廣。

［1］張文英, 郭莉萍, 沈廣虎.在線固萃取—高效液相色譜法檢測人血清中氯氮平濃度.山東醫(yī)藥, 2013, 53(19):52.

［2］楊輝, 張冰, 李榮, 等.高效液相色譜法測定人血清中氯氮平濃度.中國實(shí)用醫(yī)藥, 2010, 5(20):92.

［3］樓江, 王峰, 李煥德.陽離子色譜柱-HPLC法測定人血漿中氯氮平及去甲氯氮平濃度.藥物分析雜志, 2013(1):44-49.

［4］劉偉忠, 陳清霞, 朱軍.等.RP-HPLC法同時(shí)測定人血漿中氯氮平、喹硫平濃度.中國藥師, 2010, 13(7):930-932.

［5］馬武翔, 楊穎琳.反相高效液相色譜法測定人血漿中氯氮平濃度.中國藥房, 2003, 14(6):48.

［6］錢南萍, 馬瑩, 夏曉燕.HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度.江蘇藥學(xué)與臨床研究, 2006, 14(5):303-304.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.04.182

2014-11-26］

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