• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    Rho/ROCK信號(hào)通路與間質(zhì)纖維化關(guān)系的研究進(jìn)展

    2015-01-22 12:10:58張蓓蓓
    關(guān)鍵詞:肌動(dòng)蛋白纖維細(xì)胞活化

    張蓓蓓,蔡 輝

    Rho/ROCK信號(hào)通路與間質(zhì)纖維化關(guān)系的研究進(jìn)展

    張蓓蓓,蔡 輝

    間質(zhì)纖維化是由細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)過度沉積引起的病理改變,是肝硬化、特發(fā)性肺纖維化、高血壓、慢性腎炎、系統(tǒng)性硬化癥等多種疾病致死的主要原因。纖維化組織的重要特征是肌成纖維細(xì)胞(MFB)的出現(xiàn)。Rho/ROCK信號(hào)通路介導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白骨架重組在MFB表型分化、收縮、遷移等行為中具有重要意義。阻斷Rho/ROCK信號(hào)通路是治療纖維化相關(guān)疾病的重要目標(biāo)。本文綜述了Rho/ROCK信號(hào)通路對(duì)MFB肌動(dòng)蛋白骨架的調(diào)節(jié),闡述了其在纖維化發(fā)生、發(fā)展中的作用。

    間質(zhì)纖維化;Rho;Rho激酶;肌成纖維細(xì)胞;肌動(dòng)蛋白骨架

    肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast,MFB)是參與損傷修復(fù)和纖維化的主要細(xì)胞。Rho/Rho激酶(Rho-associated kinase,ROCK)信號(hào)通路介導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白骨架重組與MFB表型分化、收縮、遷移等行為關(guān)系密切。本文將對(duì)此進(jìn)行綜述,以期為治療纖維化相關(guān)疾病提供新的思路。

    1 Rho/ROCK信號(hào)通路

    Rho/ROCK信號(hào)通路廣泛參與生物體內(nèi)細(xì)胞增殖、遷移、凋亡、基因表達(dá)等行為。

    Rho包括RhoA、RhoB和RhoC三種異構(gòu)體。Rho分子內(nèi)GTP/ GDP結(jié)合域可以催化GTP水解,使Rho在活性型(GTP結(jié)合型)和失活型(GDP結(jié)合型)構(gòu)象之間循環(huán)。Rho羧基端的共同結(jié)構(gòu)域是翻譯后修復(fù)的位點(diǎn),其中包括異戊烯基轉(zhuǎn)移酶底物半胱氨酸殘基,只有經(jīng)過修飾的Rho才具有活性。Rho上游信號(hào)因子包括:Eph受體(ephrin receptor)、髓鞘相關(guān)抑制分子(myelin-associated inhibitors)、溶血磷脂酸 (lysophosphatidic acid,LPA)、1-磷酸鞘氨醇(sphingosine -1- phosphate,S1P)、凝血酶(thrombin)[1]、血栓素A2(thromboxane A2)及其他細(xì)胞因子受體等。Rho下游信號(hào)因子包括ROCK、p140mDia、蛋白激酶N(protein kinase N,PKN)、Rho結(jié)合蛋白(Rhophilin)和 Rho靶蛋白(Rhotekin)等[2]。

    ROCK是最早發(fā)現(xiàn)的Rho蛋白效應(yīng)分子,屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶,包括高度同源的ROCK1和ROCK2兩個(gè)亞型。ROCK由N端的激酶結(jié)構(gòu)域、中間包含Rho結(jié)合區(qū)域(RBD)的螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)及C末端富含半胱氨酸的PH結(jié)構(gòu)域(CRD)構(gòu)成。ROCK的底物包括肌球蛋白磷酸酶靶亞基1(myosin phosphatase-targeting subunit-1,MYPT1)、肌球蛋白輕鏈磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP)、LIM激酶(LIMK)、絲切蛋白(cofilin)、內(nèi)收蛋白(adducin)、ERM家族成員埃茲蛋白(ezrin)/根蛋白(radixin)/膜突蛋白(moesin)及中等纖維(intermediate filaments)成分波形蛋白(vimentin)/結(jié)蛋白(desmin)等。MYPT1/肌球蛋白輕鏈(myosin light chain,MLC)[3]和LIMK/絲切蛋白是研究較為清楚的ROCK下游信號(hào)通路,與細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白骨架重組關(guān)系密切。

    C3轉(zhuǎn)移酶(C3 transferase) 因具有二磷酸腺苷(ADP)核糖基轉(zhuǎn)移酶活性,可以催化Rho功能區(qū)域的ADP核糖基化,使Rho失活,阻斷依賴Rho的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。羥甲基戊二酰輔酶A(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A,HMG-CoA)還原酶是Rho羧基端半胱氨酸殘基異戊烯化修飾的關(guān)鍵酶,他汀類藥物可以抑制此酶的活性,進(jìn)一步抑制ROCK。Y-27632和法舒地爾是非選擇性ROCK抑制劑,作用于三磷酸腺苷(ATP)結(jié)合區(qū)域,已廣泛應(yīng)用于研究。另外,還有一些ROCK抑制劑已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段,包括Y39983/RKI983、SAR407899、AR12286、K115、INS117548、DE104、BA210和AMA0076等[4]。

    2 MFB與纖維化

    MFB兼有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的特征,是參與損傷修復(fù)和纖維化的主要細(xì)胞。在超微結(jié)構(gòu)上,包含α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的應(yīng)力纖維和超成熟黏著斑/纖維連接復(fù)合體是MFB最重要的特征。應(yīng)力纖維是胞漿內(nèi)纖維狀肌動(dòng)蛋白(F-肌動(dòng)蛋白)和肌球蛋白組成的軸向束,是MFB主要的收縮結(jié)構(gòu)。其中,F(xiàn)-肌動(dòng)蛋白是由單體肌動(dòng)蛋白即球狀肌球蛋白(G-肌動(dòng)蛋白)聚合而成。黏著斑為MFB特有的結(jié)構(gòu),主要由紐蛋白(vinculin)、張力蛋白(tensin)、樁蛋白(paxillin)、ED-A纖維連接蛋白(ED-A fibronectin)等黏著斑相關(guān)蛋白和整合素α、β亞基構(gòu)成,參與MFB的力/化學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)。細(xì)胞內(nèi)的微絲(肌動(dòng)蛋白纖維)通過黏著斑和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)中相關(guān)分子(如纖維連接蛋白)結(jié)合,將細(xì)胞錨定于基質(zhì)中,并感應(yīng)細(xì)胞外信號(hào)。MFB具有發(fā)達(dá)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體,合成膠原的效率較成纖維細(xì)胞顯著增加,還能自分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6)、單核細(xì)胞趨化因子-1(monocyte chemoattractant protein -1)、各種基質(zhì)金屬蛋白酶等。

    機(jī)體受到炎癥、氧化應(yīng)激和缺血缺氧等刺激引起組織實(shí)質(zhì)細(xì)胞壞死和ECM結(jié)構(gòu)破壞時(shí),多種來源的成纖維細(xì)胞活化,發(fā)生肌動(dòng)蛋白骨架重組分化為MFB,加快組織修復(fù)?,F(xiàn)在普遍認(rèn)為,組織中固有成纖維細(xì)胞(resident fibroblasts)及臨近周細(xì)胞(pericytes)、循環(huán)中骨髓來源的纖維細(xì)胞(fibrocytes)、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞都可以分化為MFB[5]。多種細(xì)胞因子、生長因子和ECM成分可以改變肌動(dòng)蛋白骨架,調(diào)節(jié)MFB分化,例如,TGF-β1、血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor)、黏著斑激酶(focal adhesion kinase)能促進(jìn)MFB分化,堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor)、Smad7蛋白、脂質(zhì)過氧化體增殖物激活受體-γ(peroxisome proliferator-activated receptor -γ)[6]則能抑制MFB分化。研究顯示,MyoD[7]和前列腺素E2(prostaglandin E2)[8]誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞向MFB分化可以被逆轉(zhuǎn),說明MFB并非終末分化細(xì)胞。但MFB是通過凋亡,而不是去分化,消失于瘢痕組織中的[9]。

    MFB凋亡是終止修復(fù)反應(yīng)及恢復(fù)組織結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)鍵。皮膚的MFB在肉芽組織向成熟瘢痕進(jìn)展過程中全部凋亡,可不遺留瘢痕,但梗死后的心臟瘢痕中MFB可持續(xù)存在,有的長達(dá)20年。MFB耐受凋亡是發(fā)生纖維化的重要原因。以MFB為靶目標(biāo)的抗纖維化治療包括:阻礙MFB形成和分化;促進(jìn)MFB去分化;誘導(dǎo)MFB凋亡。

    3 Rho/ROCK信號(hào)通路對(duì) MFB的調(diào)節(jié)

    成纖維細(xì)胞受到炎癥、損傷等刺激后,ROCK接受Rho傳遞的活化信號(hào)后,發(fā)生絲氨酸/蘇氨酸磷酸化而激活?;罨腞OCK進(jìn)一步磷酸化MLCP上的MLC結(jié)合亞單位,從而使MLCP活性下降,阻礙MLC脫磷酸化,提高成纖維細(xì)胞內(nèi)MLC的磷酸化水平,增加肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白的交聯(lián),促使肌動(dòng)蛋白聚合、重組。肌動(dòng)蛋白骨架重組不僅是MFB分化的重要步驟,也是MFB收縮的重要?jiǎng)恿?。在損傷修復(fù)的早期,MFB收縮可阻止傷口擴(kuò)大,后期則引起瘢痕攣縮。

    抑制RhoA/ROCK信號(hào)通路是治療纖維化相關(guān)疾病的有效方法[10]。Manickam等[11]研究發(fā)現(xiàn),干擾RhoA表達(dá)和抑制ROCK可以顯著降低TGF-β1誘導(dǎo)的腎MFB內(nèi)Nox4蛋白、α-SMA的表達(dá)和NADPH氧化酶的活性,改善腎纖維化。Lee等[12]報(bào)道,雌二醇通過抑制RhoA/ROCK/絲切蛋白信號(hào)通路,改善卵巢切除大鼠心肌梗死后纖維化,但合用Y-27632并不能增加治療效果。Porter等[13]發(fā)現(xiàn),辛伐他汀能抑制RhoA和ROCK的活性,阻止培養(yǎng)的人心房肌成纖維細(xì)胞增殖,改善心室重構(gòu)。Gu等[14]報(bào)道,ROCK抑制劑能阻止心臟瓣膜間質(zhì)成纖維細(xì)胞(valvular interstitial cells, VICs)突起(node)形成和α-SMA表達(dá),可能具有改善心臟瓣膜鈣化的作用。Huang等[15]報(bào)道,F(xiàn)-肌動(dòng)蛋白解聚劑松弛素可使RhoA/ROCK信號(hào)通路失活,肌球蛋白輕鏈磷酸化(MFB收縮性的標(biāo)志)水平下降,對(duì)肺纖維化有治療作用。

    3.1 Rho/ROCK上游信號(hào) 以LPA和S1P為例。LPA和S1P同屬溶血磷脂類分子,均能與細(xì)胞膜上的相應(yīng)G蛋白耦聯(lián)受體結(jié)合,激活包括Rho在內(nèi)的下游信號(hào)分子,引起細(xì)胞基因表達(dá)、收縮、遷移等行為。

    Tangkijvanich等[16]發(fā)現(xiàn)LPA誘導(dǎo)的肝MFB遷移具有劑量依賴性和飽和性,可以部分被Y-27632和SB-202190(一種p38MAPK抑制劑)所阻斷,故溶血磷脂酸刺激的肝MFB遷移與Rho和p38MAPK有關(guān)。Parizi等[17]認(rèn)為鈣離子介導(dǎo)的MLCK活化,是LPA誘導(dǎo)的MFB收縮的必要條件,而非充分條件,單獨(dú)的細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高不足以使MFB收縮。而MLCK抑制劑(KT5926和ML-7)、C3-轉(zhuǎn)移酶、Y-27632可以抑制MFB收縮,說明LPA誘導(dǎo)的MFB收縮主要依賴于Rho/ROCK信號(hào)通路。Haak等[18]用LPA誘導(dǎo)的皮膚成纖維細(xì)胞作對(duì)照研究時(shí)發(fā)現(xiàn),LPA活化Rho,能促進(jìn)結(jié)締組織生長因子、Ⅰ型膠原和α-SMA的表達(dá)。Gellings 等[19]報(bào)道S1P和鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase,SPHK1,S1P產(chǎn)生的關(guān)鍵酶)依賴S1P2受體和ROCK,以自分泌或旁分泌的方式,提高TGF-β誘導(dǎo)的心臟成纖維細(xì)胞α-SMA的表達(dá)和膠原合成,參與心肌纖維化。Kono等[20]發(fā)現(xiàn),SPHK1刺激TGF-β1誘導(dǎo)的人和小鼠肺成纖維細(xì)胞向MFB分化也與ROCK有關(guān)。

    3.2 Rho/ROCK下游信號(hào) 以心肌素相關(guān)性轉(zhuǎn)錄因子(myocardin related transcription factors,MRTFs)/血清反應(yīng)因子(serum response factor,SRF)為例。MRTFs家族包括MRTF-A/MAL/ MKL1/BSAC 和MRTF-B/MKL2。MRTFs N端的RPEL區(qū)域與G-肌動(dòng)蛋白的結(jié)合/解離狀態(tài)決定MRTF的活性。靜息狀態(tài)下,G-肌動(dòng)蛋白與內(nèi)輸?shù)鞍爪?β競爭性結(jié)合RPEL,阻止胞質(zhì)MRTF的核轉(zhuǎn)位。Rho活化后,細(xì)胞內(nèi)G-肌動(dòng)蛋白聚合成F-肌動(dòng)蛋白,釋放RPEL區(qū)域,MRTFs進(jìn)入細(xì)胞核,當(dāng)RPEL上的G-肌動(dòng)蛋白全部被移除時(shí),轉(zhuǎn)錄因子SRF被激活[18]。SRF在基因水平上調(diào)節(jié)α-SMA表達(dá)[18,21]。

    Zhao等[22]建立了一個(gè)能提供穩(wěn)定拉力的體外實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),用于觀察組織預(yù)應(yīng)力對(duì)成纖維細(xì)胞表達(dá)α-SMA的作用。在肌動(dòng)蛋白微絲完整的前提下,施加最大壓力10 min可誘導(dǎo)RhoA 活化,施壓10 min~20 min后發(fā)生肌動(dòng)蛋白微絲聚合。而轉(zhuǎn)染MRTF-A負(fù)性調(diào)節(jié)因子、抑制ROCK或者促使肌動(dòng)蛋白解聚可以完全阻斷應(yīng)力對(duì)α-SMA的表達(dá)。并認(rèn)為應(yīng)力介導(dǎo)的MFB分化與Rho/ ROCK/ LIMK/絲切蛋白途徑有關(guān)。

    Huang等[23]發(fā)現(xiàn)基質(zhì)僵硬也可以活化RhoA/ROCK,誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白骨架重構(gòu)、MKL1核轉(zhuǎn)位和MFB分化。纖維化組織中,MFB持續(xù)分泌ECM引起的ECM硬度增加是促使纖維化持續(xù)進(jìn)展的重要因素。

    Sandbo等[24]用TGF-β誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向MFB分化時(shí)發(fā)現(xiàn),肌動(dòng)蛋白聚合劑jasplakinolide能促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞MRTFs的核轉(zhuǎn)位、SRF活化、應(yīng)力纖維形成和α-SMA表達(dá),而促肌動(dòng)蛋白解聚劑Latrunculin B和Y-27632可以抑制以上過程。故推測(cè),TGF-β誘導(dǎo)肺MFB分化包括3個(gè)步驟:①Smad依賴的中間信號(hào)分子介導(dǎo)Rho活化和應(yīng)力纖維形成。②肌動(dòng)蛋白聚合引起MKL1核轉(zhuǎn)位和SRF活化。③SRF協(xié)助MKL1表達(dá),促進(jìn)MFB分化。

    Zhou等[25]在肺纖維化模型大鼠和特發(fā)性肺纖維化患者中均觀察到Rho/ROCK信號(hào)通路的活化,肌動(dòng)蛋白骨架的聚合和MKL1的核轉(zhuǎn)位。法舒地爾能下調(diào)BCL-2表達(dá),激活線粒體凋亡途徑,誘導(dǎo)MFB凋亡。在肺炎癥損傷后纖維化階段給予法舒地爾或者切除MKL1基因可以預(yù)防實(shí)驗(yàn)大鼠肺纖維化的發(fā)生。

    4 小 結(jié)

    肺、心臟、肝、腎等器官慢性損傷通過激活Rho/ROCK信號(hào)通路及下游信號(hào)分子,誘導(dǎo)MFB分化、增殖、收縮、遷移等行為,參與損傷修復(fù),若MFB耐受凋亡并持續(xù)處于激活狀態(tài)則發(fā)生纖維化,晚期可引起器官功能衰竭。目前尚無切實(shí)有效的抗纖維化藥物。Rho/ROCK信號(hào)通路抑制劑對(duì)纖維化疾病顯示了良好的治療效果,有必要進(jìn)一步研究。

    [1] Ruiz-Loredo AY,Lopez E,Lopez-Colome AM.Thrombin promotes actin stress fiber formation in RPE through Rho/ROCK-mediated MLC phosphorylation[J].J Cell Physiol,2011,226(2):414-423.

    [2] Shimokawa H,Takeshita A.Rho-kinase is an important therapeutic target in cardiovascular medicine[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2005,25(9):1767-1775.

    [3] Aburima A,Wraith KS,Raslan Z,et al.cAMP signaling regulates platelet myosin light chain (MLC) phosphorylation and shape change through targeting the RhoA-Rho kinase-MLC phosphatase signaling pathway[J].Blood,2013,122(20):3533-3545.

    [4] Pan PC,Shen MY,Yu HD,et al.Advances in the development of Rho-associated protein kinase (ROCK) inhibitors[J].Drug Discovery Today,2013,18(23/24):1323-1333.

    [5] Hu B,Phan SH.Myofibroblasts[J].Curr Opin Rheumatol,2013,25(1):71-77.

    [6] Kulkarni AA,Thatcher TH,Olsen KC,et al.PPAR-gamma ligands repress TGFbeta-induced myofibroblast differentiation by targeting the PI3K/Akt pathway:implications for therapy of fibrosis[J].PLoS One,2011,6(1):e15909.

    [7] Hecker L,Jagirdar R,Jin T,et al.Reversible differentiation of myofibroblasts by MyoD[J].Exp Cell Res,2011,317(13):1914-1921.

    [8] Kach J,Sandbo N,La J,et al.Antifibrotic effects of noscapine through activation of prostaglandin E2 receptors and protein kinase A[J].J Biol Chem,2014,289(11):7505-7513.

    [9] Ishiguro S,Akasaka Y,Kiguchi H,et al.Basic fibroblast growth factor induces down-regulation of alpha-smooth muscle actin and reduction of myofibroblast areas in open skin wounds[J].Wound Repair Regen,2009,17(4):617-662.

    [10] Tsou PS,Haak AJ,Khanna D,et al.Cellular mechanisms of tissue fibrosis 8 Current and future drug targets in fibrosis:focus on Rho GTPase-regulated gene transcription[J].Am J Physiol Cell Physiol,2014,307(1):C2-13.

    [11] Manickam N,Patel M,Griendling KK,et al.RhoA/Rho kinase mediates TGF-beta1-induced kidney myofibroblast activation through Poldip2/Nox4-derived reactive oxygen species[J].Am J Physiol Renal Physiol,2014,307(2):F159-171.

    [12] Lee TM,Lin SZ,Chang NC.Membrane ERalpha attenuates myocardial fibrosis via RhoA/ROCK-mediated actin remodeling in ovariectomized female infarcted rats[J].J Mol Med(Berl),2014,92(1):43-51.

    [13] Porter KE,Turner NA,O’Regan DJ,et al.Simvastatin reduces human atrial myofibroblast proliferation independently of cholesterol lowering via inhibition of RhoA[J].Cardiovasc Res,2004,61(4):745-755.

    [14] Gu X,Masters KS.Role of the Rho pathway in regulating valvular interstitial cell phenotype and nodule formation[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol,2011,300(2):H448-458.

    [15] Huang X,Gai Y,Yang N,et al.Relaxin regulates myofibroblast contractility and protects against lung fibrosis[J].Am J Pathol,2011,179(6):2751-2765.

    [16] Tangkijvanich P,Melton AC,Santiskulvong C,et al.Rho and p38 MAP kinase signaling pathways mediate LPA-stimulated hepatic myofibroblast migration[J].J Biomed Sci,2003,10(3):352-358.

    [17] Parizi M,Howard EW,Tomasek JJ.Regulation of LPA-promoted myofibroblast contraction:role of Rho,myosin light chain kinase,and myosin light chain phosphatase[J].Exp Cell Res,2000,254(2):210-220.

    [18] Haak AJ,Tsou PS,Amin MA,et al.Targeting the myofibroblast genetic switch:inhibitors of myocardin-related transcription factor/serum response factor-regulated gene transcription prevent fibrosis in a murine model of skin injury[J].J Pharmacol Exp Ther,2014,349(3):480-486.

    [19] Gellings Lowe N,Swaney JS,Moreno KM,et al.Sphingosine-1-phosphate and sphingosine kinase are critical for transforming growth factor-beta- stimulated collagen production by cardiac fibroblasts[J].Cardiovasc Res,2009,82(2) :303-312.

    [20] Kono Y,Nishiuma T,Nishimura Y,et al.Sphingosine kinase 1 regulates differentiation of human and mouse lung fibroblasts mediated by TGF-beta1[J].Am J Respir Cell Mol Biol,2007,37(4):395-404.

    [21] Vartiainen MK,Guettler S,Larijani B,et al.Nuclear actin regulates dynamic subcellular localization and activity of the SRF cofactor MAL[J].Science,2007,316(5832):1749-1752.

    [22] Zhao XH,Laschinger C,Arora P,et al.Force activates smooth muscle alpha-actin promoter activity through the Rho signaling pathway[J].J Cell Sci,2007,120(10):1801-1809.

    [23] Huang X,Yang N,F(xiàn)iore VF,et al.Matrix stiffness-induced myofibroblast differentiation is mediated by intrinsic mechanotrans- duction[J].Am J Respir Cell Mol Biol,2012,47(3):340-348.

    [24] Sandbo N,Lau A,Kach J,et al.Delayed stress fiber formation mediates pulmonary myofibroblast differentiation in response to TGF-beta[J].Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol,2011,301(5):L656-666.

    [25] Zhou Y,Huang X,Hecker L,et al.Inhibition of mechanosensitive signaling in myofibroblasts ameliorates experimental pulmonary fibrosis[J].J Clin Invest,2013,123(3):1096-1108.

    (本文編輯 郭懷印)

    南京軍區(qū)南京總醫(yī)院(南京210002)

    蔡輝,E-mail:njzy_caihui@163.com

    R363

    A

    10.3969/j.issn.1672-1349.2015.16.010

    1672-1349(2015)16-1844-04

    2015-08-18)

    猜你喜歡
    肌動(dòng)蛋白纖維細(xì)胞活化
    無Sn-Pd活化法制備PANI/Cu導(dǎo)電織物
    Tiger17促進(jìn)口腔黏膜成纖維細(xì)胞的增殖和遷移
    滇南小耳豬膽道成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定
    小學(xué)生活化寫作教學(xué)思考
    肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能的研究進(jìn)展
    胃癌組織中成纖維細(xì)胞生長因子19和成纖維細(xì)胞生長因子受體4的表達(dá)及臨床意義
    肌動(dòng)蛋白清除系統(tǒng)與凝血—纖溶系統(tǒng)在子癇前期患者外周血中的變化
    兩種制備大鼠胚胎成纖維細(xì)胞的方法比較
    基于B-H鍵的活化對(duì)含B-C、B-Cl、B-P鍵的碳硼烷硼端衍生物的合成與表征
    主動(dòng)免疫肌動(dòng)蛋白樣蛋白7a蛋白引起小鼠睪丸曲細(xì)精管的損傷
    女性被躁到高潮视频| 内地一区二区视频在线| 亚洲成人一二三区av| 99久久人妻综合| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 麻豆乱淫一区二区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| av不卡在线播放| 色哟哟·www| 高清av免费在线| 一级片'在线观看视频| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美另类一区| 国产免费视频播放在线视频| 久久精品国产综合久久久 | 久久久久久人妻| 精品人妻一区二区三区麻豆| 男女无遮挡免费网站观看| 久久久精品免费免费高清| 国产伦理片在线播放av一区| 国产在线视频一区二区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 黄片无遮挡物在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日韩一本色道免费dvd| av片东京热男人的天堂| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产精品一区二区在线不卡| 国产男人的电影天堂91| 久久久精品94久久精品| 亚洲情色 制服丝袜| 日日爽夜夜爽网站| 美国免费a级毛片| 最近手机中文字幕大全| www日本在线高清视频| 亚洲四区av| 欧美xxxx性猛交bbbb| 婷婷色av中文字幕| 亚洲国产精品国产精品| 久久婷婷青草| 捣出白浆h1v1| 赤兔流量卡办理| 精品午夜福利在线看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产精品人妻久久久久久| 九草在线视频观看| 在线天堂最新版资源| 亚洲经典国产精华液单| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产永久视频网站| 波多野结衣一区麻豆| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲国产av新网站| 看十八女毛片水多多多| 韩国av在线不卡| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 麻豆乱淫一区二区| 乱人伦中国视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 人妻少妇偷人精品九色| 久久99热6这里只有精品| 自线自在国产av| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久久欧美国产精品| 免费在线观看完整版高清| 大香蕉久久网| 成人黄色视频免费在线看| 精品少妇久久久久久888优播| 另类精品久久| 亚洲成色77777| 人人妻人人澡人人看| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品久久久久久久久免| 国产精品.久久久| 最新中文字幕久久久久| 一本久久精品| 天天影视国产精品| 天天操日日干夜夜撸| 少妇的逼好多水| 下体分泌物呈黄色| 91精品三级在线观看| 一区在线观看完整版| 精品少妇久久久久久888优播| 丝袜在线中文字幕| 国产免费现黄频在线看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产视频首页在线观看| 青春草国产在线视频| 久久av网站| 只有这里有精品99| 99久久综合免费| 国产乱人偷精品视频| 大陆偷拍与自拍| 亚洲av.av天堂| 人妻人人澡人人爽人人| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 人妻人人澡人人爽人人| 欧美变态另类bdsm刘玥| 两性夫妻黄色片 | 18禁国产床啪视频网站| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 热re99久久国产66热| 高清在线视频一区二区三区| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 久久精品人人爽人人爽视色| 日韩人妻精品一区2区三区| 日韩中字成人| 色吧在线观看| xxx大片免费视频| 国产精品女同一区二区软件| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲成人一二三区av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 女性生殖器流出的白浆| 丝袜人妻中文字幕| 十分钟在线观看高清视频www| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产在视频线精品| 亚洲成人一二三区av| 精品视频人人做人人爽| 久久女婷五月综合色啪小说| 两性夫妻黄色片 | 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美97在线视频| 亚洲精品自拍成人| 9191精品国产免费久久| 两个人免费观看高清视频| 国产极品天堂在线| 久久午夜福利片| 午夜福利视频在线观看免费| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久 成人 亚洲| av在线老鸭窝| 日本色播在线视频| av不卡在线播放| 热99久久久久精品小说推荐| 美女主播在线视频| 国产 精品1| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日本色播在线视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲精品一二三| 五月伊人婷婷丁香| www日本在线高清视频| 蜜桃在线观看..| 国产一区二区在线观看日韩| 99久国产av精品国产电影| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲国产成人一精品久久久| 永久免费av网站大全| 9色porny在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 成人毛片a级毛片在线播放| 多毛熟女@视频| 美女视频免费永久观看网站| 久久99一区二区三区| 大香蕉97超碰在线| 欧美97在线视频| 日本与韩国留学比较| 午夜福利视频精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 一级毛片 在线播放| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产欧美亚洲国产| 国国产精品蜜臀av免费| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲人成77777在线视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日本免费在线观看一区| 视频中文字幕在线观看| 国产又爽黄色视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲精品日本国产第一区| 宅男免费午夜| 成人国语在线视频| 美女视频免费永久观看网站| 天堂中文最新版在线下载| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美精品av麻豆av| 午夜福利视频在线观看免费| 午夜日本视频在线| 欧美人与性动交α欧美软件 | av卡一久久| 男女无遮挡免费网站观看| 免费观看a级毛片全部| 国产在视频线精品| 黄色配什么色好看| 激情五月婷婷亚洲| 精品亚洲成国产av| 成人黄色视频免费在线看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久av网站| 一级毛片 在线播放| 韩国av在线不卡| 亚洲人成77777在线视频| 久久久精品94久久精品| 国产高清三级在线| 精品国产乱码久久久久久小说| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产不卡av网站在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 熟女人妻精品中文字幕| 黑丝袜美女国产一区| 久久ye,这里只有精品| av线在线观看网站| 国产一区二区三区av在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 18禁国产床啪视频网站| 少妇的逼好多水| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 成人毛片60女人毛片免费| 校园人妻丝袜中文字幕| 另类亚洲欧美激情| 亚洲国产欧美在线一区| av线在线观看网站| 69精品国产乱码久久久| 少妇 在线观看| 色94色欧美一区二区| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产永久视频网站| 国产精品久久久久成人av| 亚洲,欧美精品.| 日韩大片免费观看网站| 中文字幕免费在线视频6| 久久久亚洲精品成人影院| 91精品国产国语对白视频| 青春草视频在线免费观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲精品第二区| 久久久久久久久久人人人人人人| 观看美女的网站| 亚洲第一av免费看| 亚洲av.av天堂| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 全区人妻精品视频| av国产精品久久久久影院| 久久婷婷青草| 日韩中文字幕视频在线看片| av线在线观看网站| 欧美bdsm另类| 亚洲成人一二三区av| 国产成人精品无人区| 美女福利国产在线| 色5月婷婷丁香| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 日韩av不卡免费在线播放| 精品少妇内射三级| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 天堂8中文在线网| 午夜影院在线不卡| 女人精品久久久久毛片| 亚洲精品国产av蜜桃| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲人与动物交配视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产激情久久老熟女| 97在线人人人人妻| 最新中文字幕久久久久| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久久久久久久久久久大奶| 免费日韩欧美在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产av一区二区精品久久| 日日撸夜夜添| 国产乱人偷精品视频| 国产 一区精品| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产精品 国内视频| 美国免费a级毛片| 黄色配什么色好看| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲欧洲日产国产| 久久婷婷青草| 一边亲一边摸免费视频| 国产色婷婷99| 少妇的丰满在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产黄色免费在线视频| 少妇人妻精品综合一区二区| a级毛片在线看网站| 我要看黄色一级片免费的| 国产精品.久久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 成年动漫av网址| 少妇人妻久久综合中文| 久久精品国产亚洲av天美| 成人黄色视频免费在线看| 少妇熟女欧美另类| 一级,二级,三级黄色视频| 热99国产精品久久久久久7| videosex国产| 美女福利国产在线| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一区二区三区四区激情视频| 99re6热这里在线精品视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 少妇的逼水好多| 欧美精品国产亚洲| 亚洲国产精品国产精品| 国产成人91sexporn| 国产精品久久久久久久久免| 一区在线观看完整版| 韩国av在线不卡| 22中文网久久字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产福利在线免费观看视频| 在现免费观看毛片| 日本黄大片高清| 午夜福利影视在线免费观看| 国产有黄有色有爽视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产在线免费精品| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产成人一区二区在线| 青青草视频在线视频观看| 考比视频在线观看| 国产亚洲最大av| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 老司机影院成人| 国产有黄有色有爽视频| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲成色77777| 国产成人免费无遮挡视频| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 18+在线观看网站| 久久久精品94久久精品| 国产不卡av网站在线观看| 免费av中文字幕在线| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 韩国精品一区二区三区 | 欧美97在线视频| 黑人高潮一二区| 一个人免费看片子| 少妇的丰满在线观看| 久久久久久人人人人人| 成人国产麻豆网| 成年av动漫网址| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 自线自在国产av| 日韩精品有码人妻一区| 国产在线一区二区三区精| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲国产精品国产精品| 中国三级夫妇交换| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日韩大片免费观看网站| 夜夜爽夜夜爽视频| 免费av中文字幕在线| 人妻 亚洲 视频| 97在线视频观看| 日韩一区二区视频免费看| 国产激情久久老熟女| 在线观看免费视频网站a站| 少妇的逼好多水| 国产淫语在线视频| 国产精品三级大全| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲情色 制服丝袜| 高清视频免费观看一区二区| av国产精品久久久久影院| 久久久久国产网址| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 黄色配什么色好看| 午夜91福利影院| 九九在线视频观看精品| 欧美国产精品va在线观看不卡| 男女免费视频国产| 丝袜脚勾引网站| 国产永久视频网站| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 一区二区三区精品91| 欧美3d第一页| 成人国产麻豆网| 伊人久久国产一区二区| 各种免费的搞黄视频| 亚洲少妇的诱惑av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 日韩视频在线欧美| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美+日韩+精品| 久久青草综合色| 看免费成人av毛片| 精品卡一卡二卡四卡免费| 99国产综合亚洲精品| 国产亚洲精品久久久com| 男女下面插进去视频免费观看 | 中文字幕人妻熟女乱码| 日日啪夜夜爽| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品不卡视频一区二区| 久久97久久精品| 国产精品一区二区在线观看99| 最后的刺客免费高清国语| 全区人妻精品视频| 欧美精品亚洲一区二区| 街头女战士在线观看网站| 另类精品久久| 亚洲美女视频黄频| 免费少妇av软件| 欧美国产精品一级二级三级| 国产毛片在线视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲四区av| 国产精品 国内视频| 人妻系列 视频| 日本色播在线视频| 涩涩av久久男人的天堂| 一级a做视频免费观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产1区2区3区精品| 亚洲成色77777| 高清欧美精品videossex| 男女下面插进去视频免费观看 | 日韩不卡一区二区三区视频在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产男女内射视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 成年人午夜在线观看视频| 22中文网久久字幕| 999精品在线视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 在线观看人妻少妇| av一本久久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 在线观看免费高清a一片| 精品国产露脸久久av麻豆| a级毛片黄视频| freevideosex欧美| 亚洲精品国产av蜜桃| 我的女老师完整版在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久久久久久精品精品| 美女中出高潮动态图| 一边亲一边摸免费视频| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 一二三四中文在线观看免费高清| 不卡视频在线观看欧美| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 激情五月婷婷亚洲| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 亚洲av中文av极速乱| 狂野欧美激情性bbbbbb| 中文天堂在线官网| 在线 av 中文字幕| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产在线免费精品| 亚洲高清免费不卡视频| 成人免费观看视频高清| 丝袜美足系列| 国产成人精品在线电影| 性色avwww在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 99久久综合免费| 亚洲成人av在线免费| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 日韩三级伦理在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 午夜av观看不卡| 黄色视频在线播放观看不卡| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲色图综合在线观看| 日韩成人伦理影院| 国产男女内射视频| 丝袜喷水一区| 久久精品国产自在天天线| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品熟女少妇av免费看| 中文字幕av电影在线播放| 熟女av电影| 2018国产大陆天天弄谢| 日本91视频免费播放| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 超碰97精品在线观看| freevideosex欧美| 精品一区二区三区视频在线| 国产熟女欧美一区二区| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲,欧美精品.| 91久久精品国产一区二区三区| 男女午夜视频在线观看 | av线在线观看网站| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 黄色怎么调成土黄色| 免费人成在线观看视频色| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 久久免费观看电影| 亚洲综合精品二区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| xxxhd国产人妻xxx| 深夜精品福利| 久久ye,这里只有精品| 秋霞伦理黄片| 精品久久蜜臀av无| 一个人免费看片子| 国产成人91sexporn| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 午夜av观看不卡| 在线观看www视频免费| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 在现免费观看毛片| av.在线天堂| 午夜福利影视在线免费观看| 色94色欧美一区二区| 国产1区2区3区精品| 欧美日本中文国产一区发布| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品酒店卫生间| 老司机影院成人| 香蕉国产在线看| 日日啪夜夜爽| 91久久精品国产一区二区三区| 国产一区二区激情短视频 | 51国产日韩欧美| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲三级黄色毛片| xxxhd国产人妻xxx| 永久网站在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 777米奇影视久久| 熟女av电影| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 黄色 视频免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 性色avwww在线观看| 18在线观看网站| 乱人伦中国视频| 男女边吃奶边做爰视频| 少妇高潮的动态图| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 男人添女人高潮全过程视频| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲av欧美aⅴ国产| 中文字幕制服av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 在线精品无人区一区二区三| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美精品一区二区免费开放| tube8黄色片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 另类精品久久| 777米奇影视久久| 看免费成人av毛片| 下体分泌物呈黄色| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美变态另类bdsm刘玥| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 18禁观看日本| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲成色77777| 秋霞在线观看毛片| 桃花免费在线播放| 亚洲,欧美精品.| 亚洲精品国产av成人精品| 成人手机av| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 久久人妻熟女aⅴ| 中文字幕制服av| 久久ye,这里只有精品| 精品熟女少妇av免费看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 黑人猛操日本美女一级片| 在线天堂最新版资源| 晚上一个人看的免费电影| 男女国产视频网站| 免费观看在线日韩| 中文字幕亚洲精品专区| 国产精品三级大全| 在线天堂最新版资源| 三上悠亚av全集在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美成人午夜免费资源| 免费大片18禁| 一级片免费观看大全| 丝袜喷水一区|