絲素蛋白復(fù)合物在骨缺損中的應(yīng)用

王碩 韋興

由于創(chuàng)傷、腫瘤或先天發(fā)育不足等原因?qū)е氯梭w的骨組織缺損較常見。這將導(dǎo)致骨骼的外形和功能出現(xiàn)缺陷，從而不同程度地影響患者的生活質(zhì)量，因此骨缺損的修復(fù)一直是骨外科臨床中關(guān)注的焦點(diǎn)之一。其中對(duì)于較大范圍的骨缺損，采用人工材料填充骨缺損的手術(shù)已成為目前研究的熱點(diǎn)。它幾乎可以避免自體骨及同種或異體骨移植的大多數(shù)問題。而對(duì)于人工材料的主要問題仍是探求理想的骨移植替代材料。絲素蛋白是一種天然高分子纖維蛋白，文獻(xiàn)證明它不僅具有良好的生物相容性和降解性能，還有易加工修飾、降解產(chǎn)物無毒性和低免疫原性等特點(diǎn)，并且絲素蛋白 ( silk fibroin，SF ) 材料的機(jī)械強(qiáng)度也明顯優(yōu)于其它生物材料。因此，許多研究者將成骨種子細(xì)胞和絲素蛋白結(jié)合起來制備具有骨修復(fù)能力的絲素蛋白材料，材料中的絲素蛋白可為細(xì)胞生長(zhǎng)、黏附和分化提供所需的空間及環(huán)境。絲素蛋白骨修復(fù)材料的研發(fā)已經(jīng)成為骨組織工程研究的熱點(diǎn)之一。

一、絲素蛋白的生物學(xué)特性

我國是農(nóng)業(yè)大國，蠶絲來源廣泛，產(chǎn)量高。由于其降解性能好并有一定的機(jī)械強(qiáng)度，早已作為縫線應(yīng)用在手術(shù)中。蠶絲絲線的成功應(yīng)用已經(jīng)讓大家看到了其良好的生物相容性[1]。而在臨床應(yīng)用中，其外層包裹的絲膠蛋白可引起比較嚴(yán)重的過敏反應(yīng)和異物反應(yīng)[2]。生物材料植入體內(nèi)后失敗的一個(gè)主要原因就是引發(fā)免疫反應(yīng)。有文獻(xiàn)報(bào)道，將絲素蛋白放入老鼠皮下 8 周，可以引起輕微的炎性細(xì)胞刺激并增加吞噬細(xì)胞數(shù)量，顯微鏡下能看到一些吞噬細(xì)胞淋巴細(xì)胞[3-5]。輕微的炎性細(xì)胞刺激不會(huì)產(chǎn)生明顯的不良反應(yīng)，但是長(zhǎng)期存在于人體內(nèi)是否會(huì)有不良反應(yīng)仍未證實(shí)。故有人將外層蛋白剝離，保留內(nèi)層的絲素蛋白，從而避免了嚴(yán)重的過敏反應(yīng)和異物反應(yīng)[6]。

作為一個(gè)植入材料，降解性能是評(píng)價(jià)其好壞的重要指標(biāo)，按照 Vert 等[7]的定義，生物降解是一個(gè)可植入聚合材料被生物元素降解成碎片的過程，它可以通過流體運(yùn)輸出去而并不一定從體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)。另外，生物吸附也把最初的異物材料通過將其降解后，經(jīng)過過濾和代謝完全排出。絲素蛋白具有良好的機(jī)械性能，蠶絲強(qiáng)度比鋼高 10 倍[8]。由于骨細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)中主要含有 I 型膠原和羥基磷灰石，這就需要骨組織的支架材料有較高韌性和機(jī)械強(qiáng)度。而絲素蛋白以穩(wěn)定的反平行 β-折疊構(gòu)象為基礎(chǔ)，兩種構(gòu)象間可通過各種條件的改變來互相轉(zhuǎn)變，這種結(jié)構(gòu)決定了絲素蛋白在長(zhǎng)軸方向強(qiáng)度很高，同時(shí)具有一定的延展性，其綜合力學(xué)性能遠(yuǎn)高于普通合成纖維。

Wang 等[6]進(jìn)行了蠶絲的體內(nèi)降解實(shí)驗(yàn)，證明蠶絲材料植入大鼠體內(nèi)幾周后就開始分解，1 年后完全消失。絲素蛋白的降解產(chǎn)物是以甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸為主的18 種人體氨基酸，不僅能進(jìn)行生物降解還可以進(jìn)行生物吸收，并對(duì)皮膚、牙周等組織有營(yíng)養(yǎng)作用[7,9]。此外，絲素蛋白對(duì)氧和水有較強(qiáng)的通透性，這有利于細(xì)胞的黏附、增殖與分化。這是因?yàn)榻z素蛋白肽鏈的 C 端親水區(qū)附近類似精氨酸的氨基酸殘基表面帶有正電荷，這與細(xì)胞表面主要分布負(fù)電荷基團(tuán)的哺乳動(dòng)物異性相吸，因此更有利于細(xì)胞的黏附；另外絲素蛋白中大量的精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸序列也常常是細(xì)胞吸附時(shí)的識(shí)別靶位[10-12]。

一個(gè)良好的骨缺損修復(fù)材料應(yīng)該具備以下特點(diǎn)[13-14]：( l ) 良好的生物相容性；( 2 ) 可降解性和降解速率的可控性；( 3 ) 具有三維內(nèi)聯(lián)多孔隙結(jié)構(gòu)、較高面積和體積比、良好的骨傳導(dǎo)性及骨誘導(dǎo)性；( 4 ) 材料表面有利于細(xì)胞的吸附生長(zhǎng)，利于細(xì)胞的分化；( 5 ) 有一定的機(jī)械強(qiáng)度及韌性；( 6 ) 易加工、易塑形、來源充足。目前絲素多孔支架已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于骨組織工程學(xué)[15]。絲素蛋白作為支架的植骨材料，具有來源廣泛、產(chǎn)量高、生物相容性、降解性能、機(jī)械性能良好、過敏反應(yīng)和異物反應(yīng)低的特性，但還存在骨誘導(dǎo)、骨傳導(dǎo)性能較低的問題，由于單一的材料不能滿足植骨材料的所有需求，所以人們把目光轉(zhuǎn)移到復(fù)合材料上，希望集合兩種或多種材料的優(yōu)勢(shì)，互補(bǔ)其劣勢(shì)，達(dá)到完美的性能組合。目前復(fù)合型骨缺損填充材料的研究及應(yīng)用已成為骨組織修復(fù)替代材料研究的熱點(diǎn)。Meinel等[16]首次將絲素蛋自制備成三維多孔絲素蛋白支架應(yīng)用于骨組織工程研究，將人間充質(zhì)干細(xì)胞 ( hMSC ) 種植于支架內(nèi)植入鼠頭蓋骨創(chuàng)傷模型，發(fā)現(xiàn)植入后 5 周內(nèi)能夠誘導(dǎo)骨形成。這說明絲素蛋白可用于骨重建和再生，并且具有良好的力學(xué)穩(wěn)定性和持久性。這個(gè)發(fā)現(xiàn)開啟了人們應(yīng)用絲素蛋白支架的復(fù)合材料研究，此后諸多學(xué)者利用復(fù)合材料的新思路，與其它組織材料相結(jié)合，希望其復(fù)合材料成為理想的骨缺損填充物。

二、絲素蛋白復(fù)合物

1. 與羥基磷灰石復(fù)合：從骨的組成和功能而言，天然骨組織主要是由無機(jī)納米羥基磷灰石和有機(jī)膠原纖維構(gòu)成的復(fù)合材料。體內(nèi)骨組織是受細(xì)胞高度調(diào)節(jié)控制生長(zhǎng)而成的生物礦化組織，由兩大部分構(gòu)成：有機(jī)質(zhì)和無機(jī)質(zhì)。有機(jī)質(zhì) ( 主要是骨膠原纖維束 ) 作為骨的網(wǎng)狀支架，賦予骨的彈性和韌性；而無機(jī)質(zhì) ( 主要是堿性磷酸鈣結(jié)晶 ) 決定骨骼的硬度及剛性特征。納米羥基磷灰石與絲素蛋白有機(jī)結(jié)合使得骨組織成為機(jī)體最堅(jiān)硬的組織之一，在組成成分和結(jié)構(gòu)上羥基磷灰石與骨骼、牙齒等一樣，具有良好的生物活性和生物相容性。但該材料也存在一些不足之處，如不具有骨誘導(dǎo)性、脆性大、塑形差、降解速度慢等。納米羥基磷灰石由于晶體重復(fù)周期少、結(jié)晶度低，比普通磷灰石在人體內(nèi)更容易降解和吸收，并且對(duì)生物組織具有更高的表面活性。2001 年 Hartgerink 等[17]用膠原纖維與羥基磷灰石復(fù)合物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物骨缺損修復(fù)的研究，結(jié)果顯示此復(fù)合物與天然骨相似，具有高度的骨傳導(dǎo)活性，能誘導(dǎo)骨重建，可用于負(fù)重區(qū)骨缺損的修復(fù)。隨后有眾多學(xué)者對(duì)膠原纖維與羥基磷灰石復(fù)合物進(jìn)行了研究。但由于 I 型膠原目前的主要來源是動(dòng)物提取或人工合成，而動(dòng)物來源存在免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，且人工合成膠原價(jià)格昂貴，所以限制了其在臨床的廣泛應(yīng)用。

近年來國外報(bào)道[18]，將絲素蛋白作為無機(jī)物礦化的支架來誘導(dǎo)羥基磷灰石的晶體生長(zhǎng)，其與納米羥基磷灰石的復(fù)合物可以模擬天然骨組織，從而彌補(bǔ)單純納米羥基磷灰石力學(xué)性能的不足，并且大大減少了 I 型膠原導(dǎo)致的免疫反應(yīng)。Bhumiratana 等[19]制得了羥基磷灰石與絲素蛋白復(fù)合材料，并通過改變絲素蛋白在材料中的比例，比較不同配比復(fù)合材料的微結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)的差異。鞠剛等[20]將絲素蛋白與羥基磷灰石制成復(fù)合材料，以兔子股骨滑車溝制作缺損模型，證明該復(fù)合材料有一定的骨缺損修復(fù)能力。2014 年，Kweon 等[21]制作羥基磷灰石與絲素蛋白復(fù)合 ( SH 組 )、羥基磷灰石與膠原蛋白復(fù)合 ( CH 組、HA 組 )材料并以空白為對(duì)照，以兔子脛骨為植骨模型，材料植入后 6 周 SH 組新骨形成率及骨結(jié)合率明顯優(yōu)于其余 3 組，證明該含絲素蛋白的復(fù)合材料的骨缺損修復(fù)能力高于羥基磷灰石和膠原蛋白組成的復(fù)合材料。絲素蛋白與羥基磷灰石復(fù)合的生物材料是類似正常骨組織的復(fù)合材料，有望成為理想的骨移植修復(fù)材料，但目前對(duì)于材料成骨后的生物力學(xué)測(cè)試強(qiáng)度及復(fù)合材料的骨誘導(dǎo)和骨傳導(dǎo)的能力是否能達(dá)到正常骨組織的研究仍然較少。

2. 與磷酸鈣骨水泥 ( calciurn phosphate cemeni，CPC )復(fù)合：20 世紀(jì) 80 年代，Brown 等[22]發(fā)明了 CPC，它是一種新型自固化生物活性材料，可被降解為羥基磷灰石( hydroxyapatite，HA )。因其具有良好的生物相容性、骨傳導(dǎo)性、降解性和機(jī)械性能，曾考慮應(yīng)用于植骨，但由于 CPC 力學(xué)強(qiáng)度低、脆性大、固化時(shí)間長(zhǎng)、黏結(jié)性差、在生理環(huán)境中的抗疲勞強(qiáng)度不高，尤其是在濕環(huán)境下斷裂韌性非常低，使其應(yīng)用受到較大的限制[23-25]。因此，國內(nèi)外學(xué)者紛紛致力于對(duì)上述問題的研究，將 CPC 與各種材料進(jìn)行復(fù)合，如殼聚糖、可吸收纖維、聚合物等，但均未能取得突破性的進(jìn)展[26]。解決 CPC 本身強(qiáng)度和脆性問題的關(guān)鍵是研制一種在保持良好的骨傳導(dǎo)性的同時(shí)使其機(jī)械性能得到大幅度提高的材料，同時(shí)必須對(duì)磷酸鈣有良好親和力、可降解高分子，而絲素蛋白恰恰能符合這些要求。有研究報(bào)道[27]，在 CPC 中添加適量的絲素蛋白能增加其抗壓強(qiáng)度，體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)有良好的生物相容性。Pujiang[28]對(duì)于磷酸鈣復(fù)合絲素蛋白應(yīng)用于骨缺損進(jìn)行了研究發(fā)現(xiàn)低結(jié)晶度的碳酸鈣復(fù)合絲素蛋白后可在兔子體內(nèi)成功修復(fù)骨缺損及韌帶，并在體內(nèi)外證實(shí)其明顯的成骨作用。

3. 與間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合：關(guān)節(jié)軟骨無血液供應(yīng)和神經(jīng)支配，損傷后幾乎不能自發(fā)修復(fù)，通過構(gòu)建生物特性與正常關(guān)節(jié)軟骨相似的組織工程軟骨是目前組織工程研究的熱點(diǎn)之一。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 ( bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs ) 具有易于分離以及廣泛的可塑性等特點(diǎn)。國外應(yīng)用 BMSCs 治療成骨不全和脂肪軟骨營(yíng)養(yǎng)障礙驗(yàn)證了移植 BMSCs 自發(fā)修復(fù)的能力[29]。Wakitani 等[30]首先實(shí)現(xiàn)了用間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)兔軟骨缺損。但它仍存在不足，缺少一個(gè)有利于種子細(xì)胞黏附、增殖和分化的生物支架材料。絲素蛋正好彌補(bǔ)了 BMSCs 的作為植骨材料存在的這一缺點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)表明[31]，經(jīng)誘導(dǎo)的 BMSCs 與絲素蛋白復(fù)合在體內(nèi)可形成透明軟骨，并修復(fù)動(dòng)物膝關(guān)節(jié)全層軟骨缺損。這為臨床上簡(jiǎn)便快捷地修復(fù)軟骨缺損提供了基礎(chǔ)。Jin 等[32]應(yīng)用人的胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞 ( placentaderived mesenchymal stem cells，PMSCs ) 與絲素蛋白復(fù)合植入于大白兔橈骨缺損模型內(nèi)，發(fā)現(xiàn)能提高組織的修復(fù)能力。間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合絲素蛋白有望成為骨組織工程的潛在來源。

4. 與殼聚糖復(fù)合：殼聚糖是自然界中少見的一種帶正電荷的堿性多糖，它有良好的生物相容性。Lahiji 等[33]體外研究發(fā)現(xiàn)，殼聚糖不僅可促進(jìn)成骨細(xì)胞增生，還能表達(dá)I 型膠原，其降解產(chǎn)物為氨基葡萄糖具較好的可塑形性、可被人體吸收并且還不會(huì)引起抗原反應(yīng)。雖然殼聚糖已經(jīng)廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，但作為植骨材料它存在機(jī)械性能差的缺點(diǎn)。柳嘉等[34]證實(shí)了，絲素蛋白與殼聚糖復(fù)合具有較好的生物相容性及成骨性能。然而制備孔隙率高、孔徑適合成骨細(xì)胞生長(zhǎng)、具有較好的骨傳導(dǎo)性和骨誘導(dǎo)性的絲素蛋白與殼聚糖復(fù)合植骨材料，還需要進(jìn)一步的研究[35]。

5. 與多種材料復(fù)合：絲素蛋白與常用植骨材料單獨(dú)應(yīng)用的研究還存在一定的缺陷，而 3 種材料混合制備的支架材料是否可以彌補(bǔ)各自的不足，是否甚至更加滿足骨組織工程的需要呢？有學(xué)者對(duì)此提出了自己的看法。Lima等[36]也對(duì)絲素蛋白、殼聚糖、納米羥基磷灰石及其三者的復(fù)合材料進(jìn)行了體外研究，將材料處理凍干并進(jìn)行孔隙率、孔隙大小、熱重量分析、掃描電鏡觀察等一系列理化性質(zhì)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)殼聚糖孔隙率最大，而三者的復(fù)合物在促進(jìn)和維持成骨的分化方面最有優(yōu)勢(shì)。葉鵬等[37]將絲素蛋白、殼聚糖、納米羥基磷灰石制成復(fù)合支架，認(rèn)為1∶1∶1 制作的復(fù)合支架材料更符合骨替代材料的要求，但尚未進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行證實(shí)。

雖然近期國內(nèi)外學(xué)者對(duì)絲素蛋白在骨修復(fù)的應(yīng)用進(jìn)行了體內(nèi)外等一系列研究，發(fā)現(xiàn)并證明了絲素蛋白作為植骨材料支架方面的諸多優(yōu)勢(shì)，但將其應(yīng)用于臨床治療方面還有相當(dāng)長(zhǎng)的一段路要走。絲素支架能否完全與骨組織相匹配以及在體內(nèi)的修復(fù)過程還需要長(zhǎng)期觀察。是否可以通過改變絲素蛋白內(nèi)在的化學(xué)修飾等得到性能優(yōu)良、具有臨床應(yīng)用價(jià)值的骨修復(fù)材料；能否找到與其它常用植骨材料相復(fù)合，從而達(dá)到骨誘導(dǎo)及骨傳導(dǎo)活性強(qiáng)的要求，還需要進(jìn)一步研究。

[1] Akai H, Nagashima T, Aoyagi S. Ultrastructure of posterior silk gland cells and liquid silk in Indian tasar silkworm, Antheraea mylitta drury (Lepidoptera: Saturniidae), Int. J. Insect Morphol.Embryol, 1993, 22(5)497-506.

[2] Meinel L, Fajardo R, Hofmann S, et al. Silk implants for the healing of critical size bone defects. Bone, 2005, 37(5):688-698.

[3] Zaoming W, Codina R, Fernández-Caldas E, et al. Partial characterization of the silk allergens in mulberry silk extract.J Investig Allergol Clin Immunol, 1996, 6(4):237-241.

[4] Sofia S, McCarthy MB, Gronowicz G, et al. Functionalized silk-based biomaterials for bone formation. J Biomed Mater Res, 2001, 54(1):139-148.

[5] Gellynck K, Verdonk PC, Van Nimmen E, et al. Silkworm and spider silk scaffolds for chondrocyte support. J Mater Sci Mater Med, 2008, 19(11):3399-3409.

[6] Wang Y, Rudym DD, Walsh A, et al. In vivo degradation of three-dimensional silk fibroin scaffolds. Biomaterials, 2008,29(24-25):3415-3428.

[7] Vert M, Li SM, Spenlehauer G, et al. Bioresorbability and biocompatibilityof aliphatic polyesters. J Mate Sci Mater Med,1992, 3(6):432-446.

[8] Giesa T, Arslan M, Pugno NM, et al. Nanoconfinement of spider silk fibrils begets superior strength, extensibility, and toughness. Nano Lett, 2011, 11(11):5038-5046.

[9] 齊欣, 劉建國, 常穎, 等. 骨組織工程中人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞動(dòng)態(tài)種植和靜態(tài)種植的比較研究. 生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志, 2006,23(1):175-179.

[10] Inouye K, Kurokawa M, Nishikawa S, et al. Use of Bombyx mori silk fibroin as a substratum for cultivation of animal cells.J Biochem BiophysMethods, 1998, 37(3):159-164.

[11] Minoura N, Tsukada M, Nagura M. Physico-chemical properties of silk fibroin membrane as a biomaterial. Biomaterials, 1990,11(6):430-434.

[12] Chen J, Altman GH, Karageorgiou V, et al. Human bone marrow stromal cell and ligament fibroblast responses on RGD-modified silk fibers. J Biomed Mater Res A, 2003, 67(2):559-570.

[13] Lin AS, Barrows TH, Cartmell SH, et al. Microarchitectural and mechanical characterization of oriented porous polymer scaffolds. Biomaterials, 2003, 24(3):481-489.

[14] Li S, De Wijn JR, Li J, et al. Macroporous biphasic calcium phosphate scaffold with high permeability/porosity ratio. Tissue Eng, 2003, 9(3):535-548.

[15] Vepari C, Kaplan DL. Silk as a Biomaterial. Prog Polym Sci,2007, 32(8-9):991-1007.

[16] Meinel L, Fajardo R, Hofmann S, et al. Silk implants for the healing of critical size bone defects. Bone, 2005, 37(5):688-698.

[17] Hartgerink JD, Beniash E, Stupp SI. Self-assembly and mineralization of peptide-amphiphile nanofibers. Science,2001, 294(5547):1684-1688.

[18] Fan C, Li J, Xu G, et al. Facile fabrication of nano-hydroxyapatite/silk fibroin composite via a simplified coprecipitation route. J Mater Sci, 2010, 45(21):5814-5819.

[19] Bhumiratana S, Grayson WL, Castaneda A, et al. Nucleation and growth of mineralized bone matrix on silk-hydroxyapatite composite scaffolds. Biomaterials, 2011, 32(11):2812-2820.

[20] 鞠剛, 徐衛(wèi)袁, 張亞, 等. 多孔絲素蛋白-羥基磷灰石復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨缺損. 中國組織工程研究與臨床康復(fù), 2011, 15(29):5327-5333.

[21] Kweon H, Lee SW, Hahn BD, et al. Hydroxyapatite and silk combination-coated dental implants result in superior bone formation in the peri-implant area compared with hydroxyapatite and collagen combination-coated implants.J Oral Maxillofac Surg, 2014, 72(10):1928-1936.

[22] Brown WE, Chow LC. A new caleium Phosphate watersetting cement. Westerville: Ameriean Ceramic Society. 1986:325-379.

[23] Takemasa R, Yamamoto H, Tani T, et al. Kyphoplasty using bioactive calcium Phosphate cementfor osteoporotic vertebral fractures. In 7lth Annual Meeting of American Academy of Orthopedic Surgeons. SanFraneiseo, Califomia, 2004: 538.

[24] Xu HH, Quinn JB, Takagi S, et al. Synergistic reinforcement of in situ hardening calcium phosphate composite scaffold for bone tissue engineering. Biomaterials, 2004, 25(6):1029-1037.

[25] Sun L, Xu HH, Takagi S, et al. Fast setting calcium phosphate cement-chitosan composite: mechanical properties and dissolution rates. J Biomater Appl, 2007, 21(3):299-315.

[26] Nakano M, Hirano N, Ishihara H, et al. Calcium phosphate cement leakage after percutaneous vertebroplasty for osteoporotic vertebral fractures: risk factor analysis for cement leakage. J Neurosurg Spine, 2005, 2(1):27-33.

[27] Zhang Y, Wu C, Friis T, et al. The osteogenic properties of CaP/silk composite scaffolds. Biomaterials, 2010, 31(10):2848-2856.

[28] Shi P, Teh TK, Toh SL, et al. Variation of the effect of calcium phosphate enhancement of implanted silk fibroin ligament bone integration. Biomaterials, 2013, 34(24):5947-5957.

[29] Liu G, Kawaguchi H, Ogasawara T, et al. Optimal combination of soluble factors for tissue engineering of permanent cartilage from cultured human chondrocytes. J Biol Chem, 2007,282(28):20407-20415.

[30] Wakitani S, Mitsuoka T, Nakamura N, et al. Autologous bone marrow stromal cell transplantation for repair of full-thickness articular cartilage defects in human patellae: two case reports.Cell Transplant, 2004, 13(5):595-600.

[31] 苗宗寧, 祝建中, 趙基棟, 等. 絲素蛋白復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程化骨修復(fù)節(jié)段性骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究. 國際生物醫(yī)學(xué)工程雜志, 2009, 32(5):273-275.

[32] Jin J, Wang J, Huang J, et al. Transplantation of human placenta-derived mesenchymal stem cells in a silk fibroin/hydroxyapatite scaffold improves bone repair in rabbits.J Biosci Bioeng, 2014, 118(5):593-598.

[33] Lahiji A, Sohrabi A, Hungerford DS, et al. Chitosan supports the expression of extracellular matrix proteins in human osteoblasts and chondrocytes. J Biomed Mater Res, 2000,51(4):586-595.

[34] 柳嘉, 曾曙光, 任力, 等. 絲素蛋白/殼聚糖三維多孔支架的構(gòu)建及結(jié)構(gòu)表征. 中國組織工程研究, 2012, 16(12):2197-2202.

[35] Gobin AS, Froude VE, Mathur AB. Structural and mechanical characteristics of silk fibroin and chitosan blend scaffolds for tissue regeneration. J Biomed Mater Res A, 2005, 74(3):465-473.

[36] Lima PA, Resende CX, Soares GD, et al. Preparation,characterization and biological test of 3D-scaffolds based on chitosan, fibroin and hydroxyapatite for bone tissue engineering. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl, 2013, 33(6):3389-3395.

[37] 葉鵬, 田仁元, 黃文良, 等. 絲素/殼聚糖/納米羥基磷灰石構(gòu)建的骨組織工程支架. 中國組織工程研究, 2013, 17(29):5269-5274.