不同水平白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉部分生化指標(biāo)的影響

■高 妍 方珍珍 朱國(guó)霞 孫金輝 喬秀亭 白東清 周李君 劉 波

（天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384）

近年來(lái)，中草藥作為飼料添加劑，在增產(chǎn)防病方面作用明顯，正成為一種新的發(fā)展趨勢(shì)[1]?；⒄仁且环N臨床常用的中藥材，為蓼科植物虎杖的干燥莖和根，在我國(guó)大部分地區(qū)均有種植[2]。白藜蘆醇是一種天然植物抗毒素，存在于近70種植物中，是中藥大黃和虎杖的主要活性成分[3]。白藜蘆醇對(duì)小鼠機(jī)體有抗炎、抗氧化和抗癌等多種藥理作用[4]，還可降低急性運(yùn)動(dòng)后小鼠血清、肝臟、心肌、腦組織中的丙二醛含量，提高超氧化物歧化酶活性[5-6]。

烏克蘭鱗鯉(Cyprinus carpio)，又名俄羅斯鯉，是一種引進(jìn)的養(yǎng)殖品種[7]。與普通鯉魚相比具有生長(zhǎng)快、個(gè)體大、抗病力強(qiáng)、易馴化、出肉率高等優(yōu)點(diǎn)[8]。白藜蘆醇在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物上的應(yīng)用還未見(jiàn)報(bào)道?；诖?，本試驗(yàn)通過(guò)在飼料中添加不同水平的白藜蘆醇，投喂烏克蘭鱗鯉，旨在探討白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉消化和體內(nèi)生化指標(biāo)的影響，尋求對(duì)烏克蘭鱗鯉適宜的添加水平，為水產(chǎn)動(dòng)物健康養(yǎng)殖提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)魚

試驗(yàn)用健康烏克蘭鱗鯉幼魚購(gòu)自天津市西青區(qū)畜牧水產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，運(yùn)至天津農(nóng)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室。進(jìn)行消毒處理后，置于水箱中暫養(yǎng)。魚平均體重為(4.94±0.04)g，平均體長(zhǎng)為(6.44±1.02)cm。

1.1.2 試驗(yàn)飼料

烏克蘭鱗鯉基礎(chǔ)飼料為鯉魚魚種配合飼料，購(gòu)自天津海大飼料有限公司，其主要營(yíng)養(yǎng)成分為粗蛋白質(zhì) 32%、粗脂肪≥10%、粗灰分15.0%、鈣0.5%～1.5%、總磷0.7%、食鹽0.3%～1.5%、賴氨酸≥1.45%、水分≤12.5%，置干燥陰涼處保存。

白藜蘆醇：純度≥98%（西安匯林生物科技有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

將白藜蘆醇按40、80、120、160、200 mg/kg比例均勻拌入飼料中，以不添加中草藥組作為對(duì)照，共6組，分別投喂6組烏克蘭鱗鯉。

經(jīng)過(guò)暫養(yǎng)、測(cè)量外部指標(biāo)后，選取規(guī)格一致、體質(zhì)健壯、無(wú)病無(wú)傷的烏克蘭鱗鯉540尾，隨機(jī)分為6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚，分別飼養(yǎng)于18個(gè)67 cm×50 cm×36 cm水族箱內(nèi)，試驗(yàn)魚經(jīng)2周暫養(yǎng)后開(kāi)始正式試驗(yàn)。投飼率為3%～4%，試驗(yàn)水為自來(lái)水，pH值為7.2～7.5，水溫控制在(28.5±1)℃，溶氧大于5 mg/l，氨氮控制在0.05 mg/l以下。每天換水1/3～1/2，每天投喂兩次。

1.2.2 樣品收集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)試驗(yàn)魚饑餓24 h后取樣。每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取10尾魚，采用尾部靜脈抽血方法，用1 ml一次性無(wú)菌注射器采血。在針管中加入少量肝素，每10尾魚的血為一個(gè)樣本，注入2 ml的離心管中，4℃、4 500 r/min離心15 min，取血漿備用。將魚置于冰盤上進(jìn)行解剖取出肝胰臟和腸道，剔除腸道附屬物，將腸道分為前腸、中腸和后腸，保存于-80℃冰箱備用。

1.2.3 樣品的測(cè)定

樣品分析前于4℃冰箱中解凍，用預(yù)冷的0.86%的生理鹽水洗2次，再用濾紙吸去表面水分，稱重，切碎后用移液器加入9倍于組織塊質(zhì)量的預(yù)冷的0.86%的生理鹽水，在勻漿器中進(jìn)行勻漿，4℃、4 500 r/min離心15 min，取上清液備用。

蛋白酶測(cè)定采用福林酚法[9]。SOD、CAT、MDA、AMS、LPS、AKP、ACP、ALT及各組織中蛋白含量均采用南京建成生物工程技術(shù)研究所提供的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），若差異達(dá)到顯著水平（P＜0.05），則進(jìn)行Duncan's法多重比較。所有數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉抗氧化指標(biāo)的影響(見(jiàn)表1)

表1 白藜蘆醇水平對(duì)烏克蘭鱗鯉抗氧化指標(biāo)的影響

肝胰臟SOD活性除40 mg/kg組低于對(duì)照組外(P＜0.05)，其余各組均有所升高，其中120 mg/kg組SOD活性最高(P＜0.05)。80～160 mg/kg組烏克蘭鱗鯉肝胰臟中MDA含量均低于對(duì)照組，其中120 mg/kg、160 mg/kg組MDA含量顯著降低（P＜0.05）。血漿中MDA含量雖有降低但各組間變化不大（P＞0.05）。40 mg/kg組肝胰臟CAT活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），80～160 mg/kg組肝胰臟CAT活性均極顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。80、160、200 mg/kg組血漿CAT活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

根據(jù)以上結(jié)果可以看出，與對(duì)照組相比，飼料中添加 80～160 mg/kg白藜蘆醇，能夠提高烏克蘭鱗鯉肝胰臟SOD活性，降低肝胰臟MDA含量，提高血漿中CAT活性。

2.2 白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉消化酶活性的影響（見(jiàn)表2）

表2 白藜蘆醇水平對(duì)烏克蘭鱗鯉消化酶活性的影響（U/mg prot.）

由表2可知,與對(duì)照組相比,飼料中添加40 mg/kg白藜蘆醇能顯著提高肝胰臟三種消化酶活性（P＜0.05），前腸和中腸蛋白酶以及中腸脂肪酶活性也顯著提高（P＜0.05）。添加80 mg/kg白藜蘆醇對(duì)中腸三種消化酶、肝胰臟蛋白酶和前腸脂肪酶活性有顯著提高作用（P＜0.05）。添加120～200 mg/kg白藜蘆醇后，鯉魚后腸淀粉酶活性和肝胰臟蛋白酶活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），添加160 mg/kg白藜蘆醇組前腸蛋白酶、中腸脂肪酶活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

由此可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，飼料中添加40～160 mg/kg白藜蘆醇，能提高烏克蘭鱗鯉肝胰臟、前腸和中腸的消化能力。

2.3 白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉部分免疫指標(biāo)的影響（見(jiàn)表3）

由表3可知，40～160 mg/kg組肝胰臟ACP活性均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)；40～200 mg/kg添加組血漿ACP活性均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。40 mg/kg和160 mg/kg組肝胰臟AKP活性顯著高于對(duì)照組；除80 mg/kg組血漿AKP活性顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），其余各添加組均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉的血漿和肝胰臟ALT活性的影響不顯著（P＞0.05）。

表3 白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉部分免疫指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉抗氧化能力的影響

機(jī)體內(nèi)的氧化與還原反應(yīng)在正常情況下處于一種動(dòng)態(tài)平衡，維持這一平衡依賴于體內(nèi)的氧化與抗氧化系統(tǒng)的正常工作[10]。SOD是體內(nèi)清除超氧自由基的第一道防線[11]，CAT保護(hù)細(xì)胞免受過(guò)氧化氫及氧自由基毒性[12-13]，二者是生物體抗氧化系統(tǒng)的重要組成酶類，對(duì)活性氧自由基的清除起著關(guān)鍵的作用；MDA則是脂質(zhì)過(guò)氧化物反應(yīng)中的最終產(chǎn)物，可導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞的損傷[14]。

本試驗(yàn)中，在飼料中添加80～200 mg/kg RES，能夠提高烏克蘭鱗鯉肝胰臟SOD活性，降低肝胰臟MDA含量，提高血漿中CAT活性。卓杰先等[15]發(fā)現(xiàn)，RES可顯著提高運(yùn)動(dòng)小鼠血清SOD活性（P＜0.05），降低MDA水平（P＜0.05）。莫志賢等[14]得出，白藜蘆醇甙在0.05～2.00 mmol/l劑量范圍，受損傷的肝細(xì)胞懸液中SOD活性升高及MDA量下降均呈明顯的劑量依賴性。段勝紅[16]研究RES對(duì)大鼠非酒精性脂肪肝的保護(hù)作用時(shí)，發(fā)現(xiàn)RES能明顯降低模型組大鼠肝組織MDA含量，并且能顯著提高其SOD活力，說(shuō)明RES能抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，從而提高抗氧化能力。這些與本試驗(yàn)所得出的RES能提高烏克蘭鱗鯉肝胰臟抗氧化能力的結(jié)論相符。

3.2 白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉消化酶活性的影響

消化酶活性直接關(guān)系到魚類對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用[17]，適宜的中草藥添加劑可以提高魚類的消化酶活性[18]。試驗(yàn)探討飼料中添加白藜蘆醇烏克蘭鱗鯉體內(nèi)淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性的變化情況。

陳蘇維等[19]在泥鰍的飼料中添加不同水平中草藥，2%添加量能顯著提高泥鰍肝胰臟的AMS活性（P＜0.05）。中草藥山楂、麥芽等按一定比例粉碎混合后對(duì)異育銀鯽肝胰臟AMS活性有顯著提高作用（P＜0.05）[20]。本試驗(yàn)中，飼喂添加白藜蘆醇飼料，對(duì)烏克蘭鱗鯉肝胰臟AMS也有一定的提高作用。白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉腸道LPS和蛋白酶活性也存在不同程度的影響，前腸LPS活性和中腸蛋白酶活性在80 mg/kg組達(dá)到最高并顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。楊維維等[21]報(bào)道，添加大黃素對(duì)克氏螯蝦腸道LPS無(wú)顯著影響（P＞0.05），但對(duì)腸道蛋白酶有顯著提高作用。飼料中添加二苯乙烯苷能顯著降低雞小腸LPS活性，但胰蛋白酶活性有顯著提高[22]。以上報(bào)道與本試驗(yàn)結(jié)果存在一定差異，可能原因是不同動(dòng)物的主要消化器官不同，導(dǎo)致中草藥對(duì)消化酶的影響不同。

3.3 白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉部分免疫指標(biāo)的影響

磷酸酶又稱磷酸單酯水解酶，是可以催化各種含磷化合物水解的酶類，根據(jù)它們催化作用的最適pH值特性，可分為堿性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）[23]。堿性磷酸酶主要存在于魚類前腸上皮細(xì)胞的淺部和紋狀緣上，與脂類等物質(zhì)的吸收有一定的相關(guān)關(guān)系[24]。ALT則是機(jī)體中最重要的轉(zhuǎn)氨酶。

本試驗(yàn)中綜合AKP和ACP數(shù)據(jù)分析可得，160 mg/kg組脂質(zhì)過(guò)氧化程度較低，機(jī)體處于較健康狀態(tài)，不同水平白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉ACP和AKP活性有不同程度的升高。馬維波對(duì)香魚投喂大黃、金銀花與當(dāng)歸等中草藥，證實(shí)中草藥能提高機(jī)體內(nèi)ACP與AKP活性[25]。添加大黃素可使團(tuán)頭魴血清AKP活性較對(duì)照組提高20.47%（P＜0.05）[26]。李素瑩等[27]報(bào)道飼料中添加1.0～5.0 g/kg大黃對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清ACP有顯著提高作用（P＜0.05）。以上報(bào)道與本試驗(yàn)結(jié)果基本相符，說(shuō)明白藜蘆醇能夠提高機(jī)體AKP和ACP活性，對(duì)機(jī)體解毒有積極作用，還可能促進(jìn)機(jī)體對(duì)脂類的吸收作用。白藜蘆醇對(duì)烏克蘭鱗鯉的血漿和肝胰臟ALT活性的影響不顯著，說(shuō)明在試驗(yàn)范圍內(nèi)，白藜蘆醇未對(duì)烏克蘭鱗鯉造成肝損傷。

4 結(jié)論

① 飼料中添加80～160 mg/kg白藜蘆醇，能夠提高烏克蘭鱗鯉抗氧化和免疫能力。

② 飼料中添加40～160 mg/kg白藜蘆醇，能夠提高烏克蘭鱗鯉的消化功能。

③綜合來(lái)看，試驗(yàn)設(shè)置范圍內(nèi)，在烏克蘭鱗鯉飼料中添加80～160 mg/kg白藜蘆醇較為適宜。