飼料中硒的測(cè)定國(guó)標(biāo)方法改進(jìn)

■袁燕平 姚亞軍 倪自利 黎 勇

(長(zhǎng)沙興嘉生物工程股份有限公司技術(shù)中心)

硒是飼料里必需添加的一種重要微量元素，參與動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸、脂肪、碳水化合物和維生素以及微量元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝，在提高動(dòng)物免疫力、生產(chǎn)性能及改善肉品質(zhì)方面也有重要的作用。目前飼料中硒的檢測(cè)基本依照國(guó)標(biāo)方法GB/T13883-2008中的氫化物原子熒光光譜法（仲裁法）進(jìn)行，興嘉生物技術(shù)中心經(jīng)過(guò)多年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)卻發(fā)現(xiàn)，此方法中的處理方式主要針對(duì)配合飼料樣品，而針對(duì)于復(fù)合多礦的檢測(cè)，還需在此基礎(chǔ)上做出諸多改進(jìn)，才能使操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確。

本文旨在將本實(shí)驗(yàn)室所總結(jié)出來(lái)的改進(jìn)經(jīng)驗(yàn)分享給同行，希望對(duì)大家有幫助。

1 實(shí)驗(yàn)方案

1.1 材料與儀器

硒原始標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg/ml，有國(guó)家證書(shū)），硝酸（優(yōu)級(jí)純），高氯酸（優(yōu)級(jí)純），鹽酸（優(yōu)級(jí)純），氫氧化鈉（優(yōu)級(jí)純），鐵氰化鉀等（優(yōu)級(jí)純），氬氣（99.9%）。

硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確移取1 ml硒原始標(biāo)準(zhǔn)溶液于100 ml，用水稀釋至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為10 μg/ml。

硒標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取5 ml硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于50 ml，用水稀釋至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為1 μg/ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。

混合酸溶液：硝酸+高氯酸=4+1。

5%鹽酸溶液：鹽酸+水=5+95。

200 g/l鐵氰化鉀：稱取20.0 g鐵氰化鉀，溶于100 ml水中，搖勻。

20 g/l硼氫化鈉溶液：稱取20.0 g硼氫化鈉，溶于氫氧化鈉中（5 g/l）中，定容至1 L。

結(jié)合相關(guān)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)企業(yè)，也可結(jié)合飛豬、攜程等旅游平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)不同產(chǎn)業(yè)資源的平臺(tái)數(shù)據(jù)信息互通，讓有趣的AR成為消費(fèi)者進(jìn)入各個(gè)商店的入口，同時(shí)也給消費(fèi)者帶來(lái)便利和愉快的體驗(yàn)[7]。

AR2140電子分析天平（感量為0.000 1 g），原子熒光分光光度計(jì)（北京吉天，AFS-8230），DL-1電爐。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理

稱取試樣0.25 g，準(zhǔn)確到0.000 2 g，置于100 ml高型燒杯中，加8 ml混合酸，蓋上表面皿于電爐上加熱，當(dāng)溶液高氯酸冒煙時(shí)，再繼續(xù)加熱至溶液不再產(chǎn)生棕色氣體。冷卻，再加2.5 ml鹽酸，用水吹洗表面皿和杯壁，繼續(xù)加熱微沸約5 min即可，冷卻，移入50 ml容量瓶，用水稀釋至刻度，搖勻，作為試樣消化液。根據(jù)實(shí)際情況將此試樣消化液稀釋至含硒0.02～0.05 μg/ml，并且需加入5%鹽酸（體積比）和4%（體積比）200 g/l鐵氰化鉀溶液。

1.2.2 儀器參考條件

光電倍增管負(fù)高壓：260 V，硒空心陰極燈電流：60 mA，原子化溫度：800℃，爐高：8 mm，載氣流速：300 ml/min，屏蔽氣流速：800 ml/min；載液：5%鹽酸溶液；測(cè)量方式：標(biāo)準(zhǔn)曲線法；讀數(shù)方式：峰面積；延遲時(shí)間：1 s；讀數(shù)時(shí)間：15 s；加液時(shí)間：8 s；進(jìn)樣體積：2 ml。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別準(zhǔn)確移取0.0、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00 ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2于50 ml容量瓶中，加入10 ml水，加入2.5 ml鹽酸，加2 ml鐵氰化鉀溶液，用水稀釋至刻度，搖勻。

1.2.4 改進(jìn)方法與國(guó)標(biāo)法對(duì)比（見(jiàn)表1）

表1 改進(jìn)方法與國(guó)標(biāo)法對(duì)比

1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

在硒標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與熒光值之間繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，結(jié)果顯示，在硒濃度為0～0.060 μg/ml范圍內(nèi)，硒的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與其熒光值之間存在良好的線性關(guān)系，所得結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系

1.3.2 精密度

按照1.2節(jié)中所述方法對(duì)3個(gè)不同多礦樣品分別進(jìn)行3次平行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表3。結(jié)果表明該方法能將多礦中硒檢測(cè)出來(lái)，且平行樣極差相對(duì)值和變異系數(shù)均在5%以下，說(shuō)明用此方法檢測(cè)多礦樣品中的硒，平行性和精密度較好。

表3 精密度實(shí)驗(yàn)

1.3.3 重復(fù)性

按照1.2中所述方法，兩個(gè)月內(nèi)不同時(shí)間對(duì)這3個(gè)多礦分別進(jìn)行3次檢測(cè)，結(jié)果列于表4。兩個(gè)月內(nèi)測(cè)得結(jié)果的極差相對(duì)值最高只有4.98%，變異系數(shù)在3%以下，說(shuō)明用此方法檢測(cè)多礦樣品中的硒，穩(wěn)定性良好。

表4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

1.3.4 回收率

在多礦樣品中加入硒標(biāo)液，按照1.2節(jié)中所述方法，進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果列于表5。由表5可看出，最小回收率為95.11%，最大回收率為104.40%，說(shuō)明該方法可靠，準(zhǔn)確性高，可以滿足檢測(cè)要求。

表5 回收率實(shí)驗(yàn)

1.3.5 與2，3-二氨基奈熒光法對(duì)比

實(shí)驗(yàn)小組亦將本實(shí)驗(yàn)中的3個(gè)樣送到某外檢機(jī)構(gòu)，其采用2，3-二氨基奈熒光法進(jìn)行了檢測(cè)，所得結(jié)果列于表6。由數(shù)據(jù)可知，2，3-二氨基奈熒光法所得結(jié)果重復(fù)性相當(dāng)差，方法不穩(wěn)定，所得結(jié)果不可靠?；诖朔N情況，建議采用氫化物原子熒光光譜法檢測(cè)飼料中的硒（即國(guó)標(biāo)中的仲裁法），如果針對(duì)符合多礦，則可以采用本文中的條件進(jìn)行檢測(cè)。

表6 2，3-二氨基奈熒光法重復(fù)性

2 結(jié)論

①對(duì)國(guó)標(biāo)中氫化物原子熒光光譜法的各個(gè)條件進(jìn)行優(yōu)化后，此方法更加適合復(fù)合多礦的檢測(cè)，不僅可得到良好的精密度和準(zhǔn)確度，結(jié)果穩(wěn)定可靠，操作也更加方便簡(jiǎn)單。

② 2，3-二氨基奈熒光法重復(fù)性很差，操作得不好，很容易導(dǎo)致較大誤差，所以不推薦采用。

③建議飼料同行在檢測(cè)復(fù)合多礦原料時(shí)，采用此方法。