喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的HPLC分析

李連強(qiáng)　權(quán)紅　蘭小中

摘要：建立HPLC測定喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]藥材中Boeravinone C含量的方法。色譜柱為Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-水（70∶30，V/V），流速為0.8 mL/min，檢測波長294 nm。結(jié)果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2=0.999 9）；精確度和準(zhǔn)確度良好，平均回收率為97.2%。該方法快速、簡單，可用于喜馬拉雅紫茉莉藥材的質(zhì)量評價(jià)。

關(guān)鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色譜

中圖分類號：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5536-03

喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]為紫茉莉科植物，其根的藏藥名為“阿夏尕那哈”，是傳統(tǒng)藏藥的五根之一[1]。藏醫(yī)名著《藍(lán)琉璃》中記載“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒氣病、浮腫、黃水病，破結(jié)石、腫瘤”。Wang等[2]首先從紫茉莉（M. jalapa L.）根中分離得到了一種魚藤酮類化合物——Boeravinone C，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。范海霞[3]也從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了Boeravinone C，并證實(shí)Boeravinone C對肺癌細(xì)胞株A549、肝癌細(xì)胞株Hep G-2、宮頸癌細(xì)胞株Hela有較強(qiáng)的抑制作用。本課題組從2007年開始研究喜馬拉雅紫茉莉的人工種植，經(jīng)過近6年探索，已系統(tǒng)掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植、水肥管理、病蟲害防治等關(guān)鍵技術(shù)，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產(chǎn)量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現(xiàn)狀。Boeravinone C有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是測定藥用植物有效成分的常用方法[4-7]，本試驗(yàn)建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測定方法，以期為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量評價(jià)提供方法[8]，為相關(guān)的藏藥開發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

喜馬拉雅紫茉莉藥材于2012年9月10日采自西藏林芝地區(qū)八一鎮(zhèn)章麥村藏藥材人工種植與示范基地，經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。樣品保存于西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

Boeravinone C對照品由西南大學(xué)藥學(xué)院陳敏教授實(shí)驗(yàn)室自制（純度>98%）。甲醇（色譜純）購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，去離子水購于杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司

1.2 儀器

島津LC-20高效液相色譜儀（LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動進(jìn)樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、KQ5200型超聲波清洗儀、高速多功能粉碎機(jī)BL-200型。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；檢測波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.3.2 對照品溶液的配制 稱取烘干至恒重的對照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制對照品母液；取對照品母液1 mL，用色譜純甲醇定容至5 mL，得濃度為0.032 4 mg/mL的對照品工作液。

1.3.3 樣品前處理 取樣品粉碎，過100目篩，烘干至恒重，稱取1.000 g左右樣品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡數(shù)分鐘，超聲提取2次，每次30 min，過濾，合并濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，待測。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)分析

取上述對照品溶液，分別進(jìn)樣1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，其線性回歸方程為Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，線性范圍為0.032 4～0.486 0 μg。

取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次5 μL，以峰面積計(jì)算，其RSD為1.09%，表明精密度良好；取同一批樣品5份，按“1.3.3”制備樣品溶液并測定含量，其RSD為0.80%，表明重復(fù)性良好；取對照品溶液，分別于0～48 h進(jìn)樣5 μL，計(jì)算峰面積的RSD為1.95%，表明樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

稱取已知含量的喜馬拉雅紫茉莉根（同一批次）5份，加入對照品母液2.45 mL，按“1.3.3”處理，結(jié)果見表1。

2.2 樣品測定

喜馬拉雅紫茉莉根一般秋末采收，本試驗(yàn)采集的喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橐荒晟斯しN植幼苗，采收時(shí)間為2012年9月10日。按“1.3.3”制備樣品，并進(jìn)樣分析，對照品溶液及樣品溶液的HPLC圖見圖2。采用外標(biāo)峰面積法，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算，得樣品中Boeravinone C含量為0.397 mg/g。

3 小結(jié)與討論

喜馬拉雅紫茉莉產(chǎn)于西藏東部和四川西北部，基本呈零星分布，嚴(yán)重制約以喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橹饕系牟厮幍难芯颗c開發(fā)利用。索朗其美等[9]采用紫外分光光度法測定了野生和人工種植的喜馬拉雅紫茉莉中的黃酮含量，但黃酮類化合物廣泛存在于植物中，以總黃酮含量擬定喜馬拉雅紫茉莉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)略顯粗糙。本文建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測定方法。經(jīng)方法學(xué)考察，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系，具有較高的精確度和準(zhǔn)確度，平均回收率為97.2%，樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。該方法樣品制備方法簡單，分析時(shí)間較短（約20 min），可用于喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的檢測。近期研究表明，Boeravinone C可能是喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤的主要活性成分。該方法的建立，可為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量準(zhǔn)確評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳廣迪，馮慎遠(yuǎn).藏藥五根散對腦外傷后綜合征患者智能、記憶力影響的臨床觀察[J].中國中藥雜志，2003，28（1）：90-91.

[2] WANG Y F， CHEN J J， YANG Y Z， et al. New Rotenoids from Roots of Mirabilis jalapa[J]. Helvetica Chimica Acta， 2002， 85（8）： 2342-2348.

[3] 范海霞.喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤活性成分研究[D].重慶：西南大學(xué)，2012.

[4] 王治平，李衛(wèi)民，高 英，等.HPLC同時(shí)測定不同產(chǎn)地葛根中6種主要異黃酮類成分的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013， 19（8）：125-128.

[5] 翟 瑤，鐘 文，林鵬程.UV法和HPLC法測定藏藥多腺懸鉤子中總黃酮及蘆丁的含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（9）：2144-2145.

[6] 黃秋潔，葉 勇，歐賢紅，等.HPLC法測定瑤族藤茶中沒食子酸的含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，52（24）：5764-5765.

[7] 李耀利，尚明英，耿長安，等.云南產(chǎn)青葉膽及其習(xí)用品藥材中5種成分的HPLC含量測定[J].中國中藥雜志，2013，38（9）： 1394-1400.

[8] 王 丹，張秋燕，楊興鑫，等.基于HPLC指紋圖譜的黃芩道地藥材與非道地藥材的鑒別研究[J].中國中藥雜志，2013，38（12）： 1951-1960.

[9] 索朗其美，達(dá)瓦潘多，劉 青，等.紫外分光光度法測定西藏野生和人工種植喜馬拉雅紫茉莉中總黃酮含量[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2012（4）：60-62.

（責(zé)任編輯 周有祥）endprint

摘要：建立HPLC測定喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]藥材中Boeravinone C含量的方法。色譜柱為Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-水（70∶30，V/V），流速為0.8 mL/min，檢測波長294 nm。結(jié)果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2=0.999 9）；精確度和準(zhǔn)確度良好，平均回收率為97.2%。該方法快速、簡單，可用于喜馬拉雅紫茉莉藥材的質(zhì)量評價(jià)。

關(guān)鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色譜

中圖分類號：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5536-03

喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]為紫茉莉科植物，其根的藏藥名為“阿夏尕那哈”，是傳統(tǒng)藏藥的五根之一[1]。藏醫(yī)名著《藍(lán)琉璃》中記載“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒氣病、浮腫、黃水病，破結(jié)石、腫瘤”。Wang等[2]首先從紫茉莉（M. jalapa L.）根中分離得到了一種魚藤酮類化合物——Boeravinone C，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。范海霞[3]也從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了Boeravinone C，并證實(shí)Boeravinone C對肺癌細(xì)胞株A549、肝癌細(xì)胞株Hep G-2、宮頸癌細(xì)胞株Hela有較強(qiáng)的抑制作用。本課題組從2007年開始研究喜馬拉雅紫茉莉的人工種植，經(jīng)過近6年探索，已系統(tǒng)掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植、水肥管理、病蟲害防治等關(guān)鍵技術(shù)，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產(chǎn)量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現(xiàn)狀。Boeravinone C有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是測定藥用植物有效成分的常用方法[4-7]，本試驗(yàn)建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測定方法，以期為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量評價(jià)提供方法[8]，為相關(guān)的藏藥開發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

喜馬拉雅紫茉莉藥材于2012年9月10日采自西藏林芝地區(qū)八一鎮(zhèn)章麥村藏藥材人工種植與示范基地，經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。樣品保存于西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

Boeravinone C對照品由西南大學(xué)藥學(xué)院陳敏教授實(shí)驗(yàn)室自制（純度>98%）。甲醇（色譜純）購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，去離子水購于杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司

1.2 儀器

島津LC-20高效液相色譜儀（LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動進(jìn)樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、KQ5200型超聲波清洗儀、高速多功能粉碎機(jī)BL-200型。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；檢測波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.3.2 對照品溶液的配制 稱取烘干至恒重的對照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制對照品母液；取對照品母液1 mL，用色譜純甲醇定容至5 mL，得濃度為0.032 4 mg/mL的對照品工作液。

1.3.3 樣品前處理 取樣品粉碎，過100目篩，烘干至恒重，稱取1.000 g左右樣品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡數(shù)分鐘，超聲提取2次，每次30 min，過濾，合并濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，待測。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)分析

取上述對照品溶液，分別進(jìn)樣1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，其線性回歸方程為Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，線性范圍為0.032 4～0.486 0 μg。

取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次5 μL，以峰面積計(jì)算，其RSD為1.09%，表明精密度良好；取同一批樣品5份，按“1.3.3”制備樣品溶液并測定含量，其RSD為0.80%，表明重復(fù)性良好；取對照品溶液，分別于0～48 h進(jìn)樣5 μL，計(jì)算峰面積的RSD為1.95%，表明樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

稱取已知含量的喜馬拉雅紫茉莉根（同一批次）5份，加入對照品母液2.45 mL，按“1.3.3”處理，結(jié)果見表1。

2.2 樣品測定

喜馬拉雅紫茉莉根一般秋末采收，本試驗(yàn)采集的喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橐荒晟斯しN植幼苗，采收時(shí)間為2012年9月10日。按“1.3.3”制備樣品，并進(jìn)樣分析，對照品溶液及樣品溶液的HPLC圖見圖2。采用外標(biāo)峰面積法，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算，得樣品中Boeravinone C含量為0.397 mg/g。

3 小結(jié)與討論

喜馬拉雅紫茉莉產(chǎn)于西藏東部和四川西北部，基本呈零星分布，嚴(yán)重制約以喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橹饕系牟厮幍难芯颗c開發(fā)利用。索朗其美等[9]采用紫外分光光度法測定了野生和人工種植的喜馬拉雅紫茉莉中的黃酮含量，但黃酮類化合物廣泛存在于植物中，以總黃酮含量擬定喜馬拉雅紫茉莉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)略顯粗糙。本文建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測定方法。經(jīng)方法學(xué)考察，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系，具有較高的精確度和準(zhǔn)確度，平均回收率為97.2%，樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。該方法樣品制備方法簡單，分析時(shí)間較短（約20 min），可用于喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的檢測。近期研究表明，Boeravinone C可能是喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤的主要活性成分。該方法的建立，可為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量準(zhǔn)確評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳廣迪，馮慎遠(yuǎn).藏藥五根散對腦外傷后綜合征患者智能、記憶力影響的臨床觀察[J].中國中藥雜志，2003，28（1）：90-91.

[2] WANG Y F， CHEN J J， YANG Y Z， et al. New Rotenoids from Roots of Mirabilis jalapa[J]. Helvetica Chimica Acta， 2002， 85（8）： 2342-2348.

[3] 范海霞.喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤活性成分研究[D].重慶：西南大學(xué)，2012.

[4] 王治平，李衛(wèi)民，高 英，等.HPLC同時(shí)測定不同產(chǎn)地葛根中6種主要異黃酮類成分的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013， 19（8）：125-128.

[5] 翟 瑤，鐘 文，林鵬程.UV法和HPLC法測定藏藥多腺懸鉤子中總黃酮及蘆丁的含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（9）：2144-2145.

[6] 黃秋潔，葉 勇，歐賢紅，等.HPLC法測定瑤族藤茶中沒食子酸的含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，52（24）：5764-5765.

[7] 李耀利，尚明英，耿長安，等.云南產(chǎn)青葉膽及其習(xí)用品藥材中5種成分的HPLC含量測定[J].中國中藥雜志，2013，38（9）： 1394-1400.

[8] 王 丹，張秋燕，楊興鑫，等.基于HPLC指紋圖譜的黃芩道地藥材與非道地藥材的鑒別研究[J].中國中藥雜志，2013，38（12）： 1951-1960.

[9] 索朗其美，達(dá)瓦潘多，劉 青，等.紫外分光光度法測定西藏野生和人工種植喜馬拉雅紫茉莉中總黃酮含量[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2012（4）：60-62.

（責(zé)任編輯 周有祥）endprint

摘要：建立HPLC測定喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]藥材中Boeravinone C含量的方法。色譜柱為Kromosil 100-5 C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-水（70∶30，V/V），流速為0.8 mL/min，檢測波長294 nm。結(jié)果表明，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2=0.999 9）；精確度和準(zhǔn)確度良好，平均回收率為97.2%。該方法快速、簡單，可用于喜馬拉雅紫茉莉藥材的質(zhì)量評價(jià)。

關(guān)鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]；Boeravinone C；高效液相色譜

中圖分類號：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5536-03

喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica（Edgew.） Heim.]為紫茉莉科植物，其根的藏藥名為“阿夏尕那哈”，是傳統(tǒng)藏藥的五根之一[1]。藏醫(yī)名著《藍(lán)琉璃》中記載“阿夏尕那哈根大，味甘，治下半身寒氣病、浮腫、黃水病，破結(jié)石、腫瘤”。Wang等[2]首先從紫茉莉（M. jalapa L.）根中分離得到了一種魚藤酮類化合物——Boeravinone C，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。范海霞[3]也從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了Boeravinone C，并證實(shí)Boeravinone C對肺癌細(xì)胞株A549、肝癌細(xì)胞株Hep G-2、宮頸癌細(xì)胞株Hela有較強(qiáng)的抑制作用。本課題組從2007年開始研究喜馬拉雅紫茉莉的人工種植，經(jīng)過近6年探索，已系統(tǒng)掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植、水肥管理、病蟲害防治等關(guān)鍵技術(shù)，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產(chǎn)量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現(xiàn)狀。Boeravinone C有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。HPLC法是測定藥用植物有效成分的常用方法[4-7]，本試驗(yàn)建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測定方法，以期為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量評價(jià)提供方法[8]，為相關(guān)的藏藥開發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

喜馬拉雅紫茉莉藥材于2012年9月10日采自西藏林芝地區(qū)八一鎮(zhèn)章麥村藏藥材人工種植與示范基地，經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heim.]。樣品保存于西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

Boeravinone C對照品由西南大學(xué)藥學(xué)院陳敏教授實(shí)驗(yàn)室自制（純度>98%）。甲醇（色譜純）購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，去離子水購于杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司

1.2 儀器

島津LC-20高效液相色譜儀（LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動進(jìn)樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器） ，Mettler toledo PL203分析天平、Mettler toledo B-S天平、BUCHI B-491旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、KQ5200型超聲波清洗儀、高速多功能粉碎機(jī)BL-200型。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 Kromosil 100-5 C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（70∶30，V/V）；流速0.8 mL/min；檢測波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.3.2 對照品溶液的配制 稱取烘干至恒重的對照品4.05 mg，以甲醇定容至25 mL，配制對照品母液；取對照品母液1 mL，用色譜純甲醇定容至5 mL，得濃度為0.032 4 mg/mL的對照品工作液。

1.3.3 樣品前處理 取樣品粉碎，過100目篩，烘干至恒重，稱取1.000 g左右樣品，共3份，加入20 mL甲醇浸泡數(shù)分鐘，超聲提取2次，每次30 min，過濾，合并濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，待測。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)分析

取上述對照品溶液，分別進(jìn)樣1～15 μL（n=3），以Boeravinone C含量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，其線性回歸方程為Y=4.286×105x-3.997×103，R2=0.999 9，線性范圍為0.032 4～0.486 0 μg。

取對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次5 μL，以峰面積計(jì)算，其RSD為1.09%，表明精密度良好；取同一批樣品5份，按“1.3.3”制備樣品溶液并測定含量，其RSD為0.80%，表明重復(fù)性良好；取對照品溶液，分別于0～48 h進(jìn)樣5 μL，計(jì)算峰面積的RSD為1.95%，表明樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

稱取已知含量的喜馬拉雅紫茉莉根（同一批次）5份，加入對照品母液2.45 mL，按“1.3.3”處理，結(jié)果見表1。

2.2 樣品測定

喜馬拉雅紫茉莉根一般秋末采收，本試驗(yàn)采集的喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橐荒晟斯しN植幼苗，采收時(shí)間為2012年9月10日。按“1.3.3”制備樣品，并進(jìn)樣分析，對照品溶液及樣品溶液的HPLC圖見圖2。采用外標(biāo)峰面積法，根據(jù)線性回歸方程計(jì)算，得樣品中Boeravinone C含量為0.397 mg/g。

3 小結(jié)與討論

喜馬拉雅紫茉莉產(chǎn)于西藏東部和四川西北部，基本呈零星分布，嚴(yán)重制約以喜馬拉雅紫茉莉?yàn)橹饕系牟厮幍难芯颗c開發(fā)利用。索朗其美等[9]采用紫外分光光度法測定了野生和人工種植的喜馬拉雅紫茉莉中的黃酮含量，但黃酮類化合物廣泛存在于植物中，以總黃酮含量擬定喜馬拉雅紫茉莉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)略顯粗糙。本文建立了喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C的HPLC測定方法。經(jīng)方法學(xué)考察，Boeravinone C含量在0.032 4～0.486 0 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系，具有較高的精確度和準(zhǔn)確度，平均回收率為97.2%，樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。該方法樣品制備方法簡單，分析時(shí)間較短（約20 min），可用于喜馬拉雅紫茉莉根中Boeravinone C含量的檢測。近期研究表明，Boeravinone C可能是喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤的主要活性成分。該方法的建立，可為喜馬拉雅紫茉莉的人工種植和藥材的質(zhì)量準(zhǔn)確評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

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（責(zé)任編輯 周有祥）endprint